人脑胶质瘤中cyclin D1/p16-pRB路径异常以及细胞增殖和凋亡的变化

目的 :研究G1 →S调控点中细胞周期数D1(cyclinD1)、p16及视网膜母细胞瘤蛋白 ( pRB)基因在胶质瘤中表达情况 ,分析与细胞增殖和凋亡的关系 ,探讨肿瘤发生的原因。方法 :37例人脑胶质瘤标本按WHO分类标准 ( 1990 )分为 :星形细胞瘤 2 5例 (纤维型 7例 ,原浆型 6例 ,间变型 12例 ) ,胶质母细胞瘤 12例 (包括GBM 4例 )。正常对照脑组织 10例。cyclinD1 、p16、pRB和Ki 6 7的表达用免疫组化的方法 ,凋亡细胞通过TUNEL进行检测 ,细胞增殖和凋亡的评估分别用Ki 6 7LI和凋亡指数 (AI)。结果 :三种因子在胶质瘤中都存在着异常 ,其中cyclinD1表现为过度表达 ( 2 9 37,78.4%) ,p16、pRB表现为缺失 ( 2 1 37,5 6 .8%和 13 37,35 .1%) ,且都与肿瘤分型有关 ,在恶性肿瘤中更加明显 ;pRB路径的异常在胶质瘤中更为频发 ,与肿瘤恶化有关 ;pRB路径异常时 ,Ki 6 7LI和AI均明显增高 ;在星形细胞的肿瘤中 ,凋亡发生比较少见 (星形细胞瘤 :0 .0 10± 0 .0 0 2 ;胶质母细胞瘤 :0 .0 5 7± 0 .0 16 ) ,与肿瘤分型有关。结论 :cyclinD1 p16 pRB路径的异常与胶质瘤的发生和生长关系密切。     

胶质瘤C6肿瘤干细胞蛋白质组学初步分析

目的: 运用蛋白质组学的方法,对C6脑肿瘤干细胞(BTSC)和非BTSC细胞进行配对研究,建立差异性蛋白文库,为探讨胶质瘤病因提供初步线索.方法: 在C6细胞中,参照神经干细胞(NSC)培养条件进行培养.出现典型的神经球后,利用免疫荧光染色检测细胞标记,包括nestin,神经元特异性烯醇化酶(NSE),神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等,以及诱导分化等方法,鉴定神经球细胞是否为BTSC.收集神经球和非神经球细胞,进行配对,利用双向凝胶电泳(2D-PAGE)检测细胞总体蛋白,分析差异性蛋白点.结果: C6细胞在NSC培养条件下,出现比较典型的神经球.神经球细胞nestin阳性,NSE和GFAP阴性.经诱导发生分化,分化后细胞形态与C6相似,能够表达NSE和GFAP等多种表型细胞标记,证实这种神经球细胞为肿瘤干细胞.在2D-PAGE结果中,C6肿瘤干细胞和非干细胞配对比较,有统计学差异(P＜0.05)的蛋白点共有84个,大于2倍差异蛋白点有50个,大于3倍的有17个,大于4倍的有6个,最大差异倍数为11.607 2.在BTSC中,有55个差异蛋白表达增多(上调),29个蛋白表达下降(下调).结论: 胶质瘤C6细胞系中存在肿瘤干细胞,在蛋白质组学方面与非BTSC细胞有明显差异.     

靶向miR-221 siRNA表达载体的构建及有效靶序列的筛选和表达

目的 构建靶向miR-221的siRNA表达载体,同时筛选出一条抑制效率最好的靶序列,为研究RNAi在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础.方法 根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接入siRNA表达质粒pGCSIL-GFP,同时构建miR-221表达载体pEGFP-miR-221,共同转染293T细胞,Western blot检测转染后293T细胞中Flag蛋白表达,间接反映各靶序列抑制效率,最后将筛选出的抑制效率最好的质粒转染U87胶质瘤细胞,应用细胞增殖曲线及流式细胞仪检测其对U87细胞生长的影响.结果 重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,并筛选出1号靶序列对miR-221抑制率最高,该组Flag蛋白的表达量仅为对照组的34.3%,同时该序列能有效抑制U87胶质瘤细胞的生长并诱导细胞凋亡,凋亡率达21.89%.结论 成功构建了靶向miR-221的siRNA 表达载体,并筛选出一个抑制效率最好的序列,在体外实验中该序列能有效抑制U87细胞的生长.     

重型颅脑外伤后病人的营养供给

24名遭受严重颅脑损伤的病人(20—48岁)在伤后的前8天内均接受了本实验组所给予的额定营养及一些碳水化合物,随后进行了体内氨基酸及蛋白质的监测。其他一些治疗包括占位性颅内血肿的外科清除减压术、大剂量地塞米松及至少5天的控制性过度换气。结果表明,本实验组所给予的额定营养是合理的。     

胶质瘤中PKCα表达及与细胞增殖和凋亡的关系

目的探讨人脑胶质瘤中 PKCα的表达情况,以及与细胞增殖和凋亡的关系.方法 37例人脑胶质瘤标本,星形细胞瘤25例和胶质母细胞瘤12例,正常脑组织10例作为对照.PKCα和Ki-67的检测用免疫组化,细胞凋亡用TUNEL.用Ki-67 LI和AI对增殖和凋亡进行评估.结果 PKCα在胶质瘤及正常组织中均有表达,前者为67.6%,后者为30.0%,二者有显著性差异,星形细胞瘤阳性率为60%,胶质母细胞瘤为83.3%,不同肿瘤分型中PKCα表达有差异,PKCα表达与细胞增殖和生长显著相关,与凋亡无明显相关.结论人脑胶质瘤中PKCα过度表达,与肿瘤发生和生长关系密切.     

