利用数据库资料分析DNA甲基化调控AC004540.4表达水平与肝细胞癌预后相关性

目的通过挖掘癌症基因组图谱数据库(TCGA),探讨在肝细胞癌(HCC)中DNA甲基化与AC004540.4表达及与预后的关系。方法从TCGA数据库获取374例HCC组织和50例癌旁组织的基因表达谱数据,380例HCC组织和50例癌旁组织的甲基化数据。edgeR包筛选差异表达基因,limma包筛选差异甲基化基因,Spearman秩次相关判断两者的相关性。在基因表达综合数据库(GEO)中,GSE101728表达谱芯片、GSE54503甲基化芯片作为外部验证数据集。HCC预后影响因素分析采用Cox回归模型。使用R软件计算AC004540.4与全基因组mRNA的相关系数,对共表达的mRNA进行功能富集分析。结果在TCGA数据库中,HCC和癌旁组织的AC004540.4表达水平中位数(四分位间距)分别为2.322(2.700)和6.129(1.858),差异有统计学意义,Z=-9.287,P<0.001。同时,在HCC和癌旁组织中,AC004540.4启动子甲基化水平中位数(四分位间距)分别为0.412(0.405)和0.195(0.165),差异有统计学意义,Z=-5.651,P<0.001。在GEO数据库中,HCC和癌旁组织的AC004540.4表达水平中位数(四分位间距)分别为3.313(2.410)和10.063(0.818),差异有统计学意义,Z=-3.003,P=0.003。同时,HCC和癌旁组织的AC004540.4启动子甲基化水平中位数(四分位间距)分别为0.346(0.358)和0.113(0.044),差异有统计学意义,Z=-6.549,P<0.001。甲基化位点(cg12492504、cg13268603、cg14592933、cg24755163、cg17035412和cg26526379)的甲基化水平与AC004540.4表达呈中度负相关,rs分别为-0.465、-0.492、-0.447、-0.539、-0.451和-0.456,均P<0.001。Cox多因素分析结果发现,AC004540.4低表达是HCC患者预后的独立危险因素,HR=1.720,95%CI为1.116~2.652,P=0.014。富集分析提示,与AC004540.4共表达基因集主要富集于Wnt蛋白结合、向上调节端粒酶活性等生物学功能,以及调控细胞周期、胆汁分泌等信号通路。结论AC004540.4表达受其甲基化调控,启动子区域高甲基化可能导致转录沉默,并且与HCC患者预后相关,可成为HCC患者诊断和预后判断标志物。     

中国非综合征遗传性聋人群GJB6基因突变分析

目的：研究GJB6基因[连接蛋白30（Cx30）-]在中国非综合征遗传性聋人群中的突变情况。方法：用特定引物对372例非综合征遗传性聋患者（其中295例分子病因不明,77例携带GJB2病理性单等位基因突变）和182例正常对照者进行聚合酶链反应,检测GJB6基因的342kb大片段缺失del（GJB6〉D13S1830）,并进行GJB6基因编码区扩增,以产物直接测序方法进行突变检测及鉴定。结果：372例耳聋患者中未发现GJB6 del（GJB6〉D13S1830）,其中1例发现携带GJB6基因点突变404C〉A,导致了氨基酸的错义改变T135K,多物种Cx30氨基酸序列进化分析证实该点位于Cx30高度保守的第3跨膜区。对照组中未发现同样突变。结论：GJB6基因突变在中国耳聋人群中整体发生频率较低,GJB6基因可暂不列为第一线耳聋基因检测项目。     

基于“病证-效应-生物样本分析”方法的桑寄生祛风湿功效物质及归经研究

实验建立与桑寄生功效相对应的佐剂型关节炎模型,观察其祛风湿功效物质及其在大鼠体内分布与归经的关系。通过左后足注射弗氏完全佐剂(0.1 mL),8 d后阴性、模型组给予生理盐水,阳性对照组给予雷公藤多苷混悬液(10 mg·kg^-1),桑寄生高、中、低剂量组给予桑寄生高(10 g·kg^-1)、中(5 g·kg^-1)、低(2.5 g·kg^-1)剂量水煎液,连续给药21 d。造模第9天起,每7 d测1次大鼠左后足踝关节直径,给药第22天桑寄生高剂量组部分大鼠于不同时间点摘眼球取血,处死,并取心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠、脑组织,其余大鼠均在给药30 min后摘眼球取血,取左后足踝关节,ELISA法检测血清中白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,HPLC检测高剂量组大鼠各组织中芦丁、萹蓄苷、槲皮苷的含量,DAS 2.0分析相关药动学参数。结果表明,桑寄生水煎液能明显改善佐剂型关节炎模型大鼠足肿胀状况,且能降低大鼠血清中IL-1β,TNF-α含量。大鼠体内功效物质分析结果显示芦丁仅在胃中有少量分布,萹蓄苷在组织中AUC_0-t为胃>小肠>肾,体内维持时间为肾=胃>小肠>肺>心;槲皮苷在组织中AUC_0-t为胃>肾>肝>心>肺>脾>小肠>脑>大肠>血清,体内维持时间为肾=肝=小肠=脑=肺=脾=心=胃>大肠>血清。由此得出,桑寄生水煎液可有效治疗佐剂关节炎模型大鼠。萹蓄苷、槲皮苷为桑寄生祛风湿功效的重要物质。萹蓄苷、槲皮苷在大鼠体内分布与桑寄生归肾、肝经的传统认识一致。     

