聚-羟丙基-天冬氨酸-谷氨酸-聚乙烯亚胺共聚物作为非病毒载体的研究

目的:选用聚-羟丙基-天冬氨酸-谷氨酸材料作为骨架偶联低分子量聚乙烯亚胺,以构建低毒、高效的新型非病毒性基因载体.方法:用聚-羟丙基-天冬氨酸-谷氨酸(PHPAG)为基本骨架,偶联低分子量的聚乙烯亚胺(PEI 1.8 kDa)形成聚-羟丙基-天冬氨酸-谷氨酸-聚乙烯亚胺(PHPAG-PEI 1.8 kDa)的载体材料.通过核磁共振氢谱(1H-NMR)、粒径测定、凝胶体积排除色谱法(GPC)等化学物理方法,凝胶电泳阻滞实验、MTT细胞毒性实验、细胞转染等生物学实验,对聚合物的结构及性能进行研究.结果:成功合成载体材料PHPAG-PEI 1.8 kDa.通过1H-NMR证实材料PHPAG-PEI 1.8 kDa在5或6个氨基酸上能偶合1个PEI 1.8 kDa.GPC结果表明PHPAG、PHPAG-PEI 1.8 kDa 2种材料的分子量约为1.2×104.粒径检测结果显示,PHPAG-PEI/pDNA复合物的平均粒径为200 nm左右.凝胶电泳阻滞实验表明,PHPAG-PEI/pDNA复合物在N/P为3.5∶1时可以完全阻滞DNA.细胞毒性实验表明,在COS-7和A293 2种不同的细胞中,载体材料显示出较低的毒性,与对照组PEI 1.8 kDa相近.在B16细胞、Hela细胞上的转染实验表明,PHPAG-PEI/pCAG-Luc3的复合物在N/P为25∶1时的转染效率最高,高于对照组PEI 25 kDa.结论:PHPAG-PEI聚合物载体材料是一种有潜在用途的非病毒基因药物载体.     

特发性震颤一家系13例

临床资料 先证者(Ⅱ9),女性,67岁,进行性四肢震颤40余年,加重3年于2007年5月22日就诊.患者自23岁开始出现双手震颤,起初以其远端(肘关节以下)明显,缓慢进展,30岁时下颌及舌震颤,50岁震颤累及双下肢及躯干,且难以完成精细动作.     

重叠区扩增基因拼接法在构建膜锚定共刺激分子融合基因上的应用

目的　将小鼠共刺激分子 B7- 1(m B7- 1)基因的胞外区与人胎盘碱性磷酸酶 (h PL AP- 1) C末端信号肽序列进行拼接 ,探讨其形成融合基因的作用。方法　利用重叠区扩增基因拼接法 ,分别扩增 h PL AP- 1C末端信号肽序列和 m B7- 1基因的胞外区序列 ,然后将二段基因拼接起来 ,拼接后与 p GEM- T克隆载体连接 ,酶切和测序鉴定。结果　分别成功扩增出 h PL AP- 1C末端信号肽序列 15 5 bp和 m B7- 1基因的胞外区序列 76 4 bp,并将二段基因序列成功拼接 (891bp) ,经测序是正确的。结论　重叠区扩增基因拼接法能拼接 m B7- 1基因的胞外区与 h PL AP-1C末端信号肽序列 ,能形成融合基因     

急性百草枯中毒所致急性肺损伤机制研究

目的从病理学改变、酶学指标、肺组织细胞内钙离子浓度变化等方面,探讨急性百草枯中毒的损伤机制。方法取SD大鼠36只,随机分为2组,实验组大鼠腹腔内注射百草枯20mg/kg,用无菌生理盐水配成5mg/mL的溶液,一次性染毒。对照组大鼠腹腔内注入等体积无菌生理盐水。在6个不同时间点观察其肺组织病理学改变,测量肺组织匀浆内的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力及肺组织细胞内钙离子浓度变化。结果百草枯中毒可引起弥漫性毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损害,主要表现为肺泡水肿、出血、透明膜形成和程度不等的肺泡炎,炎症细胞浸润;肺组织匀浆内MDA含量显著高于对照组(P<0·01);SOD活力下降(P<0·01);肺组织细胞浆内钙离子浓度明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0·01),以第2~4d明显,钙离子荧光强度分别为82·91±28·68和55·42±29·61。结论急性百草枯中毒的损伤机制可能与联吡啶阳离子产生反应态氧、胞内钙稳态失衡有关,最终导致不可逆的肺间质纤维化。     

糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白的制备及抗肿瘤作用研究

目的制备糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白(mB7.1GPI),研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法用已构建的重组糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1的表达载体pcDNA3.1( )mB7.1GPI,转染到CHO细胞中,表达和纯化mB7.1GPI。采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对细胞膜的锚定作用。建立C57BL6小鼠的淋巴瘤模型,观察用mB7.1GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果mB7.1GPI融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上,能有效刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL2与IFNγ。融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并延长其生存期。结论糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用,有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

