问号钩端螺旋体MazF蛋白对巨噬细胞的毒性作用分析

目的了解问号钩端螺旋体（简称钩体） MazEF毒素-抗毒素系统中MazF蛋白对巨噬细胞的细胞毒性及其机制。方法采用原核表达系统表达问号钩体赖型赖株MazEF毒素-抗毒素系统中的MazE和MazF蛋白（ rMazE和rMazF ）。采用DNA和RNA降解试验确定rMazF的DNA或RNA酶活性以及rMazE抑制rMazF酶活性的作用。采用实时荧光定量RT-PCT、Western blot 和激光共聚焦显微镜法,分别检测问号钩体赖株感染THP-1单核细胞时mazE和mazF基因转录、表达及分泌情况。采用CCK-8法和流式细胞术检测mazF基因产物对THP-1细胞的细胞毒性及死亡方式。结果 rMazF能水解问号钩体赖株和 THP-1细胞的RNA,但无DNA酶活性, rMazE 能抑制rMazF的RNA酶活性。感染THP-1细胞后,mazE-mRNA和mazF-mRNA及MazE和MazF蛋白表达水平显著升高,但仅有MazF蛋白外分泌。 mazF 基因产物对 THP-1细胞有细胞毒性并引起细胞坏死。结论MazEF毒素-抗毒素系统中具有RNA酶活性的MazF蛋白是问号钩体的毒力因子,可引起感染的巨噬细胞坏死。     

流式细胞术快速检测假丝酵母菌药物敏感性方法的建立及应用北大核心CSCD

目的：建立基于流式细胞分析技术快速检测假丝酵母菌临床菌株药物敏感性或耐药性的方法。方法以碘化丙锭（ PI）为荧光染料,采用白假丝酵母菌ATCC90029株确定流式药敏试验门设置及最佳实验条件。采用所建立的真菌流式药敏试验检测110株假丝酵母菌临床菌株对氟康唑和伏立康唑的敏感性或耐药性并经典的M27-A3常量稀释法进行比较。结果调整电压可将白假丝酵母菌ATCC90029株活菌与死菌在流式细胞仪SS/log（ FL3）门中分为边界清晰的两群细胞,不同比例死菌与活菌混合液与流式药敏试验检测值之间有高度相关性（r＝0．999）。流式药敏试验30 min内可出结果,其最适菌液浓度为1．0×106/ml、药物与真菌最适孵育时间为3 h、最佳染色方法及时间为脱氧胆酸钠预处理后PI染色5 min。流式药敏试验与M27-A3常量稀释法对110株假丝酵母菌临床菌株对氟康唑和伏立康唑敏感或耐药总符合率分别为98．2％和87．3％。结论较之经典的常量稀释法,流式药敏试验用于检测真菌对药物的敏感性或耐药性具有快速、准确、敏感等优点,具有临床应用前景。     

18例青年人肺癌的CT表现与临床分析

目的：对青年人肺癌18例的CT表现与临床分析。方法：收集我院近5年肿瘤科、呼吸内科及门诊就诊的肺癌325例,经CT检查结合临床表现进行诊断、治疗和分析。结果：18例从起病到确诊时间为2 w至半年不等,平均2个月;其中,中央型肺癌10例,周围型肺癌8例。结论：近年来青年人肺癌发生率有上升趋势、应对青年人群定期体检,争取早诊断早治疗以提高青年人肺癌治疗效果。     

老年糖尿病患者口腔健康生活质量及影响因素的研究进展

对老年糖尿病患者的口腔健康状况及口腔健康相关生活质量状况进行综述,对影响老年糖尿病患者的口腔健康生活状况因素进行归纳,为医护人员有针对性地采取措施提高老年糖尿病患者的口腔健康生活质量提供参考。     

干细胞因子及其受体在卵泡早期发育中的作用

目前认为卵泡早期发育是非促性腺激素依赖性过程。此期干细胞因子是启动原始卵泡发育、过渡为初级卵泡的必需因子,与受体c-Kit结合后激活c-Kit下游3-磷酸肌醇激酶等信号通路,调控卵母细胞生长、颗粒细胞和卵泡膜细胞分化、增殖及激素合成。干细胞因子与骨形态发生蛋白15、生长分化因子9等细胞因子相互影响,受促性腺激素调控,共同参与卵母细胞-颗粒细胞对话。     

抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其表达产物体外抗肿瘤活性的研究

目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗肿瘤细胞活性。方法:采用连接引物PCR法,构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因;采用常规分子生物学方法克隆并构建该人工融合基因及其原核表达系统;采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量;采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK;采用MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞增殖的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAlloferon-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗肿瘤作用比较。结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coliBLDE3。在IPTG诱导下,该原核重组表达系统可表达串联式目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK,其产量约为细菌总蛋白的30%。Ni-NTA和Sephadex G-50层析后,可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK。在25~100μg/ml剂量范围内,sAlloferon-1、sAlloferon-1-EK和rAlloferon-1、rAlloferon-1-EK均有明显抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞生长及增殖的效果(P<0.01),且四者抑制作用无明显差异(P>0.05)。结论:本研究成功构建了串联表达rAlloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗肿瘤细胞活性。     

