WASP、Arp2/3与细菌感染时的细胞骨架重排

细菌侵袭宿主细胞是许多感染性疾病发生的重要环节,该过程与细菌触发的肌动蛋白细胞骨架重排关系密切。细胞骨架是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构,由主要的3类蛋白质纤丝构成,包括微管、微丝和中间纤维。微丝又称肌动蛋白纤维（actin filament）,是由双股肌动蛋白丝以螺旋的形式组成的直径为7～9nm的纤维。其功能除了作为细胞形态和极性的结构框架外,还与细胞的运动、分裂、细菌的黏附以及吞噬等过程密切相关。近来的研究表明许多细菌在感染宿主细胞时能利用宿主细胞的肌动蛋白细胞骨架侵入细胞,甚至达到胞内运动的目的。细菌侵入细胞和胞内运动的过程涉及到两大类细胞蛋白：WASP蛋白家族和Arp2／3复合物,他们是引发肌动蛋白聚集的关键分子,与许多改变肌动蛋白细胞骨架状态的信号分子有关,最终导致肌动蛋白的聚集。     

联合应用胰岛素样生长因子-I和骨形成蛋白-2促小鼠成骨样细胞及成纤维细胞增殖和分化的效应

目的探讨重组人胰岛素样生长因子-I(rhIGF-I)和重 组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)单独及联合应用对MC3T3-E1和NIH3T3细胞增殖和分化的影响。方法单独或联合应用不同浓度rhIGF-I 和rhBMP-2作用于MC3T3-E1和NIH3T3细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞分化 情况,放射免疫法检测细胞分泌的骨钙素(OC)水平。结果1～75ng/mlrhIGF-I与10～100ng/mlrhBMP-2作用于MC3T3- E1和NIH3T3细胞后,均能显示明显的促细胞增殖(P<0.01)及使ALP活性增高(P<0.05)的作用。各浓度rhIGF-I或 rhBMP-2对MC3T3-E1及NIH3T3细胞作用8、24和48h的MTT检测结果相似。rhIGF-I和rhBMP-2联合作用后,对两种细胞 的促增殖、增强ALP活性的作用均较各自单独作用更为明显(P<0.05)。单独或联合应用不同浓度rhIGF-I和rhBMP-2对细胞分泌的 OC水平均无显著影响(P>0.05)。结论rhIGF-I和rhBMP-2具有明显的促细胞增殖及早期分化的协同作用,但对成骨末期细胞分化影响 不大,其活性主要与使用剂量有关。     

问号钩体lipL32/1-lipL41/2融合基因的构建及其表达产物免疫性的鉴定(英文)

目的构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/2融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rLipL32/1-LipL41/2表达情况。采用Western blot鉴定rLipL32/1-LipL41/2的免疫反应性。采用ELISA检测228例钩体病人血清中lipL32/1、lipL41/2基因和lipL32/1-lipL41/2融合基因表达产物的抗体。结果 lipL32/1-lipL41/2融合基因核苷酸和氨基酸序列与报道的相关序列相似性分别为99 .9 %和99 .8 %。rLi-pL32/1-LipL41/2表达量约为细菌总蛋白的10 %。rLipL32/1和rLipL41/2兔抗血清均能识别并与rLipL32/1-LipL41/2结合。97 .4 %、78 .5 %和99 .1 %病人血清rLipL32/1、rLipL41/2和rLipL32/1-LipL41/2抗体阳性。结论本研究成功地构建了问号钩体lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统,rLipL32/1-LipL41/2不仅同时具有两个单一重组抗原的免疫反应性,且能提高钩体病人血清中抗体检测阳性率,可作为研制钩体属特异性基因工程疫苗或检测试剂盒的候选抗原。     

慢性硬膜下血肿清除术中腰穿注液的体会

我院最近对１０例慢性硬膜下血肿的病人行手术钻孔清除,同时在术中腰穿注入接近体温的林格氏液,取得较好的疗效,可以避免传统术式的并发症。现将治疗体会小结如下：１临床资料１．１一般资料男性８例,女性２例;年龄１８～７３岁;病程４天～３个月。住院天数最长３２天,最短７天。７例有明确的头部外伤史,３例否认外伤;既往患高血压病２例,急性肾功能障碍、再生障碍性贫血、肺气肿各１例。１．２临床表现主诉有恶心症状的７例,头晕头痛 ６例,呕吐 ４例,反应迟钝 ２例,昏睡不醒１例;体检有单侧运动障碍的５例,视乳头水肿３例…     

基于vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR快速检测创伤弧菌的研究

目的建立基于溶细胞毒素基因vvhA检测创伤弧菌（Vibrio vulnificus）的TaqMan实时荧光定量PCR。方法采用Primer Express软件,设计位于vvhA基因序列保守区的PCR引物和TaqMan探针,建立检测创伤弧菌vvhA基因100bp扩增产物的TaqMan实时荧光定量PCR。采用基因克隆技术,构建作为阳性对照的pMD19-vvhA100重组质粒。以最低扩增循环数（Ct值）、荧光强度增加值（△Rn）为观察指标,对vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR条件进行优化。以不同浓度的创伤弧菌及其它8种细菌DNA和pMD19-vvhA100为模板,对vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR的特异性、敏感性和重复性进行验证。创伤弧菌经腹腔和皮下注射及灌胃感染ICR小鼠,验证vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR对感染小鼠血液、皮下感染组织和肠内容物的检测效果。结果所建立的vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR仅对创伤弧菌DNA或pMD19-vvhA100呈现阳性检测结果,其检测灵敏度可达0．01ng创伤弧菌DNA或10^3个拷贝的pMD19-vvhA100,不同浓度pMD19-vvhA100三次检测结果的SD≤0．79,对腹腔和皮下感染创伤弧菌的小鼠血液、皮下组织标本检测结果均为阳性。结论所建立的创伤弧菌vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR具有快速、稳定、敏感、特异等优点,适合用于临床实验室进行创伤弧菌引起的败血症和创口感染快速诊断。     

