Ad-VEGFP-CD/TK系统诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨腺病毒介导的VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对胃癌细胞SGC-7901的体外杀伤作用.方法 用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的SGC-7901细胞,荧光显微镜观察其感染效率,然后给予前药GCV和5-FC,用光镜、透射电镜观察及流式细胞术等方法观察细胞凋亡、细胞周期、细胞内DNA含量及钙离子浓度的变化.结果 腺病毒的感染率随病毒滴度的增高而递增,在感染复数为100时,前药GCV和5-FC在一定浓度搭配范围内呈剂量和时间依赖性地诱导SGC-7901细胞凋亡,电镜下可见细胞凋亡的典型改变.用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1期比率增多,G2-M及S期细胞减少;此外,前药还可以引起细胞内Ca2 浓度持续增加.结论 VEGF启动子可调控双自杀基因系统选择性诱导表达VEGF的SGC-7901细胞凋亡,其机制与细胞内钙离子浓度升高有关.     

“三管一孔一脏器”技术在免气腹腹腔镜胆囊切除术中的应用

目的研究“三管一孔一脏器”技术在免气腹腹腔镜胆囊切除术中的应用效果。方法利用自制免气腹装置应用“三管一孔一脏器”技术完成免气腹腹腔镜胆囊切除术12例并进行分析。结果12例中,除1例中转气腹外,11例均顺利完成LC手术,无胆道损伤,无胆漏。结论“三管一孔一脏器”技术方法适用于免气腹腹腔镜胆囊切除术。     

KDR启动子驱动双自杀基因靶向杀伤人胃癌细胞的作用

目的:探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901的靶向杀伤作用.方法:应用重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染实验组SCG7901细胞株和对照组HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞杀伤效应及其旁观者效应.结果:携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和未转染SCG7901的细胞在细胞生长方面无显著性差异(t=0.224,P=0.823).已转染腺病毒的HepG2细胞和未转染HepG2的细胞在细胞生长方面也无显著性差异(t=0.120,P=0.904).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性,SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性(F=109.43,P=0.000).融合基因的疗效优于单一自杀基因(F=162.22,P=0.000).将感染腺病毒细胞与未感染细胞以不同比例混和培养,观察到该体系明显的旁观者效应.结论:KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并存在旁观者效应.     

腹腔镜改良IPOM法治疗腹股沟疝39例

探讨改良腹腔镜补片植入术(IPOM)的临床效果。采用腹腔镜腹股沟疝修补术加补片植入术治疗腹股沟疝39例,植入补片采用钉合法与锁边缝合法相结合。39例均在腹腔镜下完成,手术时间为31~63 min,平均41±7 min,无血管损伤、无顽固性疼痛、无感染和排异反应。术后随访3~12个月,未见复发。腹腔镜改良型IPOM法操作简便,手术时间短,恢复快,效果良好,适合临床开展。     

Delta吻合在全腹腔镜远端胃癌根治术Billroth-I重建的应用

目的：探讨Delta吻合术在完全腹腔镜下远端胃癌根治术（TLDG）Billroth‐I重建的安全性及近期疗效。方法回顾性分析2014年1～12月于该院胃肠外科分别行T LDG术Delta吻合（T LDG组,35例）与腹腔镜辅助远端胃癌根治术（L ADG ）腹腔外吻合（L ADG组,35例）的患者临床资料,比较两组患者的术中出血量、手术时间、胃肠功能恢复时间、住院时间、术后病理结果及住院总费用等临床指标。结果70例患者手术均顺利完成,无中转开腹,无死亡病例。T LDG组术后均未发生吻合口瘘、出血及狭窄;L ADG组术后出现1例胃瘫、1例吻合口出血、2例吻合口瘘。两组患者术中出血量、肿瘤大小、淋巴结清扫数及远、近端切缘距离比较,差异均无统计学意义（ P＞0．05）;T LDG组手术时间、消化道重建时间、第1次通气时间、进食流质时间及术后住院时间均较LADG组短,住院总费用较LADG组高,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 Delta吻合技术应用于LADG是安全可行的,并有较好的近期效果。     

