保存女性生育力技术研究进展

保存女性生育力技术是低温生物学与生殖医学紧密结合的学科。本文介绍了保存女性生育力的方法、适用范围、临床应用、发展趋势以及研究进展,并就卵母细胞玻璃化冷冻和卵巢组织冷冻的发展方向作一概述。     

DNA聚合酶δ相互作用蛋白1能促进GFP蛋白的降解

目的证明过表达DNA聚合酶δ相互作用蛋白1(PDIP1)能否促进外源性GFP蛋白的降解。方法将HEK293细胞共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1,利用荧光显微镜检测细胞绿色荧光强度,然后利用Western blot法检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系,再利用氯化铵与MG132分别进行干预,并检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系。结果共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1的HEK293细胞绿色荧光强度明显低于单转pEGFP-C3质粒的细胞;随着PDIP1蛋白表达量的增大,GFP蛋白的表达量减少;利用MG132干预可以明显抑制PDIP1对GFP的降解,而氯化铵干预没有显示明显的效应。结论过表达PDIP1可以促进外源性GFP蛋白的降解,且这一降解是通过蛋白酶体途径进行的,提示PDIP1可能参与细胞内某些蛋白的泛素化降解。     

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药相关基因片段的筛选及克隆分析

目的:筛选幽门螺杆菌(Hp)对甲硝唑耐药相关基因片段。方法:以5株临床分离的耐药株作为被检菌,1株敏感株作为参考菌,采用抑制差减杂交技术进行基因组差异研究,获取Hp对甲硝唑耐药相关的基因片段,并以斑点杂交方法对所获的基因片段进行了杂交鉴定。结果:在获得的差减阳性克隆中,经斑点杂交筛选后共有37个基因片段的拷贝数在耐药和敏感菌株中存在差异(2倍以上),而其中17个片段其拷贝数存在明显差异(3倍以上)。对以上17个差异片段进行单向测序,根据最高同源性比对结果,分别代表二肽ABC载体渗透酶(dppB)、二肽ABC载体结合蛋白(dppA)等10个基因的同源基因片段在耐药株中存在高拷贝数。结论:所获得的10个差异基因片段可能与幽门螺杆菌对甲硝唑耐药相关。     

替硝唑与甲硝唑对口腔厌氧菌感染的疗效比较

报告替硝唑葡萄糖注射液治疗口腔厌氧菌感染的临床疗效、不良反应和药敏试验结果．替硝唑葡萄糖注射液对间欧感染和冠周炎的有效率分别为98。0和90．0％,甲硝唑葡萄糖注射液分别为72．9和75．7％,有显著性差异（X2＞8.58,P＜0.01）替硝唑葡萄糖注射液和甲硝唑葡萄糖注射液的不良反应发生率分别为3．8和19．3％（X2＝24.88,P＜0．01）,以胃肠副作用为主。510株厌氧菌对替硝唑和甲硝唑的敏感率分别为85．9和77．1％．试验结果表明,替硝唑葡萄糖注射液具有抗厌氧菌作用强、临床疗效高和不良反应少等优点．     

甲硝唑-金霉素复合剂体外药效学的研究

甲硝唑－金霉素复合剂作外抗革兰氏阴性需氧菌的作用较林可霉素为弱,但抑制革兰氏阴性需氧菌的效果却优于林可霉素。该复合剂对革兰氏阳性厌氧菌的抑菌效果明显优于林可霉素和甲硝唑,表明对此类细菌有协同抗菌作用。甲硝唑－金霉素复合剂抗革兰氏阴性厌氧菌的作用亦较林可霉素为强。１：１、１：３和１：６（甲硝唑：金霉素,Ｗ／Ｗ）的复合剂中以１：３的抗菌效果最好。实验结果表明,甲硝唑－金霉素复合剂（１：３,Ｗ／Ｗ）可用于制备药膜,用于治疗口腔溃疡等疾病。     

经颅磁刺激在精神科的应用

重复经颅磁刺激(transcranial magnetic:stimulation,rTMS)是1985年后建立的一种大脑皮层神经磁刺激的治疗方法,具有无痛、无损伤、操作简便、安全可靠等优点,适用于神经、精神疾病的治疗和神经损伤后的康复。我科2009年8月～2010年5月应用rTMS治疗神经精神疾病33例,取得良好效     

