HPV16型E5基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-E5的构建与鉴定

目的构建HPV16型E5基因重组逆转录病毒表达载体。方法根据HPV16型E5基因已知序列,用PCR方法扩增E5片段,利用逆转录病毒载体pLEGFP-N1构建重组质粒pLEGFP-E5。酶切电泳验证重组质粒pLEGFP-E5后,利用脂质体将重组质粒pLEGFP-E5转染入包装细胞PA317。收集PA317病毒上清转染NIH3T3细胞。结果 PCR结果显示扩增片断大小约252bp,与预期相同。重组质粒酶切后显示其大小约7300bp。pLEGFP-E5成功转染检测细胞。结论重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-E5基因构建成功,能有效感染靶细胞。     

液电碎石球囊扩张术中B超在治疗复杂肝内胆管结石中的应用研究

目的探讨手术联合液电碎石、胆道球囊扩张、术中B超在治疗复杂性肝内胆管结石的应用价值。方法选择2006年8月至2009年1月50例多发性肝内结石并胆管狭窄手术患者（观察组）作为研究对象。主要观察该治疗方法所需的手术时间、术中出血量、术后并发症、住院时间和费用、残留结石、结石复发、优良率等指标,与2005年以前50例采用多术式单纯联合纤维胆道镜治疗该病（对照组）的疗效进行对比分析。结果对比2组结果,除手术时间和住院时间（P〉0.05）无明显差异外,观察组术中出血量、术后并发症、残留结石、结石复发、住院费用等均低于对照组（P〈0.05）,优良率高于对照组（均P〈0.05）,均有明显差异。结论胆道镜配合液电碎石球囊扩张和术中超声治疗复杂肝内胆管结石,安全有效,可以明显降低结石残留,提高优良率。     

同一机构4年采用自体骨髓单个核细胞移植治疗严重下肢缺血56例1年随访

背景:自体骨髓单个核细胞移植治疗下肢缺血已经在临床上取得了较满意的短期疗效,但缺少长期随访的报道,尤其对于已经出现严重下肢缺血症状的外周动脉疾病患者,相关的报道较少.目的:观察自体骨髓单个核细胞移植治疗严重下肢缺血患者随访4周和1年时的疗效.方法:自2005-01/2009-01收治56例59条严重下肢缺血患者.于患者髂骨抽取骨髓血300 mL,分离制备自体骨髓单个核细胞.移植部位从中下肢动脉主干闭塞处开始,按动脉行走的路径,将制成的干细胞悬液每隔1.0~2.0 cm注射1针,每次注射约1 mL,行下肢缺血肌肉局部移植.所有患者均采用单次移植治疗,单个核细胞总量为(0.31~29.46)×109,平均10.93×109.结果与结论:所有患者均获随访1年.术后4周、1年的疼痛目测类比评分、最大行走距离、踝肱指数及经皮氧分压优于术前(P < 0.05).术后1年血管造影显示新生侧支血管评估有效率28.8%(17/59).所有患者移植后无任何并发症出现.     

健康体检者血尿酸结果分析及对策

分析33 742例健康体检人群的血尿酸水平,指导健康教育。方法对33 742名健康体检者血尿酸浓度测定,分析比较各年龄段及男女性别间血尿酸水平及高尿酸血症检出率。结果血尿酸水平男性为（349±73）μmol/L,女性为（257±59）μmol/L。高尿酸血症检出率：男性15.5%,女性6.7%,男性明显高于女性（P〈0.01）。血尿酸水平峰值和高尿酸血症峰值男性在30~39岁组,女性峰值≥70岁组。结论该33 742名健康体检人群的高尿酸血症检出率11.7%,并高发于中年男性,应对健康人群进行高尿酸血症相关知识的普及,改变不良生活习惯,加强血尿酸监测,有效预防和减少高尿酸血症的患病率。     

血管内支架置入术前后动态血压变化

目的探讨血管内支架置入术前后患者动态血压的变化。方法使用动态血压监测仪测量7例血管内支架置入术患者支架置入前后的动态血压值，计算变异系数。结果血管内支架置入后，7例患者的血压均有不同程度下降；颈内动脉支架置入患者血压变异系数减小；椎一基底动脉支架置入患者血压变异系数增大。结论支架置入术对血管狭窄患者血压的影响尚不明确。     

p16、Ki-67蛋白表达及HPV检测在宫颈上皮内瘤变中的诊断意义

目的 探讨p16、Ki-67联合应用在宫颈上皮内瘤变(CIN)诊断及分级中的意义及人乳头状瘤病毒(HPV)感染与CIN的关系.方法 分别对160例宫颈各类病变采用免疫组化方法检测p16、Ki-67蛋白表达情况,并行人乳头状瘤病毒分型检测.结果 ①宫颈上皮内低度瘤变(CINⅠ)中,p16阳性率为85.7%,Ki-67阳性率为67.8%,较宫颈良性病变的阳性率明显增加(P<0.01);宫颈上皮内高度瘤变(CINⅡ-Ⅲ)中,p16阳性率为100%,Ki-67阳性率为98.3%,两者相比差异极显著(P<0.01).在CINⅡ-Ⅲ中,p16、 Ki-67表达呈正相关.②高危型HPV在宫颈良性病变、CINⅠ和CINⅡ-Ⅲ病变组感染者分别为30.6%、75.7%和93.3%,宫颈CINI和CINⅡ-Ⅲ明显高于良性病变组,差异极显著(P<0.01).随着宫颈上皮内瘤变程度加重,HPV感染与p16表达呈正相关.结论 p16、Ki-67联合应用可作为宫颈良性病变与CINⅠ以及CINⅠ与CINⅡ-Ⅲ鉴别的重要标记物;高危型HPV感染与宫颈上皮内瘤变密切相关,在高危人员筛查与判断预后上有重要意义.     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞表达MCP-1及IL-8的影响

