儿童乙型病毒性肝炎病毒携带者血清新蝶呤水平分析

目的研究儿童乙型病毒性肝炎病毒(HBV)携带者血清新蝶呤水平变化及其与HBV复制的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时荧光定量PCR法分别检测150例儿童HBV携带者和60名健康儿童的血清新蝶呤水平、HBV DNA载量。结果慢性HBV携带者血清新蝶呤水平明显高于非活动性HBsAg携带者和健康儿童,差异有统计学意义(均P0.05);非活动性HBsAg携带者和健康儿童的血清新蝶呤水平差异无统计学意义(P0.05);血清新蝶呤水平与HBV DNA载量在统计学上无显著相关性(r=0.131,P0.05)。结论在儿童HBV携带者中,慢性HBV携带者比非活动性HBsAg携带者体内更容易引起细胞免疫激活,慢性HBV携带者在随访监测中更应被关注,其血清新蝶呤水平升高能提示病毒复制,但不反映病毒复制活跃程度。     

ROC曲线及Logistic回归评价肿瘤标志物对胃癌的诊断价值

目的通过分析肿瘤标志物(TM)癌胚抗原(CEA)、糖类抗原CA724、糖类抗原CA199、糖类抗原CA125的ROC曲线及逐步Logistic拟合曲线探讨其在胃部肿瘤诊断中的应用价值。方法应用化学发光免疫法测定130例胃肿瘤组、49例胃良性病组、92例正常对照组血清中CEA、CA724、CA125和CA199水平,通过ROC曲线分析和逐步Logistic回归结果的ROC曲线下面积(AUC),对TM单独及不同组合方式的敏感性、特异性进行比较分析。结果各TM在胃肿瘤组的浓度显著高于胃病良性病组和正常对照组。胃恶性肿瘤中,逐步Logistic回归曲线联合四种肿瘤标志物预测概率的AUC高于单一TM的AUC。CA724、CEA、CA199联合应用的敏感性最高。结论基于Logistic回归的ROC分析可以改善诊断的准确性。在胃肿瘤的鉴别诊断中,CA724、CEA及CA199联合分析是较好组合。Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者肿瘤标志物水平明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05)。     

梅毒螺旋体粘附素Tp0751重组菌影的构建与鉴定

目的 构建梅毒螺旋体(Tp)粘附素Tp0751的重组大肠埃希菌菌影(E.coli bacterial ghosts,EBG),为深入评价其在抗Tp感染中的潜在免疫保护作用奠定基础。方法将含有噬菌体PhiX174裂解基因E的质粒pHH43转化E.coli DH5α,42 ℃温控诱导使其形成EBG并计算裂解效率,用琼脂糖DNA电泳和透射电镜(TEM)鉴定EBG。构建含有裂解基因盒E-box、膜锚定序列E′-linker及Tp0751目的基因的原核双表达重组质粒pET28a-E′-Tp0751-E-box,28 ℃诱导重组E.coli BL21表达Tp0751并用Western Blot鉴定;42 ℃诱导形成重组EBG(rEBG),计算裂解效率并用DNA电泳和TEM鉴定。结果构建的EBG裂解率为98.13%,DNA电泳未观察到DNA条带,TEM显示绝大部分细菌都裂解成缺乏胞浆成分的细胞空壳并保持活菌基本形态。rEBG在28 ℃时高效表达重组Tp0751蛋白,且仅与梅毒患者血清特异性结合; 42 ℃下其rEBG裂解率为96.37%,电泳和TEM鉴定结果与EBG的相似。结论成功构建表达Tp粘附素Tp0751的rEGB,其所表达目的蛋白具有良好免疫反应性。     

24例23SrRNA A2063G基因突变肺炎支原体肺炎临床分析

目的 分析23SrRNA A2063G基因突变引起肺炎支原体肺炎(MPP)的临床特征,从而提高对该疾病的诊治能力.方法 对36例MPP患儿痰标本进行MP-DNA及23SrRNA基因测序,检测耐药基因,在此基础上分为24例大环内酯类耐药组与12例大环内酯类敏感组.比较两组患儿的临床表现、实验室检查、影像学、治疗等资料.结果 36例MPP患儿中24例检出大环内酯类抗生素耐药基因,均为23SrRNA V区A2063G突变,12例为大环内酯类敏感组.大环内酯类耐药组患儿在住院时间(P=0.025),总咳嗽时间(P=0.035),总发热时间(P=0.008),抗生素治疗后发热时间(P=0.010)及病程(P=0.048)方面均高于大环内酯类敏感组.大环内酯类耐药组患儿白细胞计数及CRP较大环内酯类敏感组更高.大环内酯类耐药组12例患儿仅应用大环内酯类治疗5d内体温消退,3例需改用喹诺酮类抗感染;另10例联合激素,6例加用静脉丙种球蛋白,所有患儿预后良好.大环内酯类敏感组8例患儿在大环内酯类治疗后12h~3d体温消退.结论 相比大环内酯类敏感组,23SrRNA A2063G基因突变引起的耐药MPP患儿在住院时间、总咳嗽时间、总发热时间和抗生素治疗后发热时间、病程上更长,白细胞计数及CRP更高.大环内酯类抗生素对部分耐药MPP治疗有效,病情严重者需联合糖皮质激素和静脉丙种球蛋白或根据病情酌情更改抗生素.     