不同转移潜能人肺癌细胞系Ezrin表达水平及微丝骨架差异性的研究

目的:探讨Ezrin表达水平与肺癌转移潜能的相关性以及细胞内微丝骨架的变化差异。方法:应用蛋白质印迹法和RT-PCR方法检测4种具有不同转移潜能的人类肺癌细胞系中Ezrin mRNA和蛋白的表达水平;荧光染色的方法显示细胞内微丝骨架的变化。结果:Ezrin的mRNA和蛋白表达水平在高转移潜能的人类肺癌细胞中高于相应的低转移肺癌细胞;划痕修复实验显示,高转移组细胞的划痕修复能力明显增强。95D和801D细胞的划痕修复率〔(52.15±5.21)%和(54.22±4.55)%〕明显高于95C和A549细胞的划痕修复率〔(20.15±4.85)%和(21.33±5.01)%〕,差异有统计学意义,P<0.01。高转移性肺癌与低转移肺癌细胞比较,前者细胞内肌动蛋白多聚体减少,微丝骨架杂乱、模糊,而低转移肺癌细胞和肺成纤维细胞微丝骨架粗大、结构清晰、排列整齐。结论:Ezrin mRNA和蛋白表达水平与肺癌的转移能力呈正相关性;肺癌转移潜能的增高伴有肌动蛋白多聚体的丢失和微丝结构的解聚,微丝骨架的这种变化与Ezrin的表达增高具有相关性。     

尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒6和11型的感染率及其L1基因的表达

目的了解尖锐湿疣组织标本中人乳头瘤病毒6型（HPV-6）和11型（HPV-11）感染率的差异,构建HPV-6型主要衣壳蛋白L1基因原核表达系统,建立ELISA方法检测标本中L1基因表达情况.方法采用基于HPV-6型和HPV-11型11基因的双重PCR,检测尖锐湿疣组织标本中HPV-6型和HPV-11型的感染率;采用PCR扩增HPV-6型全长L1基因,T-A克隆后测序,构建原核表达系统pET32a-L1-E.coli BL21（DE3）,采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rL1的表达.制备rL1兔抗血清,用免疫双扩散试验检测抗血清的效价;建立ELISA方法检测标本中L1基因的表达情况.结果116例患者尖锐湿疣组织标本中,92.2%（107/116）检出HPV-6型和/或HPV-11型.其中单一HPV-6型阳性者占70.1%（75/107）,单一HPV-11型阳性者占23.4%（25/107）,HPV-6型和HPV-11型混合感染者占6.5%（7/107）.与报道的相应序列比较,所克隆的HPV-6型L1基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.20%～99.93%和99.80%～100%.IPTG能诱导rL1表达,rL1兔抗血清免疫双扩散效价为1：4.尖锐湿疣组织标本88.8%（103/116）检出L1蛋白.结论成功地构建了HPV-6型L1基因原核表达系统,并建立了HPV-6型和HPV-11型L1基因分型的双重PCR和L1蛋白ELISA检测方法.浙江省尖锐湿疣患者主要感染HPV-6型,病灶中HPV高频率表达病毒主要衣壳蛋白L1.     

甲壳素纤维织品体外抗细菌和癣菌活性的研究

目的　观察甲壳素含量不同的针织布体外抑制或杀灭细菌或癣菌的作用。方法　采用不同细菌或癣菌接种量(1×10⁶～1×10²/mL) ,用体外抑菌试验和杀菌试验检测100%甲壳素纤维无纺布、2 0 %甲壳素针织布和10 %甲壳素针织布对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、红色毛癣菌、紫色毛癣菌和石膏状毛癣菌的抗菌作用,实验中以普通全棉布作为对照。结果　作为对照的普通全棉布对上述细菌或癣菌无任何抑制作用。与普通全棉布比较,100%甲壳素纤维无纺布、20%甲壳素针织布和10%甲壳素针织布对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、红色毛癣菌、紫色毛癣菌和石膏状毛癣菌的抑制率[抑制率=(每毫升CFU值 每毫升接种量) /每毫升CFU值×% ]分别高于普通全棉布的99.8%～99.9%、85.2 %～89.6%和74.2%～85.8% ,表明随甲壳素纤维含量逐渐增高,抑菌作用逐渐增强(χ²≥18.25 ,P<0.01)。所有甲壳素纤维织品均未发现有体外杀菌活性。结论　受试的甲壳素纤维织品无体外杀菌活性,但均有一定的体外抑制细菌或癣菌作用,以100%甲壳素纤维无纺布抑制作用最强,20%甲壳素针织布次之,10%甲壳素针织布较弱。     

经颅磁刺激在精神科的应用

重复经颅磁刺激（transcranial magnetic stimulation,rTMS）是1985年后建立的一种大脑皮层神经磁刺激的治疗方法,具有无痛、无损伤、操作简便、安全可靠等优点,适用于神经、精神疾病的治疗和神经损伤后的康复。我科2009年8月～2010年5月应用rTMS治疗神经精神疾病33例,取得良好效果,现报告如下。