Bio-imaging of nitric oxide-producing neurones in slices of rat brain using 4,5-diaminofluorescein

4,5-Diaminofluorescein (DAF-2) was used to identify individual nitric oxide (NO)-producing neurones in brain slices in vitro. Coronal slices of midbrain or hippocampus, 300 microm thick from young adult rats, were incubated for 30 min in 1 microM DAF-2 diacetate (DAF-2 DA) and maintained in ACSF at 33 degrees C. Illumination at 450-490 nm revealed punctate fluorescence in neurones in the lateral tegmental nucleus, dorsal raphe nucleus, dorsolateral periaqueductal grey matter, deep collicular layers and cortical areas. Neurones in the hippocampal pyramidal cell layer, molecular layer of the dentate gyrus and the hilus fluoresced also. The fluorescence was abolished by pre-incubation of slices with L-NAME (100 microM-1 mM), the inhibitor of constitutive nitric oxide synthase (NOS), but not by D-NAME (100 microM) or L-NIL (5-50 microM), an inhibitor of inducible NOS. In some superficially located arterioles, there were small regions of bright fluorescence close to the outer smooth muscle wall and diffuse fluorescence within the adjacent smooth muscle cells. A diffuse fluorescence was also seen in some superficially located capillaries. Basal production of NO was not seen within deeper blood vessels. DAF-2 DA offers a sensitive indicator for visualising basal production of NO with high spatial resolution and could provide a means of identifying NOS-containing neurones in brain slices in vitro prior to neurophysiological study.     

三种虫草抗氧化活性的化学发光法研究

为研究冬虫夏草、蛹虫草、蒙山虫草3种虫草的抗氧化活性，考察实验条件对结果的影响，采用化学发光法测定3种虫草清除超氧阴离子自由基的活性。结果显示，3种虫草的水提液中蛹虫草样品的抗氧化活性较高，蒙山虫草和冬虫夏草的抗氧化活性比较接近。提示：蛹虫草和蒙山虫草有着良好的应用前景，有望替代冬虫夏草应用于临床。     

nm23-H1基因对人肺癌细胞中细胞外信号调节激酶活性的影响

目的探讨肿瘤转移抑制基因nm23-H1对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2活性的影响.方法应用特异性识别总ERK1/2(p44/42 MAP kinase)和双磷酸化ERK1/2(phospho-p44/42 MAP kinase)的抗体及蛋白印迹法(Western blot),检测L9981(缺失nm23-H1基因的原代肺癌细胞株)、L9981-nm23-H1(转染了nm23-H1基因的L9981细胞株)、L9981-PLXSN(转染了空载体的L9981细胞株)中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2的水平.磷酸化ERK1/2活性应用非放射性免疫沉淀和Western blot法以及p44/42 MAP kinase分析试剂盒予以检测.结果 L9981-nm23-H1细胞株中磷酸化ERK1/2的水平,以及ERK1/2活性均显著低于L9981细胞株和L9981-PLXSN细胞株(P<0.01),L9981和L9981-PLXSN细胞株间磷酸化ERK1/2水平和ERK1/2活性比较均无显著性差异(P＞0.05).三个细胞株间总ERK1/2水平比较均无显著性差异(P>0.05).结论 nm23-H1基因可明显靶向地抑制人高转移肺癌细胞株L9981中ERK1/2的转录表达和ERK1/2的活性.推测nm23-H1基因的作用机制可能与其抑制了MAPK/ERK信号传导通路有关.     

PACS实施中的RFP模板及其应用

通过结合国内医疗体系的现状和借鉴国际上成熟的PACS实施经验,构建了一个RFP模板.该模板从技术、运作和商务三个方面对PACS实施中的需求进行了讨论,从项目概况、系统组成、系统集成等方面对RFP的主要内容进行了分析,并基于QFD技术形成了层次化结构的UR树.该模板经浙江大学医学院附属第一医院在全院PACS系统的实施中应用,表明,是可行的和有效的.     

肉桂中查耳酮的类似胰岛素作用

为了进一步揭示肉桂活性成分的化学物质基础,对肉桂进行综合利用开发.近几年,各国学者对其进行了较为系统的研究,结果发现肉桂中除含有桂皮醛、醋酸树皮酯、桂皮酸、黄酮类等已发现的物质外,还含有另外一种在抑制3T3-L1脂肪类固醇的过程中有类似胰岛素作用的羟基查耳酮类化合物.     

反相高效液相色谱法测定犬血浆中左氧氟沙星浓度及其犬体内药代动力学

目的 :建立测定犬体内左氧氟沙星血药浓度的反相高效液相色谱法 ,并测定其犬体内药代动力学。方法 :以环丙沙星为内标 ,采用 10 %高氯酸为沉淀剂处理犬血浆样品 ,色谱柱为DIKMADiamon silTM C18,5m ,15 0mm× 4 .6mm ,流动相为甲醇 PBS 三乙胺 异丙醇 (33 6 7 0 .14 0 .4 ,用磷酸调pH为 3.0 ) ,流速 1.2ml·min-1,柱温 2 0℃ ,荧光检测(λex=2 95nm ,λem=4 40nm)。结果 :血药浓度线性范围 0 .2 5～ 5 0mg·L-1(r =0 .9998) ,最低检测限浓度为 0 .0 2mg·L-1(S N >3) ,绝对回收率为 83.0 %～85 .6 % (n =5 ) ,方法回收率为 92 .10 %～ 10 6 .77%(n =5 ) ,日内和日间RSD分别为 1.3%～ 4 .0 %和1.8%～ 8.2 % (n =5 )。结论 :本方法简便、灵敏、精密度高 ,重现性好 ,适用于左氧氟沙星犬体内药代动力学研究及生物等效性研究