经乙状窦前迷路后联合入路切除跨天幕肿瘤

桥脑小脑角及颈骨岩尖部的肿瘤以神经纤维瘤、脑膜瘤、上皮样囊肿及脊索瘤等为常见，大部分属良性肿瘤，如手术能达到全切除，其预后是满意的。但此两部位的肿瘤在晚期常生长巨大，并穿越天幕向幕上或下发展，给手术的全切除带来了很大的困难。本科自1994年10月至1997年7月共收治此类跨天幕肿瘤9例，应用乙状窦前迷路后联合人路，均达到肿瘤全切除，效果满意，报告如下。临床资料一、一般资料：9例患者中，男《例，女5例。年龄24～60岁，平均《02岁。其中听神经瘤3例，三叉神经纤维瘤3例，天幕复发性脑膜瘤喇，桥脑小脑角脑膜瘤1例，岩斜坡…     

颅内肿瘤端粒酶活性的表达及其意义

目的 :明确颅内肿瘤中端粒酶的活性情况 ,为胶质瘤的早期诊断及综合治疗提供依据。方法 :采用 TRAP-银染法检测70例颅内肿瘤中端粒酶活性表达情况。统计学处理采用χ2 检验。结果 :脑膜瘤及垂体腺瘤端粒酶活性检测均为阴性 ,5 0例胶质瘤 (KERNOHAN分级 )端粒酶活性检测阳性率为 44 % , 级为 3/ 16 (18.8% ) , 级为 3/ 12 (2 5 .0 % ) , 级为 9/ 14(6 4.3% ) , 级为 7/ 8(87.5 % ) ,胶质瘤分级越高 ,端粒酶活性检出率就越高 (P<0 .0 0 5 ) , 级以上恶性颅内肿瘤中 (包括转移性低分化癌 )端粒酶活性表达阳性 19/ 2 5 (76 .0 % ) ,明显高于 级以下胶质瘤 6 / 2 8(2 1.4% ,P<0 .0 0 5 )。结论 :端粒酶是促进胶质瘤发展的主要因素之一 ,且可能是新的恶性颅内肿瘤的瘤标 ,可以用于恶性颅内肿瘤的早期诊断。     

人脑肿瘤端粒酶活性的研究

端粒是真核染色体末端的特殊结构,人端粒由6个碱基重复序列(TTAGGG)和结合蛋白组成 [1].端粒有重要的生物学功能,能够稳定染色体,防止其末端融合;保护染色体结构基因;调节正常细胞生长[2].     

反义miR-21抑制异种移植U87人脑胶质瘤生长的体内研究

目的 探讨敲低miR-21表达抑制裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤生长的疗效和机制.方法 原位注射miR-21反义寡聚核苷酸(AS-miR-21)治疗裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤.定时测量肿瘤大小评估原位注射AS-miR-21的治疗效果.使用RT-PCR和原位杂交方法 鉴定治疗后miR-21表达水平,采用HE染色和免疫组织化学染色(增殖细胞核抗原、细胞周期抑制因子-21、基质金属蛋白酶-9和隔蛋白-7)评价治疗后肿瘤生物学性状的变化,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡. 结果 肿瘤生长曲线显示AS-miR-21治疗组肿瘤生长速度及体积明显小于对照组与无义序列治疗组,差异有统计学意义(F=6.056,P=0.007);RT-PCR检测显示AS-miR-21治疗组miR-21表达下调为对照组的(0.031±0.008)%;原位杂交显示AS-miR-21治疗组miR-21表达水平较对照组与无义序列治疗组下调:组织病理学检测表明AS-miR-21治疗后肿瘤恶性度降低;TUNEL法检测可见AS-miR-21治疗组细胞凋亡数明显高于对照组与无义序列治疗组,差异有统计学意义(F=141.021,P=0.000). 结论 以miR-21作为靶点治疗异种移植U87人脑胶质瘤效果令人满意,miR-21可作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点.     

人脑垂体腺瘤中Myc/Max/Mxil网络与其生物学行为及预后判断

目的研究人垂体腺瘤中Myc/Max/Mxi1网络的异常.方法58例垂体腺瘤分组非侵袭性与侵袭性垂体腺瘤;小腺瘤与大腺瘤;复发性与非复发性垂体腺瘤.采用免疫组化ABC法检测不同分组中的Myc,Mxi1和Max的表达.结果垂体腺瘤中Myc的过表达率45%,Mxil和Max的缺失率为90%和86%.Myc阳性率及表达强度在侵袭组与非侵袭组,复发组与非复发组中均差异有显著性意义.58例肿瘤组织中31例有1种以上的因子异常,而正常脑组织中仅1例异常.结论Myc/Max/Mxil网络异常与垂体腺瘤的发生和发展关系密切,Myc/Max/Mxi1网络系统具有调节垂体肿瘤细胞的增殖与分化功能.Myc的表达是预测垂体腺瘤生物学行为及预后的良好指标.