建立口内菌斑模型研究菌斑超微结构

目的:系统了解菌斑形成的超微结构。方法:建立一种口内的菌斑模型,并将1、5、9d形成的菌斑标本制成电镜切片后用透射电镜观察。结果:显示初期菌斑的细菌较少,主要为球状菌。随着时间的延长,细菌的数量和种类开始增加,出现丝状菌和杆状菌。成熟菌斑结构是两侧为丝状菌中间为球状菌的栅栏状结构,其中部分细菌会出现坏死的现象。结论:所建立的菌斑模型较接近天然菌斑结构,具有一定的参考价值。     

甲状旁腺激素对人牙乳头间充质细胞矿化能力的影响

目的：观察体外培养的人牙乳头间充质细胞（ｄｅｎｔａｌ ｐａｐｉｌｌａ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｃｅｌｌ,ＤＰＭＣ）矿化特征及甲状旁腺激素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＰＴＨ）对人ＤＰＭＣ矿化特征的影响,以深入研究成牙本质细胞的分化和牙本质形成。方法：第４代人ＤＰＭＣ在含３３．３ｎｍｏｌ／Ｌ ＰＴＨ的矿化液中连续培养３５ｄ后,进行组织学染色、透射电镜（ＴＥＭ）和扫描电镜（ＳＥＭ）观察。用     

牛牙骨质附着蛋白N末端氨基酸序列分析

目的 :对牛牙骨质附着蛋白进行N末端氨基酸序列分析 ,为牙骨质附着蛋白的克隆表达提供一定的理论依据。方法 :应用乙酸和盐酸胍提取法获取牛牙骨质附着蛋白 ,鉴定纯度后进行N末端氨基酸序列分析。结果 :所获得的牛牙骨质附着蛋白纯度 >95 % ,N末端 15个氨基酸残基为 :Ile、Pro、Leu、Asp、Pro、Val、Ala、Gly、Cys、Lys、Glu、Pro、Ala、Ala、Asp。 结论 :测得的氨基酸序列具有特异性。     

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根管预备的生物学目标是尽可能地控制根管系统的感染,然而,由于根管系统的无规律性,如根管间狭长间隙(narrow isthmi)和根尖三角区(apical deltas)等,单纯器械预备不可能彻底清理.     

口腔微生态中变异链球菌密度感应系统信号传导的研究进展

口腔微生态环境是由许多微生物组成,这些细菌长期在口腔内定居、生长繁殖、不断地进行竞争和拮抗,其间竞争主要是靠密度感应系统.细菌在微生态环境中达到一定浓度后,就产生调控性胞外化学信号,当这些信号分子的浓度达到一定数量值时,菌内的靶基因或者相关基因就被激活,或被抑制.通过这些信号可以调控细菌的一些功能基因,例如形成生物膜、产生细菌素、孢子、产酸、毒力反应等,从而增强细菌的生存力.龋病主要的致龋菌是变异链球菌,变异链球菌可以通过密度感应系统根据周围环境的变化来进行自身调节,以便更好的生存.现将变异链球菌密度感应信号传导的研究进展作一综述.     

釉基质蛋白(EMPs)对大鼠牙髓干细胞体外增殖、分化能力的影响

目的：研究釉基质蛋白（Enamel Matrix Proteins,EMPs）对大鼠牙髓干细胞（rat Dental Pulp Stem Cells,rDPSCs）体外增殖分化能力的影响。方法：酶消化培养法获得大鼠牙髓干细胞,有限稀释法分离纯化大鼠牙髓干细胞,形态学观察,计算细胞克隆形成率。乙酸法制备EMPs,用不同浓度的EMPs进行诱导,利用四唑盐比色法（MTD检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化。检测诱导后培养液中的碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,ALP）。免疫组化染色和RT-PCR方法检测牙本质涎蛋白（dentin sialoprotein,DSP）、牙本质基质蛋白1（dentin matrixprotein 1,DMP—1）和牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphopmtein,DSPP）的mRNA表达。结果：大鼠牙髓干细胞呈集落状生长,在体外具有一定的克隆形成能力。EMPs对大鼠牙髓干细胞的增殖有促进作用,并呈现剂量和时间依赖性。200gg／ml EMPs组可显著促进大鼠牙髓干细胞的增殖。EMPs作用组能显著提高大鼠牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性。经细胞因子刺激后细胞表达DSP、DMP-1蛋白和DSPP mRNA。结论：EMPs在大鼠牙髓干细胞增殖和向成牙本质细胞分化方面具有积极的作用。     

