苯并（a）芘代谢产物诱发BALB／3T3细胞程序外DNA合成（UDS）的研究

本实验采用单标记和双标记法,分别检测4种苯并(a)芘代谢产物(anti-BPDE,syn-BPDE,3-OH-BP和9-OH-BP)对BALB/3T3细胞DNA合成和程序外DNA合成(UDS)的影响,结果表明,anti-BPDE、syn-BPDE、3-OH-BP和9-OH-BP均在不同程度上使BALB/3T3细胞DNA合成增加,但只有anti-BPDE、3-OH-BP和9-OH-BP可诱发BALB/3T3细胞的UDS,说明这些苯并(a)芘代谢产物可损伤BALB/3T3细胞的DNA,同时,这种效应与苯并(a)芘代谢产物的立体结构有关。     

编码N端截短的IκBα突变体重组腺病毒的构建与鉴定

目的：通过去除N端丝氨酸32/36磷酸化位点，获得人胎盘组织IκBα突变体（IκBαM）基因，构建其复制缺陷型重组腺病毒（AdIκBαM），并进行体外表达和活性检测。方法:PCR定点克隆IκBαM基因（203-1 003 bp），亚克隆至pShuttle和pGEM-T，进行PCR、双酶切、DNA测序和同源性分析。将重组质粒pShuttle-IκBαM中含CMV启动子、IκBαM cDNA和PolyA信号的表达单元定向插入Ad5腺病毒载体，构建成重组腺病毒AdIκBαM，再经脂质体介导共转染293细胞进行包装。Western blotting检测AdIκBαM在293细胞中蛋白表达情况，电泳迁移率实验观察AdIκBαM抑制佛波酯诱导的ECV304细胞核因子κB（NF-κB）激活的作用。结果:成功克隆长801 bp的新型IκBαM基因，与GenBank中登陆的IκBα基因（接受号M69043）相应核苷酸序列一致。所制备的AdIκBαM滴度为4.0×1012 pfu/L。AdIκBαM介导IκBαM基因在293细胞中表达，并以剂量依赖性方式显著抑制佛波酯诱导的ECV304细胞NF-κB活化 。结论：AdIκBαM有效介导IκBαM基因表达并特异性抑制NF-κB活性，有望应用于哮喘的基因治疗。     

动态脑电图对癫痫诊断和鉴别诊断的意义

对临床诊断癫痫的５３例和可疑癫痫的１１７例行２４ｈ动态脑电图（ＡＥＥＧ）监测。结果ＡＥＥＧ阳性率（３２．９％）明显高于常规ＥＥＧ（２０％），ＡＥＥＧ痫样放电率在癫痫组为５４．７％（２９／５３），可疑癫痫组为１５．４％（１８／１１７）。后者中有临床发作者６３例，检出痫样放电１０例，睡眠期出现痫样放电占８９．４％（４２／４７）。本文对痫样放电出现与临床发作间的关系以及癫痫诊断和鉴别诊断进行了讨论。     

多器官功能障碍综合征小鼠脾脏树突状细胞与炎症因子变化的关系

目的探讨多器官功能障碍综合征（MODS）病程中脾脏树突状细胞（DC）变化对炎症因子的影响与作用。方法采用腹腔注射酵母多糖的方法复制小鼠MODS模型，分为正常对照组和MODS组。采用流式细胞技术检测脾脏DC免疫表型，运用免疫组化技术检测脾脏中促炎因子IL-1β与抗炎因子IL-10的表达，计量观察DC与炎症因子在病程中的变化并做相关分析。结果伤后6h组，脾脏中CD11c^＋／MHC-Ⅱ’DC数目与IL-18’细胞数目均明显增多，至24h组达峰值。自48h组，CD11c^＋／MHC-Ⅱ’DC与IL-1β’细胞含量开始下降，在6天组和10～12天组降至正常组或低于正常组含量；而同时CD11c^＋／MHC-Ⅱ^-DC和IL-10阳性细胞含量则相对增多，至10～12天组阳性细胞含量显著升高达到峰值。结论DC的活性在MODS病程早期与IL-1β表达呈正相关性，在病程晚期与IL-10表达呈负相关，提示脾脏DC活性变化与促炎因子和抗炎因子均有密切的相关性。     

152株解脲支原体对9种抗生素药物敏感性检测

目的了解深圳地区解脲支原体（UU）对常用9种抗生素的药物敏感情况，指导临床合理用药。方法采用UU培养和药敏试剂盒检测UU的体外抗菌活性。结果152株UU对9种抗生素的敏感性依次为原始霉素、多西环素、交沙霉素、克拉霉素、阿奇霉素、红霉素、四环素、氧氟沙星、环丙沙星，其总的耐药发生率为33．92％。结论对UU耐药性的检测，对指导临床合理用药具有重要意义。     