MSRE-gPCR技术分析多基因DNA甲基化对肝细胞癌的诊断价值

背景与目的:DNA甲基化是潜在的肿瘤标志物.本研究运用自行建立的甲基化敏感性限制性内切酶一定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-gPCR)方法检测肝细胞癌(hepatocellutar carcinoma,HCC)组织中多个基因的DNA甲基化状态,筛选可用于HCC诊断的DNA甲基化标志物组合.方法:以47对HCC患者癌组织和癌旁组织、8例正常人肝组织为材料,运用MSRE-gPCR方法检测这102例肝组织中APC、GSTPI、RASSFIA、p16、SFRP1、RUNX3、Hint1、SOCS1和HIC-1基因的启动子甲基化状态.结果:APC、GSTPI、RASSF1A、p16、SFRP1、RUNX3基因在肿瘤组织中的甲基化率分别为70.2%、70.2%、63.8%、29.8%、44.7%和36.2%,均显著高于对应癌旁组织(P均＜0.05);而Hintl、SOCSI和HIC-1基因甲基化水平在HCC肿瘤和癌旁组织间无显著差异.联合检测APC、GSTP1、RASSF1A和SFRP1 4个靶点,可检出所有HCC病例.这些基因的甲基化水平与患者肿瘤大小、分化、包膜及HBV感染等临床病理参数均无显著相关性.结论:联合检测APC、GSTPI、RASSFIA和SFRPI的DNA甲基化状态对于HCC风险评估和分子诊断具有重要价值.     

乙型肝炎病毒外膜大蛋白与HBV DNA的关系研究

目的:探讨乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)与HBV DNA的关系.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR法,检测320例乙型肝炎患者血清中的HBV-LP水平及HBV DNA载量.结果:HBV-LP水平与HBV DNA拷贝数变化相一致,两者呈正相关(r=0.949);不同模式的HBeAg血清中HBV-LP与HBV DNA阳性率,差异均无统计学意义(P>0.05).结论:血清HBV-LP水平能反映乙型肝炎患者体内HBV复制程度,是判断HBV复制的血清学指标.     

梅毒螺旋体黏附素Tp0751 核酸菌影的构建及免疫原性研究

目的:构建梅毒螺旋体(Tp)黏附素Tp0751 的重组真核大肠埃希菌菌影(EBG)并检测其在免疫鼠中的免疫原性,为探讨新型梅毒疫苗奠定基础。方法:构建pcDNA3.1(+) / Tp0751 真核表达载体,将其装载入已构建的空EBG 中,形成重组核酸菌影pcD/ Tp0751-BG,计算装载率;将核酸菌影转染鼠源性巨噬细胞RAW264.7,Western blot(WB)鉴定目的蛋白表达。将雌性BALB/ c 鼠随机分为A(PBS)、B(空EBG)、C(空pcDNA3.1)三个对照组和D(pcD/ Tp0751)、E(pcD/ Tp0751-BG)、F(pcD/ Tp0751-BG+rTp0751)三个实验组,各组间隔两周肌注免疫共三次,检测特异性血清IgG 及生殖道黏膜SIgA、小鼠脾细胞增殖水平和分泌IFN-γ水平。结果:重组真核质粒对菌影的装载率为76.1%;WB 显示此转染细胞能有效表达重组目的蛋白。D、E、F 实验组小鼠特异性血清IgG 与生殖道SIgA 效价均随免疫次数增加而增加,各时间点均显著高于三个对照组(P<0.01),于末次加免后第8 周达到峰值,此时F 组IgG 与SIgA 效价分别为1 :102 400 与1 :12 800;首次加免2 周后,E、F 组均显著高于D 组(P<0.01);末次加免2 周后,F 组显著高于E 组(P<0.01)。末次加免后第8 周,D、E、F 组的刺激指数(SI)值与IFN-γ水平均分别显著高于三个对照组(P<0.01);E、F 组均分别显著高于D 组(P<0.01);F 组分别均高于E 组(P<0.05)。结论:Tp0751 真核质粒菌影具有良好的免疫原性,在小鼠体内诱生了有效的系统和黏膜的体液应答以及系统细胞免疫应答;异源加免较同源加免免疫效果更好。     