Ⅰ型变链素基因片段原核表达的构建

目的：获得编码变形链球菌CH43变链素Ⅰ前体肽基因片段，构建Ⅰ型变链素的原核表达载体，优化表达条件。 方法：实验于2004—09／2005—06在解放军第四军医大学秦都口腔医院牙体牙髓病实验室地点完成。①实验材料：streptococcus Mutan CH43菌株由Dr．P．g．Caufield惠赠。E．coliTOP10 E.coli DH5α及表达载体pProEX由秦都口腔医院牙体牙髓病实验室保存。②实验过程：厌氧条件下培养变形链球菌CH43，通过碱裂解法得到其基因组DNA。利用聚合酶链反应技术从变形链球菌CH43基因库中扩增出编码变链素Ⅰ前体肽mutA基因片段相应大小的DNA片段,将片段与pMD18-T载体连接后测序以检测序列正确性。将测序正确的Ⅰ型变链素mutA按照BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pPr0EX-HTb，将连接产物转化入E．coli DH5d，挑出阳性克隆，以A600从0．406～1．666七个不同浓度，异丙基β—D硫代半乳糖苷（终浓度设成1．0，1．4，1．8，2．0，2．5mmol，L5个梯度）诱导表达重组的带有6个组氨酸标签的融合蛋白，诱导时间分别3，6，18h。③实验评估：观察mutA片段的扩增及序列测定结果；表达载体的构建结果；融合蛋白在大肠杆菌中的表达及表达条件的优化。 结果：①聚合酶链反应获得的mutA序列与GenBank报道的一致（为147bp）。②Ⅰ型变链素的mutA基因片断被成功克隆入原核表达载体pProEX-HTb中，在A600达到1．000以上，异丙基β—D硫代半乳糖苷终浓度1．2mmol，L，30℃诱导6h，蛋白表达量较佳，稳定可重复。 结论：成功克隆变形链球菌CH43变链素ⅠmutA基因片段，构建表达了Ⅰ型变链素的融合蛋白。     

牙胚组织中成釉蛋白表达免疫组织化学和原位杂交的特点

目的：观察人牙胚组织中成釉蛋白的表达特点。 方法：实验于2002—02／04在解放军第四军医大学口腔内科实验室完成。取孕5个月流产男性胎儿（产妇知情同意），截取上、下颌骨，常规方法制备人牙胚组织石蜡切片。用兔抗人AMBN多克隆抗体，对人牙胚组织石蜡切片和正常狗牙周组织石蜡切片进行免疫组织化学染色。标记人成釉蛋白cDNA探针，对人牙胚组织石蜡切片进行原位杂交。 结果：①免疫组织化学染色发现成釉蛋白由内釉上皮细胞在分化为成熟成釉细胞前开始表达，分泌期成釉细胞高度表达并持续整个釉质形成期，新形成的牙釉质染色阳性；成牙本质细胞在分泌牙本质基质之前开始表达成釉蛋白。在牙本质形成过程中成牙本质细胞持续表达成釉噩白，呈弱阳性，前期牙本质中呈弱阳性染色；上皮根鞘细胞染色阳性。狗牙周组织染色发现牙骨质表层细胞呈强阳性染色，新形成的牙骨质中可见阳性染色颗粒，呈网状分布。②对人牙胚组织石蜡切片的原位杂交显示，成釉蛋白在成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞中有表达，表达部位与免疫组织化学结果一致。 结论：内釉上皮首先表达成釉蛋白，之后前成牙本质细胞达成釉蛋白。成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞表达成釉蛋白。     

甲状旁腺激素对体外培养的大鼠牙胚分化的影响

目的：观察甲状腺旁腺激素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＰＴＨ）对体外培养１７ｄ的胎鼠下凳第一磨牙牙胚分化发育的影响,探讨ＰＴＨ在成牙本质细胞分化和牙本质形成中的作用。方法：器官培养、组织学观察和透射电本外培养的牙可出现顾牙本质细胞分化和牙本质形成。ＰＴ可促进成牙本质细胞的分化,能活跃状态。结论：牙胚培养在观察生长因子对牙齿发育的作用研究是有效的,ＰＴＨ在牙齿发育中具有一定的促进作用。     

防止前牙牙髓治疗后牙冠变色的方法探讨

在前牙去髓术或根管治疗术后，由于残留根髓的渗血或炎性尖周病变的渗出，导致牙齿在根管充填或换药时出现牙冠变色现象。本文采用髓室内粘结剂固化封闭的方法，旨在消除前牙牙冠变色这一问题。１材料和方法１．１材料可见光固化用粘结剂和酸蚀剂。１．２标本选择需作去髓...