本研究探讨肿瘤坏死因子仪（TNF-α）刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）后对细胞表达单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和白介素-8（IL-8）的影响及其可能的分子机制。用RT—PCR的方法检测MCP-1和IL-8mRNA的表达,免疫荧光染色法检测HUVEC核内转录因子KB（NF-κBp65）的激活。结果表明：TNF-α刺激HUVEC后,细胞内MCP-1和IL-8mRNA的表达增强,且有时相性变化;IL-8mRNA表达8小时达到高峰,MCP-1mRNA表达12小时达到高峰。细胞核内NF-κBp65蛋白表达增强,在感染后0．5小时开始增加,1小时达峰值。然后,胞浆染色逐渐减弱,而核染色增强,表明转录因子NF-κBp65明显的核移位。结论：TNF-α刺激HUVEC后能增加细胞内MCP-1、IL-8mRNA和NF-κBp65蛋白质的表达,提示TNF-α可能通过NF-κB途径诱导血管内皮细胞MCP-1和IL-8等炎症介子的过度表达。     

硼替佐米为主的联合化疗方案加或不加造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤疗效分析

目的 观察以硼替佐米为主的联合化疗方案加或不加造血干细胞移植(SCT)治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者的疗效及不良反应.方法 31例初治或复发(难治)MM患者接受硼替佐米为主治疗.之后有6例患者接受SCT治疗.按照EBMT标准评价疗效,WHO标准判断不良反应.结果 ①有5例患者由于急性肾功能衰竭、肿瘤溶解综合征等原因终止治疗,其中3例死亡.可以统计疗效的26例患者共完成了99个疗程的治疗,总有效率(ORR)为80.8%.15例初治患者的ORR为100.0%.11例复发(难治)患者的ORR为54.6%.②15例初治患者中有7例完成了8个疗程的治疗,动态观察发现随着疗程的延长疗效不断提高.③6例初治患者化疗达完全缓解(CR)或接近CR(mCR)后行SCT治疗,其中1例复发,5例随访至移植后6～11个月仍持续CR.未采取SCT巩固的9例初治患者中除1例持续CR外有6例在停药后1～3个月复发或进展,2例失访.④多数治疗相关不良反应为l～2级,有3例患者因为末梢神经炎、窦性心动过缓等原因降低硼替佐米的用量,5例因严重不良反应终止治疗.结论 硼替佐米治疗初治及复发(难治)MM疗效肯定,但可能需要进行巩固治疗(如SCT)以维持疗效.硼替佐米不良反应多数轻微且可以耐受,但也应注意少见的严重不良反应.     

超声联合微泡作用下即时产生非酶化一氧化氮的实验

背景:一氧化氮是体内重要的气体信号分子,近年来研究发现一氧化氮可以在无一氧化氮合成酶存在的条件下合成,即非酶化一氧化氮合成,而非酶化途径合成一氧化氮,可能是许多生物学效应的机制之一.目的:观察超声联合微泡是否可以实现或者增效一氧化氮非酶途径的产生.方法:将L-精氨酸和H2O2按照1:1,10:1,10:0.1,1:10的比例混合,应用频率为1 MHz,输出功率为0.5,1.0,1.5 W/cm2的超声分别持续辐射60 s,论证最优的L-精氨酸和H2O2的浓度比例以及最适的超声输出功率.确定最适浓度比和超声输出功率后,实验设立4组,分别进行超声联合微泡、单纯超声、微泡进行干预,空白对照组不进行干预,比较各组一氧化氮生成量.结果与结论:体外试验中,L-精氨酸和H2O2的浓度比例以10:1为最佳,选择1.5 W/cm2声强作为超声最优值.以此最适浓度比和超声输出功率干预,超声联合微泡组的一氧化氮生成量多于超声组(P < 0.01);超声组一氧化氮生成量优于空白对照组(P < 0.01);而微泡组的一氧化氮生成量与空白对照组没有差异.结果表明超声联合微泡可以增效一氧化氮的非酶合成.     

顺铂诱导人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞内质网应激差异的研究

目的研究顺铂诱导人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞内质网应激的差异。方法顺铂分别作用SKOV3组、SKOV3/DDP组细胞0 h、12 h、24 h。MTT检测两种细胞对顺铂敏感性差异;Western blot方法检测并比较内质网应激相关蛋白表达;RT-PCR方法检测顺铂对各时间点细胞的XBP-1表达。结果顺铂诱导两种细胞内质网应激存在显著差异。顺铂引起SKOV3细胞中内质网应激相关蛋白明显活化;而对SKOV3/DDP细胞中内质网应激相关蛋白没有明显影响;顺铂诱导SKOV3/DDP中XBP-1明显表达上调。结论顺铂诱导的内质网应激相关基因的表达差异可能是卵巢癌细胞耐药机制之一。