高糖高脂饮食对广西巴马小型猪肾脏病理结构的影响

目的:建立饮食诱导的广西巴马小型猪糖尿病模型,研究其肾脏的病理学改变。方法:将雄性广西巴马小型猪10只按体重随机分为两组,5只饲以基础饲料作为正常对照组,5只饲以高糖高脂高胆固醇饲料作为高糖高脂组,建模5个月后处死动物,取出左肾,计算左肾重/体重比值,常规制片,HE、PAS染色,观察肾脏组织病理学变化。结果:高糖高脂组部分肾小球肿胀,基底膜增厚,系膜区增宽,基质增加,少数肾小球纤维化,囊腔闭塞;小叶间动脉管壁增厚,平滑肌细胞增生,管腔狭窄。而对照组肾脏病理改变不明显。结论:用高糖高脂饮食喂养广西巴马小型猪5个月,可引起肾脏发生典型的早期病理改变,说明饮食诱导法可建立较理想的早期糖尿病肾病模型。     

温州地区新生儿Ｇ６ＰＤ 缺乏症基因突变分析

摘要：目的　分析温州地区出生新生儿葡萄糖 ６ 磷酸脱氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ ６ ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｄｅｆｉｃｉｅｎ ｃｙ,Ｇ６ＰＤ）缺乏症发生率及基因突变特点。方法　收集温州医科大学附属第二医院新生儿２０４１２ 例,应 用滤纸荧光斑点法对新生儿进行Ｇ６ＰＤ 缺乏症筛查、酶法复诊;复诊阳性病例用ＭＭＣＡ 法检测基因突变, ＭＭＣＡ 法检测基因突变为阴性的再用二代基因测序;另筛查时间段内初筛阴性的女性样本Ｇ６ＰＤ 活性值最 低的５３例用ＭＭＣＡ 法检测基因突变。结果　２０４１２ 例新生儿Ｇ６ＰＤ 缺乏症纸片荧光法筛查阳性率为 ０．３０％ （６２／２０４１２）,其中男性５９例, 占９５．１６％ （５９／６２）;６２ 例筛查阳性的病例酶法复诊均阳性, 而 ＭＭＣＡ 法测基因突变阳性为６０ 例,２ 例酶法复诊阳性而ＭＭＣＡ 法检测阴性的样本通过二代测序均为 ｃ．１３１１Ｃ＞Ｔ 突变;ＭＭＣＡ 法基因突变以ｃ．１３７６Ｇ＞Ｔ、ｃ．１３８８Ｇ＞Ａ、ｃ．１０２４Ｃ＞Ｔ 最为常见;初筛阴性 的女性样本Ｇ６ＰＤ 活性值最低的５３例用ＭＭＣＡ 法检测出基因突变８例。温州地区患儿母亲籍贯最多为泰 顺县,占３２．５０％ （１３／４０）,而非温州地区广西壮族自治区、贵州、江西为高发地带, 占６３．３３％ （１９／ ３０）。结论　温州地区新生儿中Ｇ６ＰＤ 缺乏症男性患者多于女性。随着外来人口的流入和通婚的增多,温州 地区的Ｇ６ＰＤ 基因突变也在发生变化,基因诊断是对该病分子水平的诊断,有利于杂合子的检测。 关键词： 葡萄糖 ６ 磷酸脱氢酶缺乏症; 新生儿Ｇ６ＰＤ 筛查; 发生率; 多色荧光ＰＣＲ 溶解曲线法; 基因突变;分布特点 中图分类号：Ｒ７７２．１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１８）０７ ０５０９ ０５     

白介素2与梅毒螺旋体膜蛋白Gpd双价核酸疫苗的免疫活性及保护作用研究

目的 探讨白介素2(IL-2)基因与梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)Gpd抗原编码基因融合构建双价核酸疫苗免疫新西兰兔后的免疫应答效果及感染Tp后的保护作用.方法 定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Gpd-IL-2,与先期构建的pcDNA3.1(+)/Gpd真核表达重组体分别设为两个疫苗实验组,同时设pcDNA3.1(+)空质粒对照组及PBS对照组,共4组,每组18只雄性新西兰兔,肌肉多点注射初次免疫,于初次免疫后第10周各实验组兔皮下接种Tp标准株进行感染实验,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同时间点免疫兔特异性抗体产生水平和脾细胞IL-2及干扰素γ(IFN-γ)诱导水平,噻唑蓝法检测兔脾淋巴细胞增殖水平.结果 用pcDNA3.1(+)/Gpd-IL-2融合双价疫苗和pcDNA3.1(+)/Gpd单基因疫苗在免疫期间和感染期间均能检测到高滴度的IgG特异性抗体,最高滴度分别可达1∶4096和1∶1024(P值均＜0.01);两疫苗组之间在免疫及感染期间不同时间点比较差异也有统计学意义(P值均＜ 0.01);免疫后第8周双价融合核酸疫苗组及单基因核酸疫苗组兔脾细胞培养上清中IFN-γ分别为(447±22.4)μg/L、(225±17.6)μg/L,IL-2分别为(167±15.7)μg/L、(110±12.6)μg/L,均高于空质粒对照组和空白对照组(P值均＜ 0.01);感染期间不同时间点兔脾细胞受相应蛋白刺激均有明显增殖反应,检测指标均显著高于空质粒对照组和空白对照组(P值均＜ 0.01).早期感染皮损观察显示双价融合核酸疫苗组较之单基因疫苗组有着更低的皮损Tp检测阳性率(17.5％)、溃疡病灶发生率(15％)以及更短的皮损愈合时间.结论 用pcDNA3.1(+)/Gpd-IL-2双基因融合疫苗在兔体内能更有效地诱导保护性体液免疫和细胞免疫应答.     