马兜铃内酰胺-Ⅰ进入人肾小管上皮细胞及细胞内分布和蓄积的观察

目的:观察马兜铃内酰胺-Ⅰ(AL-Ⅰ)能否进入肾小管上皮细胞及其在细胞内的分布、蓄积情况。方法:以体外培养的人类近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为研究对象,用不同质量浓度的AL-Ⅰ(5～20μg.mL^-1)处理细胞,采用荧光倒置显微镜观察细胞内由AL-Ⅰ产生荧光的有无及其分布,并在洗去含AL-Ⅰ的培养液后继续培养HK-2细胞48h,观察细胞内AL-Ⅰ荧光的持续情况以判断其蓄积性。结果:不同质量浓度的AL-Ⅰ(5～20μg.mL^-1)处理细胞0.5h内,均能在肾小管上皮细胞内观察到蓝绿色的AL-Ⅰ荧光,并且荧光仅分布于细胞浆中,而在细胞核内未观察到。在洗去含AL-Ⅰ培养液后继续培养时AL-Ⅰ的荧光可在细胞内持续存在48h以上,其持续存在部位仍为细胞浆。结论:AL-Ⅰ可以在短时间内迅速进入肾小管上皮细胞,其分布部位在细胞浆,不进入细胞核;AL-Ⅰ在细胞浆内的蓄积可能与其致肾损伤的毒性作用机制有关,即通过进入肾细胞并蓄积于细胞内在肾病过程中持续发挥毒性作用。     

替尼泊甙方案治疗恶性淋巴瘤疗效分析

目的 探讨进一步提高恶性淋巴瘤疗效的方法。方法 以替尼泊甙联合CHOP方案随机治疗23例恶性淋巴瘤,按全国统一标准评定疗效。结果 完全缓解率73．9％,部分缓解率13.1％,有效率87％,未出现严重不良反应。结论 替尼泊甙联合CHOP方案治疗恶性淋巴瘤有更好的疗效。     

抗痛风胶囊对急性痛风性关节炎的作用及下调关节软骨组织MMP-1蛋白表达

目的:观察抗痛风胶囊对大鼠急性痛风性关节炎(AGA)的治疗作用及对软骨组织基质金属蛋白酶-1(MMP-1)蛋白表达的影响。方法:大鼠足踝关节注射尿酸钠悬液诱导AGA,容积法检测踝关节肿胀程度,HE染色观察关节软骨组织的病理组织学变化,免疫组织化学染色及图像分析检测关节软骨内MMP-1蛋白表达。结果:抗痛风胶囊0.3 mg/kg和1.2 mg/kg连续灌胃给药5d,明显减小AGA大鼠足容积,第5d关节肿胀抑制率高达70%～90%。HE染色后显微镜下观察,可见模型组大鼠足踝关节软骨组织细胞排列紊乱、出现充血、肿胀和关节表面的破坏,抗痛风胶囊治疗后,明显改善其病理组织学变化。免疫组织化学检测可见,与模型组比较,抗痛风胶囊和秋水仙碱(0.8mg/kg)均明显下调软骨细胞MMP-1蛋白的表达,其平均光密度值明显降低。结论:抗痛风胶囊对AGA具有明显治疗作用,且降低AGA大鼠关节软骨组织MMP-1蛋白表达可能该药缓解关节炎症肿胀的主要作用机制之一。     

A preliminary report on the investigation of medicinal plant resources in the Liupan Mountains of Ningxia Hui Autonomous Region

In this paper, 423 species of medicinal plants belonging to 94 families in Liupan Mountains of Ningzia Hui Autonomous Region have been reported, of which 403 species belonging to 79 families are medicinal spermatophytes. The paper may serve as a reference for medical authorities in developing and utilizing plant resources.     

盐酸甲氯芬酯的合成

目的合成盐酸甲氯芬酯。方法以对氯苯氧乙酸和N,N-二甲基乙醇胺为起始原料,以对甲苯磺酸为催化剂,在甲苯条件下共沸分水,进行酯化反应,制得甲氯芬酯。然后在异丙醇中直接加入氯化亚砜进行成盐,最终制得盐酸甲氯芬酯。结果两步收率达到60%。结论此工艺条件简单可行,成本低,且适合工业化生产。     

"循经移疮泄毒"治疗癌肿方法的初步构建及临床意义

目的:构建"循经移疮泄毒"治疗晚期癌肿方法的操作流程,并初步分析其临床意义。方法:对晚期肝癌患者循足厥阴肝经在"膝关"腧穴下行部位实施移疮泄毒,采用ELECSYS电化学分光免疫法对移疮部位的渗出液和同期血清中肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)等进行检测,并与非肝经所对应脏腑晚期癌肿患者的循肝经移疮泄毒疗效进行对比分析。结果:在晚期肝癌患者循肝经移疮泄毒的发疱液中检出高于血清浓度的癌胚抗原(CEA)等物质。结论:采用"循经移疮泄毒"法,有助于癌肿毒性物质排出体外。     

白虎加人参汤干预糖代谢及糖尿病并发症的实验研究进展

通过检索文献并整理分析,总结了1995年至2012年间有关白虎加人参汤干预糖代谢及糖尿病并发症的实验室研究进展。主要包括以下4方面：（I）降血糖作用及机理的研究进展;（2）改善糖尿病并发症的研究进展;（3）白虎加人参汤各单味药干预糖代谢的物质基础研究;（4）白虎加人参汤干预糖代谢的配伍规律研究。