血乙型肝炎病毒RNA定量检测在慢性乙型肝炎患者精准诊疗中的价值

目的 评价血乙型肝炎病毒(HBV)RNA定量在慢性乙型肝炎(CHB)患者核苷类似物(NAs)治疗疗效监测中的价值,分析HBV RNA与其他HBV相关指标的相关性.方法 选取169例CHB患者,其中149例NAs抗病毒治疗的患者设为治疗组,20例无抗病毒治疗的患者设为未治疗组,检测所有患者的HBV RNA,并收集同期检测...     

忆我的老师──著名解剖学家高贤华教授

高贤华教授离开我们已经三年了。这位国内外著名的解剖学家，原四川华西医科大学教务长，解剖教研室副主任给我们留下了极深的印象。他的敬业精神及其人文思想仍在不断地影响着我，鼓励着我。在他逝世三周年之际，我特书此文以表达我对高贤华教授的敬佩、谢意和怀念之情。JamesVanFket在他的《成功》一书中写道：成功的管理人员应具备“实事求是，高瞻远瞩”的品德。高贤华教务长正是个实事求是，深谋远虑的校领导者。他开拓进取，锐意改革。他还十分重视对青年学者的培养，鼓励选派优秀的中青年学者出国深造，以期学成归国为祖国的科学事…     

儿童巨细胞病毒IgG抗体亲和力指数测定的意义

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)特异性IgG抗体亲和力指数(AI)在儿童HCMV感染诊断中的意义。方法:对150例临床疑似HCMV感染的儿童,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和微粒子酶免化学发光法检测尿液HCMV DNA载量和血清HCMV IgM/IgG抗体;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定HCMV IgG抗体亲和力指数(AI)。结果:150例疑似HCMV感染的儿童尿液HCMV DNA阳性检出率为83%(124/150),病毒载量范围为2.67×103～1.31×106copies/mL;血清HCMV IgM阳性检出率为74%(111/150),HCMV IgG阳性检出率为91%(136/150),其中HCMV IgM单阳性检出率为6%(9/150),HCMV IgG/IgM双阳性检出率为68%(102/150);102例HCMV IgG/IgM双阳性标本,AI>60%占71%(72/102),40%≤AI≤60%占6%(6/102)例,AI<40%占24%(24/102)。结论:IgG抗体亲和力指数测定能准确地反映HCMV感染的活动状况,有助于HCMV感染的诊断与治疗。     

尿沉淀细胞DNA的甲基化谱式分析和膀胱癌的诊断

目的：寻找并评估通过对尿沉淀细胞DNA甲基化分析检出膀胱癌的基因组合。方法：甲基化特异性PCR（methylation specific polymerase chain reaction,MSP）。结果：对3株膀胱癌细胞系进行的20个基因启动子区域CpG岛甲基化状态分析发现,除BRCA1以外其他基因至少在细胞株的1个等位基因呈高甲基化状态。对40例膀胱癌组和3组非膀胱癌对照组的尿沉淀细胞DNA进行了6个基因甲基化状态分析发现,SALL3在膀胱癌组甲基化率为67.5%（27/40）,MT1A为50.0%（20/40）,HPP1为50.0%（20/40）,MYOD1为37.5%（15/40）,BRCA1为32.5%（13/40）,TMS1为5.0%（2/40）。这6个基因在3个非膀胱癌对照组,即非肿瘤性泌尿生殖系统疾病患者23例、脑外科患者6例和正常人群7例均呈去甲基化状态,所以可以受试基因中任一个基因呈现高甲基化状态作为膀胱癌的指征,该法检出膀胱癌的敏感性为90.0%（36/40）。结论：对这5个基因在尿沉淀细胞DNA中甲基化状态的检测可望有效地检出膀胱癌。     

循环肿瘤细胞及游离DNA甲基化在肝细胞癌患者中的研究进展

随着对肿瘤认识的不断深入,人们发现在原发肿瘤形成和生长的早期阶段,肿瘤细胞即可以脱离原发肿瘤组织释放到外周血形成循环肿瘤细胞,同样在肿瘤形成的早期阶段就会出现肿瘤细胞的坏死和凋亡,这些凋亡或坏死的肿瘤细胞也可以释放其DNA入外周血形成血浆或血清游离的DNA,因此对肿瘤患者循环肿瘤细胞及游离DNA的分析被认为是实时的"液相活检",肿瘤患者中的循环肿瘤细胞具有非常强的异质性,我们可以根据其物理和生物学性质采用不同的技术对其进行富集和检测;可以借助现代分子生物学手段对循环游离DNA进行提取,并对其遗传学和表观遗传学的异常改变进行分析,这可为肿瘤的早期诊断、疗效评估、复发监测及预后判断提供重要的信息.本文结合本课题组的研究重点,就循环肿瘤细胞及游离DNA及其甲基化在肝细胞癌患者的研究进行综述.     