血管内皮生长因子与nm23-H1基因在青年女性乳腺癌组织中的表达及其与预后之间的关系

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及nm23-H1基因在青年女性乳腺癌组织中的表达及其与预后间的关系。方法应用免疫组化方法检测48例青年女性、30例绝经后乳腺癌组织及10例乳腺纤维腺瘤组织中VEGF及nm23-H1基因的表达情况,分析他们之间及其与临床病理指标之间的关系,并随访患者5年生存率。结果青年组较绝经组患者淋巴转移率高(P<0.01);青年组与绝经组患者组织中,VEGF及nm23-H1的表达差异皆有显著性意义(P<0.01);青年组、绝经组以及乳腺纤维腺瘤组,两者表达差异也有显著性意义(P<0.01,P<0.01);各组中腋窝淋巴结转移者和未转移者VEGF及nm23-H1的表达差异均有显著性意义(P<0.01);各组中VEGF及nm23-H1的表达与组织分化程度无关(P>0.05);青年乳腺癌组织中VEGF与nm23-H1基因表达成负相关(P<0.01),随访发现:青年乳腺癌患者nm23-H1阳性者5年生存率显著高于p53阳性者生存率(P<0.05)。结论VEGF及nm23-H1基因的表达状况标志着青年乳腺癌恶性侵袭程度,因而二者可作为青年乳腺癌患者极有价值的生物学预后指标。     

双自杀基因重组腺病毒对胃癌细胞及血管内皮细胞的体外特异性杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的KDR启动子驱动CD/TK融合基因(AdKDR-CDglyTK)对胃癌细胞及血管内皮细胞的选择性杀伤作用。方法 选择表达KDR的MGC803细胞、ECV304细胞和不表达KDR的LS174T细胞,用腺病毒重组体AdEasy-KDR-CDglyTK和AdEasy-CMV-CDglyTK感染之,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测转基因细胞CDglyTK的表达,然后给予不同浓度的前药5-FC及GCV处理,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应。结果 两种重组体对各细胞株的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR检测发现:除感染AdKDR-CDglyTK的LS174T细胞外,感染AdCMV-CDglyTK的所有细胞及感染AdKDR-CDglyTK的MGC803细胞、ECV304细胞均有目的基因CDglyTK的表达。以感染复数为100的两种腺病毒分别感染各细胞株,其表现出对前药不同的敏感性:感染AdCMV-CDglyTK的所有细胞株和感染AdKDR-CDglyTK的MGC803细胞、ECV304细胞对前药具有较高的敏感性,且其敏感性差异无显著性意义(P>0.1);相比之下,感染AdKDR-CDglyTK的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.001)。双自杀基因的疗效优于任一单自杀基因的疗效(P<0.001)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应。结论 KDR基因启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达KDR胃癌细胞及血管内皮细胞。     

5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学对裸鼠人胃癌移植瘤的治疗作用

目的观察5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）介导的光动力学治疗对裸鼠人胃癌移植瘤的治疗作用。探索5-ALA介导的光动力学（PDT）治疗胃癌的可能机制。方法以MGC-803人胃癌细胞制备裸鼠人胃癌移植瘤模型：整体荧光成像系统下观察动物瘤体发出的荧光信号：测量荷瘤对照组、单纯激光组、单纯5-ALA组和5-ALA介导的PDT治疗组治疗后第1、3、7、14、21天的裸鼠肿瘤大小并计算肿瘤体积：末次测量后切除肿瘤行病理检查和透射电镜观察，TUNEL法检测组织细胞凋亡。结果常规方法培养MGC一803人胃癌细胞并接种裸鼠．可以成功制备出裸鼠人胃癌移植瘤的模型：荷瘤裸鼠肿瘤组织在特定波长的荧光激发下可发出特有的红色荧光。荷瘤对照组、单纯激光组、单纯5-ALA组和5-ALA介导的PDT治疗组治疗后第1、3、7、14、21天4组间的肿瘤体积差异有统计学意义（肚1003．086，P=0．000），PDT治疗组明显小于其他3组；病理检查提示．PDT治疗后肿瘤细胞大片凝固性坏死；透射电镜观察提示，PDT治疗组肿瘤组织存在大量死亡细胞及部分凋亡细胞：TUNEL法检测发现，PDT治疗组的肿瘤组织凋亡指数显著高于其他3组（χ^2=18．237．P=0．000）。结论5-ALA介导的PDT对于裸鼠人胃癌移植瘤具有明显的治疗效果．而单纯给予5-ALA或激光辐射对肿瘤无明显抑制作用；肿瘤细胞的坏死及凋亡是5-ALA介导的PDT产生细胞毒作用的重要机制。     