检测Epstein-Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方法的建立及其初步研究

目的建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒的细胞免疫应答。方法用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果重组ＥＢＶ－ＬＭＰＩ痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ水平均高于ＴＫ＋痘苗病毒免疫组和正常组；杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白免疫组的ＣＴＬ水平也明显高于正常鼠。结论本法可以较好的反映ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的水平，而且再一次说明ＬＭＰ１基因能够诱发特异性的细胞免疫。     

Activation of the Notch signaling pathway disturbs the CD4+/CD8+, Th17/Treg balance in rats with experimental autoimmune uveitis

Objective and design

The present study aimed to investigate the relationship between the disturbed balance of CD4⁺/CD8⁺, Th17/Treg and the activation of the Notch signaling pathway in experimental autoimmune uveitis (EAU).

Methods

An EAU rat model was induced in Lewis rats, and pathology analysis was performed by hematoxylin and eosin (H&E) staining. CD4⁺, CD8⁺, Th17, and Treg levels in spleen, lymph nodes and eye tissues were determined by flow cytometry. Meanwhile, the expression of Notch1, DLL4, IL-10, and IL-17 was determined by quantitative polymerase chain reaction (Q-PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In addition, the inhibitory effect of N-(N-(3,5-difluorophenacetyl-l-alanyl))-S-phenylglycine t-butyl ester (DAPT) on Th17 differentiation by Notch signaling in vitro was further investigated using T lymphocytes from EAU rats on day 12 post-immunization by flow cytometry.

Results

The pathological results showed that inflammatory cell infiltration occurred in ocular tissues in EAU rats. The CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg ratios in EAU rats were apparently higher than those in normal control individuals. Q-PCR and ELISA analyses indicated the expression of Notch1, DLL4, IL-10, and IL-17 in EAU rats gradually increased on day 6 after immunization, peaked on day 12, and then gradually decreased. The dynamic trends in Notch1 and DLL4 expression in EAU rats were identical to those of CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg levels. DAPT can significantly inhibit the activation of Notch signaling, decrease Th17 cell differentiation, and attenuate the level of the Th17 cell lineage, contributing to the balance of the Th17/Treg ratio.

Conclusion

The activation of the Notch signaling pathway can regulate Th17 and Treg cell differentiation, disrupt the CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg balance, and aggravate the severity of EAU; inactivation of the Notch signaling pathway contributes to the CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg balance in EAU rats. Our findings highlighted that the dynamic change in the CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg ratio was consistent with the expression trend of Notch signaling in EAU rats, suggesting that Notch signaling may be a potentially important therapeutic target in clinical practice.

     

凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞对抗原特异性CTL的激活

为探讨凋亡Daudi细胞负载的树突状细胞 (DC )激发诱导肿瘤抗原特异性CTL及其生物学特性 ,采用常规方法从人外周血单个核细胞 (PBMC )诱导DC ,激发型CD40mAb联合 50Gyγ射线辐照诱导Daudi凋亡后负载DC ,然后与自体T细胞共育 ,并联合IL 2激发诱导肿瘤特异性CTL ;采用免疫荧光标记和流式细胞仪测定分析膜分子的表达 ;ELISA检测细胞因子的产生 ;Dextran FITC内吞实验分析DC的抗原摄取能力 ;3H掺入试验和51 Cr释放试验分别测定CTL的增殖和细胞毒效应。结果 :(1 )细胞因子序贯体外诱导 7d的DC ,对Dextran吞噬能力最强 ;(2 )CD40mAb诱导联合γ射线辐照 ,能有效介导Daudi细胞的凋亡 ;(3 )抗原负载联合CD40mAb激发可使DC上调表达CD1a、CD80、CD86和HLA DR ,并能促进IL 1 2的分泌 ;(4)凋亡Daudi负载后的DC在激发型CD40mAb作用下 ,能激发和扩增对Daudi细胞具有高效和特异杀伤作用的细胞毒性T细胞。因而认为凋亡肿瘤细胞负载联合CD40mAb刺激的DC可有效激活和扩增肿瘤特异性CTL。     

人类一条新的类蛋白质二硫键异构酶cDNA的克隆和表达

利用SMART技术构建了人胎脑cDNA文库，通过大规模测序筛选出一条1645bp的人类cDNA。此cDNA含有一个888bp的开放阅读框（ORF），编码一个296个氨基酸的蛋白质，预测分子量34．0KD。与目前数据库中序列比较，该cDNA编码的蛋白质与蛋白质二硫键异构酶的同源性达36％，命名为类蛋白质二硫键异构酶（PDI－L）基因，多组织Northern blot分析显示PDI－L cDNA在心、脑、肝肾等组织中均有表达，该cDNA的读框片段正确插入到改造后的pBV220表达载体中，获得了预期的表达蛋白。