封闭胸腺基质淋巴生成素受体对超敏原引起的气道炎症性应答的作用

目的为阐明胸腺基质淋巴生成素受体（Thymic stromal lymphopoietin receptor,TSLPR）在超敏原引起的气道炎症应答中的作用,并在小鼠模型中探讨局部封闭TSLPR用以缓解哮喘的可能性。方法对TSLPR抗体或同型抗体预处理,且以鸡卵白蛋白（OVA）诱导的各组小鼠,分别行气道浸润细胞的分类和记数、H＆E和PAS的肺组织染色分析;并以酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液中炎性细胞因子;进一步分析OVA激发的小鼠树突状细胞（DCs）的迁移能力和成熟状态。结果在小鼠OVA致敏前施以抗TSLPR抗体可显著减少气道粘液的分泌、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润;同时引发IL-4、IL-5水平的明显下降。而作为其机制之一,TSLPR的中和作用可阻止超敏原诱导的DCs的成熟和迁移。结论封闭TSLPR介导的信号通路可缓解哮喘小鼠的气道炎症反应,有望成为一项新的防治气道变应性疾病策略。     

抑制差减杂交技术筛选幽门螺杆菌对甲硝唑耐药相关DNA片段

目的筛选幽门螺杆菌(Hp)临床分离菌株对甲硝唑耐药的相关DNA片段.方法从浙江大学医学院附属邵逸夫医院消化内科就诊患者胃粘膜活检标本中分离培养Hp.采用二倍平皿稀释法确定Hp菌株对甲硝唑的耐药性.分别选取敏感菌和耐药菌各1株,提取其基因组DNA,采用抑制差减杂交技术分别以其中1株作为被检菌,另1株作为参考菌进行基因组差异研究.结果73.8%(31/42)临床分离的Hp菌株对甲硝唑耐药.耐药株共检出10余个大小约在200～1000bp的特异性DNA片段.结论通过抑制差减杂交技术可筛选出耐药株和敏感株各自特异的DNA片段.     

浙江首次分离发现棉兰型钩端螺旋体

本文报告1987年从浙江省天台县患者血液及鼠肾分离的67株钧端螺旋体(以下简称钩体)的分群分型结果.自鼠肾分离的5株均为黄疸出血群赖型钩体.从病人血液分离的62株中,属黄疸出血群赖型4株、犬群犬型2株、七日热群七日热型?株、赛罗群棉兰型49株.棉兰型是该地区的主要流行菌型,也为浙江省首次发现的菌型.     

基于血糖负荷的饮食教育对妊娠期糖尿病病人干预效果的Meta分析

[目的]系统评价基于血糖负荷的饮食教育对妊娠期糖尿病病人的干预效果,为妊娠期糖尿病病人的饮食选择提供依据。[方法]计算机检索Cochrane Library、PubMed、EBSCO、MedLine、CBMdisc、CNKI、万方、维普数据库,搜集基于血糖负荷的饮食教育在妊娠期糖尿病病人中应用的随机对照试验,由两名研究者对纳入文献进行严格质量评价和资料提取,对符合质量标准的文献采用RevMan 5.3软件进行分析。[结果]共纳入9篇文献,涉及835例病人。Meta分析结果显示:基于血糖负荷的饮食教育较常规饮食教育相比,所引起的糖化血红蛋白差异无统计学意义[WMD=-1.08,95%CI(-2.18,0.02),P=0.06],但能明显降低空腹血糖[WMD=-0.92,95%CI(-1.60,-0.25),P=0.007]与餐后2h血糖[WMD=-1.68,95%CI(-2.50,-0.87),P<0.000 1],降低不良妊娠结局发生率[RR=0.57,95%CI(0.36,0.90),P=0.02]。[结论]基于血糖负荷的饮食教育更有助于改善妊娠期糖尿病病人的血糖水平,降低母婴并发症,改善围生期结局。     

基于血糖负荷的饮食教育对妊娠期糖尿病病人干预效果的Meta分析

[目的]系统评价基于血糖负荷的饮食教育对妊娠期糖尿病病人的干预效果,为妊娠期糖尿病病人的饮食选择提供依据。[方法]计算机检索Cochrane Library、PubMed、EBSCO、MedLine、CBMdisc、CNKI、万方、维普数据库,搜集基于血糖负荷的饮食教育在妊娠期糖尿病病人中应用的随机对照试验,由两名研究者对纳入文献进行严格质量评价和资料提取,对符合质量标准的文献采用RevMan 5.3软件进行分析。[结果]共纳入9篇文献,涉及835例病人。Meta分析结果显示:基于血糖负荷的饮食教育较常规饮食教育相比,所引起的糖化血红蛋白差异无统计学意义[WMD=-1.08,95%CI(-2.18,0.02),P=0.06],但能明显降低空腹血糖[WMD=-0.92,95%CI(-1.60,-0.25),P=0.007]与餐后2h血糖[WMD=-1.68,95%CI(-2.50,-0.87),P<0.000 1],降低不良妊娠结局发生率[RR=0.57,95%CI(0.36,0.90),P=0.02]。[结论]基于血糖负荷的饮食教育更有助于改善妊娠期糖尿病病人的血糖水平,降低母婴并发症,改善围生期结局。