褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：研究褐藻糖胶对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法:不同浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)褐藻糖胶处理MCF-7细胞48h后，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖；Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡的形态学及生化改变；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹分别测定细胞〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗和bax mRNA及其蛋白的表达。结果:不同实验浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.01），抑制率呈浓度依赖性增大；褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加，且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带；在褐藻糖胶存在下，〖STBX〗 bcl-2〖STBZ〗 mRNA和蛋白表达减少，而bax mRNA和蛋白表达增加，Bcl-2/Bax比值下降（P<0.05）。结论:褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖，且诱导其凋亡，其凋亡机制是下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。     

芳香烃受体与乳腺癌

芳香烃受体(AhR)是一种配体激活转录因子,可介导多环芳烃类化合物的毒性反应(包括致癌性),还参与一些重要的生物学过程,如信号转导、细胞分化、细胞凋亡等。近年来的研究发现,芳香烃受体在乳腺癌的发生发展中可能通过多种途径起促进作用,其中AhR与ER的抑制性交互应答可能解释为什么化学致癌物为主导致的乳腺癌仍为激素敏感性乳腺癌。以AhR为靶点治疗乳腺癌的实验研究为临床试用提供了依据。     

新城疫病毒pIRHN核酸疫苗构建和表达及对肿瘤细胞的影响

目的：研究NDV HN基因抗肿瘤作用及其可能机制。方法：以 pIRES1neo为表达载体构建了 NDV HN基因的pIRHN核酸疫苗，在体外转染HeLa细胞，用间接免疫荧光和Western blot检测pIRHN在真核细胞中表达状况，用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法，检测HN基因导致细胞死亡的类型；用3，5-二羟基甲苯法测定HeLa细胞唾液酸含量的变化。结果：pIRHN 转染HeLa细胞后，能够在真核细胞中表达，能促进肿瘤细胞死亡，其死亡方式主要以诱导细胞凋亡为主，pIRHN使 HeLa细胞唾液酸含量减少。结论：用 NDV HN基因所构建的核酸疫苗能够在真核细胞中高效表达，表达的 HN蛋白主要位于胞膜，胞浆中亦有 HN蛋白表达；pIRHN具有抗肿瘤作用，可能通过其表达产物与肿瘤细胞唾液酸受体的相互作用，发挥其抗肿瘤作用。本实验为迸一步阐明NDV抗肿瘤作用机制提供了理论依据。     

针对S基因的siRNA或shRNA表达框对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用比较

目的 化学合成针对乙型肝炎病毒（HBV）S基因的siRNA，同时制备针对相同区段的shRNA表达框，并比较二者对HepG2．2．15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用。方法 化学合成针对HBVS基因的带有FITC标记的siRNA，设计合成带有FTrc标记的引物，PCR扩增含有RNA聚合酶Ⅲ启动子H1序列和shRNA编码序列的表达框，并对扩增产物进行纯化，将等摩尔数siRNA和shRNA表达框分别用脂质体转染稳定表达HBV的HepG2．2．15细胞，转染1d后流式细胞仪检测转染效率，转染3d后RT-PCR检测靶基因mRNA的水平，用SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测HBsAg的表达。收集转染前和转染后1、3、5和7d的细胞培养上清，检测HBsAg水平，同时用荧光定量PCR方法检测HBV　DNA的含量。结果成功制备了针对HBVS基因的shRNA表达框，将其与等摩尔数siRNA分别转染HepG2．2．15细胞后，RT-PCR证实细胞中HBV　mRNA水平降低，SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测到HBsAg的表达受到抑制，细胞培养上清中HBsAg和HBV DNA含量下降。与siRNA相比，shRNA表达框对HBV的抑制作用虽然起效较慢，但持续时间更长。结论shRNA表达框和siRNA均可明显抑制HBV的转录和表达，与siRNA相比，shRNA表达框能够更持久地抑制靶基因的表达。     

人NRAGE基因重组腺病毒载体的构建及其对293细胞细胞周期的影响

目的构建hNRAGE基因的重组腺病毒载体,并研究其对293细胞细胞周期的影响。方法采用PCR方法扩增hNRAGE基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdTrack-CMV/hNRAGE。经测序检测后,用PmeI酶切使pAdTrack-CMV/hNRAGE被线性化,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组。经PacI酶切鉴定后,用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组体腺病毒Ad-hNRAGE颗粒。利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中GFP报告基因的表达,观察重组腺病毒的产生,测定病毒颗粒的浓度。用Western blot检测目的基因的表达。采用MTT法检测293细胞的活力,用流式细胞术分析hNRAGE基因对293细胞周期的影响。结果成功地构建hNRAGE重组腺病毒载体。Western blot检测结果证实,hNRAGE基因可在293细胞中表达。收获病毒后,经测定病毒颗粒的浓度大约为6.5×109个/μL。转染了重组腺病毒Ad-hNRAGE的293细胞与正常细胞相比较,增殖率显著降低,G0-G1和G2-M期的细胞增多,S期的细胞明显减少。结论hNRAGE基因可能有抑制293细胞生长的作用。     

禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的研制和初步应用

目的：获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法：以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0细胞融合，取细胞上清用HI筛选。结果：共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞；经广谱性和特异性鉴定，所有单抗株均能与所有检测的82株不同年代不同地方不同禽源H9亚型流感病毒大部分分离株反应，且所有单抗株均不与非AIV-H9病毒反应，而其中一株（8E6）能与所有检测的H9亚型病毒株反应。进行Western blot分析显示，其中8株单抗能与AIV的Mr为75000处反应，表明是针对AIVH9HA的单抗。结论：本试验获得9株广谱性特异性很好的单抗，特别是8E6株；这些单抗株为以后作病毒抗原性位点分析、临床检测和流行病学调查提供了良好试剂。     