卒中进展方联合阿加曲班治疗急性进展型脑梗死临床疗效观察

目的：观察卒中进展方联合阿加曲班治疗穿支动脉病变型急性进展型脑梗死痰瘀阻络证的疗效及安全性。方法：选取穿支动脉病变型急性进展型脑梗死痰瘀阻络证患者36例,按随机对照原则将其分为治疗组和对照组,每组各18例。2组均给予西医常规基础治疗,对照组加用阿加曲班静脉泵入治疗,治疗组在对照组基础上加服卒中进展方治疗,2组均治疗14 d。比较2组治疗前后美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、改良运动功能(mRS)评分、中医证候积分、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及同型半胱氨酸(Hcy)水平变化,并观察综合疗效及不良事件发生率。结果：总有效率治疗组为94.44%(17/18),对照组为66.67%(12/18),差异有统计学意义(P<0.05)。2组治疗7 d、14 d后NIHSS评分,治疗后3个月的mRS评分,治疗后中医证候积分、hs-CRP及Hcy水平均较治疗前下降,且治疗组下降幅度较对照组更大(P<0.05)。治疗过程中,2组均未出现肝肾功能损害、出血等不良事件。结论：卒中进展方联合阿加曲班注射液治疗穿支动脉病变型急性进展型脑梗死痰瘀阻络证,可有效改善患者神经功能预后、减轻炎...     

化痰通络汤治疗痰瘀阻络型急性期脑梗死的临床观察

<正>脑梗死,又名缺血性卒中,是我国成人致死、致残的主要原因,随着人口老龄化和城市化进程加速,卒中危险因素流行趋势明显,我国卒中疾病负担有增长的态势^[1]。尽管现代医学发展,为早期缺血性卒中患者带来了福音,溶栓治疗及机械取栓治疗急性脑梗死效果良好,但对于大多数错过时间窗的就诊患者而言,     

咳喘宁对病毒诱发哮喘模型大鼠CD4+、CD8+T细胞内信号转导子和转录激活子6表达的影响

目的通过观察咳喘宁对呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘模型大鼠CD4+、CD8+T细胞内信号转导子和转录激活子6(STAT6)表达的影响,阐明咳喘宁防治RSV诱发支气管哮喘的机理。方法分别从磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、模型组大鼠外周血中提取单个核细胞,采用免疫磁珠法分离获得CD4+、CD8+T细胞并对其行纯度鉴定与活力检测。采用免疫荧光法,使用流式细胞仪测定T细胞内STAT6蛋白的表达水平,以中药咳喘宁进行干预,动态观察细胞培养过程中,咳喘宁对CD4+、CD8+T细胞中STAT6蛋白表达的调节作用。结果免疫磁珠法获得的CD4+、CD8+T细胞纯度与活力均支持实验的下行进展。与 PBS 对照组比较,模型组 CD4+T 细胞含量显著升高(P＜0.01),CD8+T 细胞含量升高不明显(P＞0.05)。模型组大鼠CD4+T与CD8+T细胞内STAT6的表达增高,咳喘宁治疗组CD4+与CD8+T细胞内STAT6的表达水平比模型组显著下降,差异有统计学意义(P＜0.01);与地塞米松、沙丁胺醇组比较,咳喘宁组 CD4+、CD8+T 细胞内 STAT6的表达水平略高,但差异无统计学意义(P＞0.05)。结论咳喘宁通过下调哮喘模型大鼠CD4+、CD8+T细胞内STAT6的表达,纠正哮喘中Th2细胞的过度增殖分化,影响Th2免疫应答优势,从而减少伏痰的产生,达到防治支气管哮喘的目的。     

蔷薇科植物果核油性提取物的体内外抗幽门螺杆菌作用

目的观察蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液体内外抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的作用。方法从胃炎和消化性溃疡患者胃黏膜活检标本中分离Hp临床菌株。分别采用二倍平皿稀释法和试管法测定油性提取物初提液和提纯液对96株Hp的M IC和MBC。建立Hp小鼠感染模型,检测油性提取物初提液和提纯液体内抗Hp的效果。结果从患者胃黏膜活检标本中分离获得96株Hp。油性提取物初提液和提纯液对上述Hp菌株的M IC90分别为体积分数0.16%和0.32%。体积分数为0.16%油性提取物初提液作用5 m in及体积分数为0.16%的提纯液作用15 m in即可杀灭HpNCTC11637株、临床菌株75b和81 a株。所有感染小鼠胃窦部组织Hp SS1株分离培养结果均阳性,体积分数为0.5%的油性提取物初提液和提纯液灌小鼠Hp分离培养结果均阴性。结论较低浓度的蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液即有体内抗Hp的作用,具有进一步开发抗Hp口服液的价值。