TGF-β1基因rs2241715位点T/T基因型人群患HBV感染相关性疾患的风险更高

目的：确立3个在亚洲人群中高频杂合的TGF-β1单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）新位点与HBV感染相关性疾病易感性的关系。方法：采用基因型特异性PCR方法，对129例HBV感染相关性疾病患者（慢性乙型肝炎74例、肝硬化41例、肝癌14例）和41例健康人对照的外周血细胞基因组DNA的TGF-β1基因中，3个在亚洲人群中呈高频率杂合的SNP位点（rs2241715、rs2241716、rs4803455）进行基因分型。结果：正常人的rs2241715基因型及等位基因频率与慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌相比差异有统计学意义（P〈0．05）。rs2241715 T／T基因型的个体患慢性乙肝和肝硬化的相对风险度分别为其他型者的2．974倍（95％CI=1．209—7．314，P=0．018）和3．228倍（95％CI=1．201—8．675，P=0．020）。rs2241716和rs4803455位点的谱式则无上述的相关性。结论：TGF-β1基因的rs2241715 SNP位点T／T基因型可能是慢性乙肝病毒感染相关疾患的易感因素。     

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0463的表达与抗原性鉴定

目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0463(rTp0463)并鉴定其抗原性,为进一步探讨其在梅毒血清学诊断和免疫保护中的作用奠定基础。方法 PCR扩增Tp0463基因,构建原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0463,转化宿主菌诱导表达重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,Westernblot鉴定表达产物的抗原性。结果成功构建了原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0463,经诱导高效表达了一分子量大约为16KDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度>90%;Westernblot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论高效表达了rTp0463,该重组抗原有良好的抗原性。     

梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究

目的 初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒pET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10 μg/mL)的rTp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了pET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出rTp0136;重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性;重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平分别降至32%、35%和27%。结论rTp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。     

ABCC8、CHFR、BMP3B、LOX、PRSS21和RASSF1A基因启动子的甲基化状态可能与3种乳腺癌细胞株对5-FU的敏感性相关

目的: 寻找与乳腺癌细胞株间药物敏感性差异相关的基因启动子CpG岛甲基化异常,为DNA甲基化异常作为临床化疗敏感性预测手段提供依据.方法: 用MTT法测定3种乳腺癌细胞株(Bcap-37、T47D和ZR-75-30)对9种化疗药物(紫杉醇、紫杉特尔、长春瑞宾、5-氟尿嘧啶(5-FU)、双氟去氧胞苷、表阿霉素、丝裂霉素、依立替康和顺铂)的敏感性;同时用甲基化特异性PCR检测23个基因在3种乳腺癌细胞株中的甲基化状态.结果: 受试的3种乳腺癌细胞株仅对5-FU的敏感性有明显差异.其中Bcap-37(IC50>:317.386μg/mL)对5-Fu相对耐药,而ZR-75-30(IC50:6.676μg/mL)和T47D(IC50:73.076μg/mL)对5-FU相对敏感.23个基因中,有6个基因:ABCC8、CHFR、BMP3B、LOX、PRSS21和RASSF1A在敏感和耐药细胞株中的甲基化状态有差异.其中ABCC8、CHFR和BMP3B在5-FU耐药细胞株中呈相对高甲基化状态,而LOX、PRSS21和RASSF1A则在对5-FU敏感的细胞株中呈相对高甲基化状态.结论: 本研究所发现的6个基因的甲基化状态可能与乳腺癌细胞株对5-FU化疗敏感性相关,为下一步进行临床评估和机制探讨提供了依据.     

急性颅脑损伤并发神经源性肺水肿(附9例报告)

神经源性肺水肿（Neurogenic pulmonary edema，NPE）是由于各种急性中枢系统损伤导致颅内压急剧升高，引起肺部一系列病理改变，而无原发性心、肺、肾等疾病，尤以颅脑外伤和脑血管意外多见。我科自2000年以来，共诊治因急性颅脑外伤并发NPE病例9例，报告如下。     

荧光偏振免疫分析法监测丙戊酸血药浓度的结果分析

丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)是治疗癫痫的一线药物,具有疗效高,安全性好,对患者认知功能影响少等药效特点。但是,VPA的药动学和药效学个体差异很大,剂量难以掌握,给药剂量和血药浓度相关性不稳定,而毒性反应与血药浓度相关。为控制癫痫发作,最大限度地发挥疗效和避免不良反应,对其血药浓度实施监测越来越受到临床的重视。本文采用荧光偏振免疫分析法(FPIA)检测VPA血药浓度,并对结果进行评价分析,现报道如下。     

IL-18基因多态性与婴幼儿巨细胞病毒感染关系的研究

目的通过检测人巨细胞病毒(HCMV)感染患儿白介素-18(IL-18)基因启动子区-607A/C、-137G/C位点单核苷酸多态性(SNPs),探讨其与HCMV感染的关系。方法采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测150例HCMV感染患儿和100名健康对照者IL-18基因启动子区-607A/C、-137G/C位点基因多态性,产物测序法验证RFLP分型。结果 PCR-RFLP法分别测出IL-18启动子区-607A/C、-137G/C位点野生型和突变型纯合子和杂合子,与直接测序所得基因型相符;各基因型多态性分布频率均符合遗传学的Hardy-Weinberg平衡定律;患儿组-607A/C中C、A等位基因频率分别为0.480、0.520,对照组分别为0.490、0.510;患儿组-137G/C中G、C等位基因频率分别为0.867、0.133,对照组分别为0.820、0.180;两组-607A/C和-137G/C位点基因型频率及等位基因频率比较,差异均无统计学意义。结论 PCR-RFLP可用于IL-18启动子区-607A/C、-137G/C位点SNPs的检测;其基因多态性与婴幼儿HCMV感染无关。