缺血性卒中相关性肺炎危险因素的病例对照研究

目的 探讨缺血性卒中相关性肺炎的危险因素。方法 回顾性纳入2018年1月—2020年12月期间唐山市协和医院神经内科住院的急性缺血性卒中(acute ischemic stroke, AIS)患者,收集人口统计学及临床资料。根据是否发生卒中相关性肺炎(stroke - associated pneumonia, SAP)分为非SAP组和SAP组,比较两组的各项临床资料,并采用多因素logistic回归分析SAP的独立影响因素。结果 共纳入721例患者,平均年龄(65.63±12.07)岁;SAP组年龄、入院美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale, NIHSS)评分,冠心病、心房颤动、卒中史、吞咽障碍和入院格拉斯哥昏迷评分≤10分的比例、同型半胱氨酸、纤维蛋白原和白细胞计数均高于非SAP组,而SAP组入院舒张压、高密度脂蛋白胆固醇、白蛋白、白蛋白与球蛋白比值、血红蛋白和红细胞计数均低于非SAP组,差异均有统计学意义;多因素logistic回归分析显示,年龄增高(OR = 1.055,95%CI:1.009～1.103)、入院NIHSS评分增加(OR = 1.290,95%CI:1.154～1.444)、白细胞计数升高(OR = 1.267,95%CI:1.101～1.457)是SAP发生的危险因素。结论 缺血性卒中相关性肺炎与高龄、入院NIHSS评分增加和白细胞计数升高相关。     

重庆市北碚区居民丙肝知识知晓率及相关行为现状调查

目的了解重庆市北碚区居民丙肝知识知晓率、高危行为现状及两者之间的关系,为构建提高居民丙肝安全行为的干预方式提供科学依据。方法2018—2019年期间根据《重庆市丙肝防治知识知晓率基线调查方案》要求采取分层随机抽样法抽取重庆市北碚区居民开展丙肝知识、高危行为问卷调查,采用SPSS 20.0软件对数据进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果共调查200名居民,丙肝防治知识问题回答对6道及以上51人(25.5%),全部答对仅4人(2.0%),全部答错103人(51.5%)。丙肝防治知识知晓率与文化程度有关(P<0.05),与人群类别、家庭人均月收入、年龄、性别等因素不相关(P均>0.05)。丙肝防治知识知晓与不知晓的高危行为发生率比较,差异无统计学意义(χ²=0.966,P=0.367)。结论该地区人群丙肝防治知识知晓率还处于较低水平,建议在今后的工作中应针对丙肝制定详细宣教计划,组织开展各种形式的宣教活动,有效引导公众提高丙肝防治意识。     

艾滋病患者渐进性肌肉放松训练配合心理干预的应用效果

目的 探讨渐进性肌肉放松训练配合心理干预对艾滋病患者服药依从性及心理状态的影响。方法 选择2017年8月—2020年8月于本院就诊的68例艾滋病患者,按随机数字表法分为对照组和观察组,每组34例。对照组实施常规护理干预,观察组在此基础上实施渐进性肌肉放松训练配合心理干预,比较两组服药依从性及医院焦虑抑郁量表(HospitalAnxietyand Depresseo Scale,HAD)评分。结果 观察组服药总依从率为97.06%,高于对照组的70.59%,(χ2=8.785,P=0.003);观察组干预2周后焦虑评分为(14.35±1.67)分、抑郁评分为(13.98±1.38)分,均低于对照组的(15.63±1.59)分、(15.08±1.27)分,(t=3.237、3.420,P=0.002、0.001)。结论 渐进性肌肉放松训练配合心理干预应用于艾滋病患者,能够提高患者服药依从性,改善患者心理状态。     

家庭养育方式与儿童睡眠状况关系分析

目的 分析家庭养育方式与儿童睡眠状况的关系,寻求对儿童睡眠有利的养育方式,为改善儿童睡眠质量提供相应的参考。方法 收集2021年9—12月于北京中医药大学孙思邈医院儿科体检的214名6~12岁儿童为研究对象,运用儿童版父母教养方式问卷(EMBU-C)及儿童睡眠习惯问卷(CSHQ)评价家长养育方式及儿童睡眠状况,并分析其相关性。结果 CSHQ总分在不同年龄(t=6.45,P<0.001)、共睡情况(F=11.82,P<0.001)、电子屏幕使用时间(F=5.13,P=0.007)等因素上差异有统计学意义;父母EMBU-C与CSHQ的多个维度之间存在显著相关(P＜0.05);多元线性回归分析显示:从与抚养人同床睡到不同房间睡,CSHQ总分逐渐降低(β=-1.81),母亲情感温暖得分与CSHQ总分呈负相关(β=-0.50),电子屏幕使用时间与CSHQ总分呈正相关(β=1.89),差异均有统计学意义(P＜0.05),三者共同解释18%的变异(ΔR²=0.18)。结论 儿童的睡眠状况与年龄及家庭养育方式有关,家庭养育方式中的共睡和屏幕使用时间过长会降低儿童的睡眠质量,母亲情感温暖则对儿童睡眠的改善有一定意义。