人乳头状瘤病毒多重感染不同类型与宫颈病变程度的关系

目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)多重感染不同类型与宫颈病变的关系,为临床HPV多重感染率与宫颈病变的发生提供依据.方法 采用HPV基因分型(PCR-反向点杂交)检测技术,分析192例HPV多重感染者的HPV型别,同时检测其宫颈病变程度;192例HPV多重感染者分为3组,其中高危型HPV多重感染组54例,高危型与低危型HPV的混合感染组108例,低危型HPV多重感染组30例.结果 高危型HPV多重感染组中,16、58、52型HPV最常检出,检出率分别为51.85％、48.15％、24.07％,低危型HPV多重感染组中,11、53、6型HPV最常检出,检出率分别为60.00％、46.67％、40.00％;高危型HPV多重感染组与混合感染组相比,宫颈不同程度病变的构成比差异无统计学意义,以上两种感染类型与低危型HPV多重感染组相比,宫颈病变程度的差异均有统计学意义(P＜0.01);多元logitic回归分析显示,感染16型HPV(OR值2.94、95％CI:1.47～5.89,P＜0.01)使宫颈癌患病风险增加.结论 高危型HPV的多重感染是加重宫颈病变的重要因素,高危的16型HPV感染不但多见,而且使宫颈癌的患病风险增加.     

应用微滴式数字PCR定量检测结直肠癌患者血浆循环游离DNA

目的建立基于微滴式数字PCR(dd PCR)技术定量检测结直肠癌(CRC)患者血浆循环游离DNA(cfDNA)含量的方法,并初步探讨其临床应用。方法设计β-actin基因dd PCR特异性引物和探针,通过条件优化建立cfDNA定量检测方法;用不同浓度标准品验证所建方法的特异性、灵敏度、线性及重复性;并用该法检测39例CRC患者与40例健康人群血浆标本,比较CRC患者与对照组、术前与术后组血浆cfDNA浓度差异。结果所建方法无非特异性扩增,检测灵敏度为0.29 copies/μl,在模板浓度为10 pg/μl~10 ng/μl内线性良好(y=-2.34+33.17x,r~2=0.999),批内CV为9.85%,批间CV为11.04%;CRC患者血浆cfDNA结果 (7.20±5.15)copies/μl明显高于对照组(3.38±1.97)copies/μl(P0.01);术后组血浆cfDNA浓度为(3.90±3.39)copies/μl,较术前组明显下降(P0.01)。结论建立的dd PCR定量检测血浆cfDNA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可为CRC患者的临床决策和病程监控提供一种无创手段。     

双标记TaqMan探针实时荧光PCR法检测ALDH2基因型及初步临床应用

目的评价双标记TaqMan探针实时荧光PCR法(dFQ-PCR)检测ALDH2基因型的可行性,并初步用于临床检测。方法对ALDH2基因型检测的dFQ-PCR进行方法学性能评价,包括准确度、检测下限、重复性和抗干扰能力,并在200例体检者中进行基因型检测。结果 ALDH2基因分型只需单管PCR扩增,操作简单,结果判断直观。与测序方法比较,准确性为100%,检测下限接近5 ng/μl,重复性好,常规浓度的干扰物均对基因型检测无干扰。本院200例体检者的GG、AG和AA基因型比例分别为60.0%、35.0%和4.5%,G和A等位基因频率分别为77.8%和22.2%,符合Hardy-Weinberg遗传平衡。结论 ALDH2基因型的dFQ-PCR检测方法单管扩增检测,具有操作简便快捷、结果判断简单、方法性能良好和所用仪器普及高等优点,适用于临床上大样本的ALDH2基因分型。     

生殖支原体黏附素蛋白模拟表位的筛选和鉴定

目的制备兔抗重组生殖支原体粘附素蛋白(rMgPa)的多克隆抗体(pAb),以期筛选MgPa的模拟表位。方法用rMgPa免疫新西兰兔以制备兔抗rMgPa的pAb,以此pAb为靶分子对噬菌体展示随机12肽库进行生物淘洗,随机挑取74个噬菌体克隆进行DNA测序与分析,用ELISA检测噬菌体与pAb结合的特异性。结果制备了兔抗rMgPa的特异性pAb,以此抗体为靶分子对噬菌体展示肽库进行生物淘洗后,特异性噬菌体克隆得到了明显富集。经对74个噬菌体克隆所展示的外源性多肽序列进行比较分析,共可大致分为3组一致性的核心序列:P-S-A-A/V-X-R-F/W-E/S-L-S-P,A-K-I/L-T/Q-X-T-L-X-L和K-S-L-S-R-X-D-X-I。ELISA结果说明36个噬菌体克隆能与pAb发生特异性结合,因此,这三组核心序列可能是MgPa的模拟表位。结论成功制备了兔抗rMg-Pa的pAb,并筛选到MgPa的3个可能的模拟表位,为进一步研究Mg的诊断与预防提供一定的实验依据。     

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0463的表达与抗原性鉴定

目的表达梅毒螺旋体（Tp）重组蛋白Tp0463（rTp0463）并鉴定其抗原性,为进一步探讨其在梅毒血清学诊断和免疫保护中的作用奠定基础。方法 PCR扩增Tp0463基因,构建原核表达重组体pET-28a（＋）/Tp0463,转化宿主菌诱导表达重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,Westernblot鉴定表达产物的抗原性。结果成功构建了原核表达重组体pET-28a（＋）/Tp0463,经诱导高效表达了一分子量大约为16KDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度〉90%;Westernblot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论高效表达了rTp0463,该重组抗原有良好的抗原性。