扇形腹壁悬吊器在免气腹腹腔镜手术中的应用

自制了一种免气腹装置──机械式扇形腹壁悬吊器，并应用于35例7种免气胸腹腔镜外科手术，结果显示：这种免气腹装置有较大的适用范围，建立腹内手术空间尚无分，操作简便，易清洗消毒，是一种较为理想实用的腹腔镜外科辅助器材．     

光动力疗法对人胃癌细胞MGC-803的杀伤性干预

目的:观察5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学疗法对人胃癌细胞MGC-803的干预作用,探讨光动力学疗法治疗胃癌的可能作用途径。方法:实验于2004-03/2004-12在全军神经医学研究所完成。试剂5-氨基乙酰丙酸购自美国Sigma公司;MGC-803人胃腺癌细胞株购于中山大学实验动物中心。①分别使用不同浓度的5-氨基乙酰丙酸培养MGC-803胃癌细胞,浓度分别为0.25,0.5,1.0,2.0,4.0mmol/L,给予相同剂量的激光辐照。②使用相同浓度的5-氨基乙酰丙酸培养MGC-803胃癌细胞,给予不同剂量的激光辐照,能量分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100J/cm2。③使用不同浓度的5-氨基乙酰丙酸培养MGC-803胃癌细胞,浓度分别为0.25,0.5,1.0,2.0,4.0mmol/L,不予激光辐照。④给予不同剂量的激光辐照培养MGC-803胃癌细胞,能量分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100J/cm2,不给予5-氨基乙酰丙酸。以上4个实验均以四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,以不加5-氨基乙酰丙酸、无激光辐照培养的细胞作为空白对照,细胞存活率=处理组细胞吸光度值/对照组细胞吸光度值×100%。⑤培养MGC-803胃癌细胞,随机分为4组,即单纯MGC-803胃癌细胞组、单纯5-氨基乙酰丙酸组、单纯给予激光组及光动力学治疗组,使用吖啶橙-溴化乙锭染色法检测细胞凋亡情况。结果:①5-氨基乙酰丙酸浓度不同、激光辐射剂量相同:随5-氨基乙酰丙酸浓度逐渐递增,MGC-803细胞的存活率逐渐下降,各组细胞存活率之间差异有显著性意义(F=266.39,P<0.01);但在浓度到达2.0mmol/L后,细胞存活率不再随着5-氨基乙酰丙酸的浓度的增加而下降。②激光能量不同、5-氨基乙酰丙酸浓度相同:随着激光剂量的增加MGC-803细胞存活率显著下降,各组细胞存活率之间差异有显著性意义(F=226.31,P<0.01)。③5-氨基乙酰丙酸浓度不同、不给激光辐射:各组细胞存活率之间差异均无显著性意义(F=0.79,P=0.54)。④激光辐射剂量不同、不给5-氨基乙酰丙酸:各组细胞存活率之间差异均无显著性意义(F=0.61,P=0.66)。⑤只有光动力学治疗组出现细胞凋亡现象,而其他细胞组基本无凋亡细胞。结论:在较低的浓度范围内,5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法对人胃癌MGC-803细胞的杀伤作用随着5-氨基乙酰丙酸浓度的增加而增加,在较高浓度时则存在饱和现象,而且杀伤力与光剂量成正比。单纯激光不能产生光动力效应,5-氨基乙酰丙酸本身对细胞无毒性作用。5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学治疗能够有效的治疗胃癌,光动力学疗法诱导肿瘤细胞凋亡是其可能作用途径之一。