跨膜型超抗原SEA融合蛋白的表达及其对小鼠黑色素瘤的免疫治疗作用

目的 制备跨膜型超抗原融合蛋白，研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法 用已构建的重组跨膜型超抗原的表达载体pET-28a-TM-SEA转化E．coli BL21(DE3)pLys宿主菌，在IPTG诱导下产生目的蛋白；用Ni-NTA His Bind Resin纯化带有His-Tag的目的蛋白。采用免疫组化法、免疫荧光法和流式细胞术检测其对细胞膜的锚定作用。建立C57BL／6小鼠的黑色素瘤模型，观察跨膜型超抗原SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果 跨膜型超抗原融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上。融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，并延长其生存期。结论 跨膜型超抗原融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用，有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

单克隆抗体和超抗原的融合蛋白对人大肠癌细胞的抑制作用

观察抗人大肠癌的单克隆抗体和超抗原ＳＥＡ的融合蛋白Ｃ２１５Ｆａｂ－ＳＥＡ与Ｃ２４２Ｆａｂ－ＳＥＡ,对表达相应抗原的人大肠癌细胞株的体外抑制作用。方法：用健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）作为效应细胞,ＭＴＴ法测定融合蛋白对人大肠癌细胞系的体外抑制率,采用荧光抗体流式细胞术测定肿瘤细胞ＨＬＡ－Ｉ和ＨＬＡ－ＤＲ抗原分子的表达。结果：在ＰＢＭＣ介导下,Ｃ２１５ＦａＢ－ｓｅａ和ＨＬＡ－Ⅰ,ＨＬＡ－ＤＲ分子     

肺切除上腔静脉置换术中静脉转流方式的临床应用研究

目的　探讨晚期肺癌患者行肺切除合并上腔静脉切除人造血管置换术期间 ,上腔静脉血转流到下腔静脉的有效方法。方法　 5 5例肺癌伴上腔静脉侵犯的患者 ,按不同的静脉转流方法分为三组 :弃血组( 2 0例 )、放血组 ( 2 0例 )和外转流组 ( 15例 ) ,在静吸复合气管插管全身麻醉下施行肺癌根治性切除以及上腔静脉切除人造血管置换术。监测心电图、平均动脉压、上腔静脉压和血红蛋白。结果　上腔静脉阻断期间 ,外转流组患者平均上腔静脉压力明显低于放血组和弃血组 (P <0 .0 5 ) ,且波动小。弃血组平均动脉压和血红蛋白低于放血组和外转流组 (P <0 .0 5 ) ,输血量明显增多。全部患者手术经过顺利 ,术毕安返监护室 ,未发现神经系统损害的症状及体征 ,如期出院。结论　在上腔静脉切除人造血管置换时体外上下腔静脉转流方法可维持稳定的血流动力学和较低的中心静脉压 ,有利于大脑的灌注 ,并能明显减少出血量 ,是较好的方法     

高原地区不同级别医院医务人员接受急危重症诊治培训的现状及需求分析

目的 了解高原地区医务人员急危重症诊治相关培训的现状及需求,为进一步开展高原地区医务人员急危重症诊治相关培训提供参考。方法 2018年7月1日-2020年7月31日对西藏地区医院医务人员（包括医师、护理人员及其他医务工作人员）进行匿名问卷调查,调查高原地区医务人员接受急危重症诊治培训的内容及需求,并进一步比较不同级别医院医务人员接受急危重症诊治培训的内容及需求。结果 本研究共发放45份问卷,回收有效问卷共43份,有效回收率为95.6%。医务人员的平均年龄为（35.67±9.17）岁,男∶女比例为1∶1.5,医务人员所属三级、二级及二级以下医院的占比分别为23.3%、27.9%和48.8%。医务人员接受胸痛、心力衰竭、卒中、消化道出血、呼吸衰竭、代谢性疾病危象、脓毒症疾病培训的人数（占比）分别为25(58.1%)、25(58.1%)、24(55.8%)、23(53.5%)、20(46.5%)、14(32.6%)和12(27.9%);认为需要加强心力衰竭、呼吸衰竭、代谢性疾病、卒中、消化道出血、胸痛和脓毒症诊治培训的人数（占比）分别为38(88.4%)、36(83.7%)、35(81.4%...     

百草枯处理HUVEC后NF-kB表达及其反义寡核苷酸干预作用

编辑点评:百草枯(Paraquat,PQ)是一种速效触杀型灭生性除草剂,也是人类常见致命性的急性中毒源。肺是百草枯中毒的主要靶器官,特点是早期持续的肺泡炎和后期的肺纤维化病死率高,其发病机制不明,目前尚无特殊治疗。本期介绍四川大学华西医院何庆教授的课题组从发病机制,中西医结合治疗等方面所开展的系列研究。