ibrolipim 对糖尿病小型猪肝脏PKBβ/Akt2表达的影响

目的 采用高脂高糖高胆固醇饮食喂养的方法建立广西巴马小型猪糖尿病动物模型.研究合成化合物ibrolipim(NO-1886)对肝脏PKBβ/Akt2表达变化的影响,探讨ibrolipim改善胰岛素抵抗、治疗糖尿病的可能机制.方法 15头雄性广西巴马小型猪按体重随机分为3组:正常对照组(n=5)饲以正常饲料;高脂高糖高胆固醇组(n=5)饲以高脂高糖高胆固醇饲料;加药组(n=5),HFSCD饲料中加入1.0%NO-1886.每月末测定血糖、甘油三酯、胰岛素和口服葡萄糖耐量实验.第5个月末取部分肝脏组织用western blotting和免疫组织化学方法检测Akt2蛋白的表达.结果 CD组血糖、甘油三酯、胰岛素水平正常,葡萄糖耐量实验(OGTT)血糖清除和胰岛索分泌有效、及时;与CD组相比较,HFSCD组血糖和甘油三酯胰岛素水平明显升高,糖耐量减低;HFSCD NO-1886组与HFSCD组相比,血糖、甘油三酯和胰岛素水平明显降低,OGTT葡萄糖清除和胰岛素分泌近似CD组.CD组肝脏Akt2蛋白表达鼍较高;HFSCD组Akt2表达量减少(P<0.05);HFSCD 1%NO-1886组Akt2蛋白表达较HFSCD明显增高(P<0.05)但低于CD组.结论 饮食诱导的糖尿病小型猪肝脏组织Akt2表达降低;NO-1886能够上调肝脏Akt2蛋白的表达.改善胰岛素抵抗.     

贵州小型猪2型糖尿病动物模型的建立

目的　建立贵州小型猪 2型糖尿病模型 ,并观察其胰腺结构变化。方法　将贵州小型猪1 0头随机分为 2组 ,5只饲以基础饲料作为正常组 (A组 ) ,5只饲以高脂高糖饲料作为实验组 (B组 )。共观察 6个月。在 0 ,2 ,3,4,5 ,6月末采取动物禁食过夜后空腹血 ,测定血浆中血糖和血清中胰岛素。于第 6个月末 ,全部处死动物 ,取动物胰腺。取一部分胰腺用 1 0 %甲醛溶液固定 ,常规石蜡包埋切片 ,H .E染色 ,光学显微镜下观察 ;另一部分胰腺用 2 .5 %戊二醛固定 ,常规电镜样品制备 ,透射电镜下观察并照相。结果　实验组 2个月后即出现高血糖 ,并随时间延长而逐渐升高 ,对照组血糖未见升高 ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。实验组血清胰岛素稍有升高 ,3个月后逐渐降低 ,6个月后明显降低 ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。实验组胰腺组织表现为胰岛萎缩 ,胰岛边缘皱缩 ,胰岛数目减少 ,胰岛内细胞数量亦减少 ,多数细胞呈梭形 ,细胞核呈杆状 ,胰岛周围少量淋巴细胞浸润 ,出现空泡变性。透射电镜下观察到实验组胰岛 β细胞肿胀 ,部分结构溶解、细胞呈空化 ,细胞颗粒溶解或脱落 ,胰岛周围细胞内可见较大的脂滴。α细胞结构有局灶溶解呈空泡状结构 ,腺泡细胞内粗面内质网模糊 ,部分扩张严重。结论　高脂高糖饲料可诱发     

广西巴马小型猪动脉粥样硬化模型LOX-1表达的研究

目的 建立猪动脉粥样硬化(AS)模型,探讨该模型中LOX-1表达的变化.方法 将10头广西巴马小型猪分别喂正常(CD)和高脂、高糖、高胆同醇(HFSCD)饲料,每月末测定血脂水半.第5个月末处死动物,采用苏丹Ⅳ检测动脉粥样斑块病变;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westem Blot印迹分别检测主动脉组织中LOX-1的mRNA和蛋白质表达.结果 与CD组比较,HFSCD组血浆甘油三酯、高密度脂蛋白胆同醇(HDI-C)和总胆同醇水平异常升高;动脉有明显的脂质条纹及斑块;动脉粥样硬化小型猪主动脉组织的LOX-1的mRNA及蛋白质的表达均上=调(P＜0.05).结论 高脂、高糖、高胆同醇饲料喂养小型猪可建立As动物模型;AS小型猪主动脉组织的LOX-1表达上调.