Novel loss-of-function variant in DENND5A impedes melanosomal cargo transport and predisposes to familial cutaneous melanoma

PurposeMore than half of the familial cutaneous melanomas have unknown genetic predisposition. This study aims at characterizing a novel melanoma susceptibility gene.MethodsWe performed exome and targeted sequencing in melanoma-prone families without any known melanoma susceptibility genes. We analyzed the expression of candidate gene DENND5A in melanoma samples in relation to pigmentation and UV signature. Functional studies were carried out using microscopic approaches and zebrafish model.ResultsWe identified a novel DENND5A truncating variant that segregated with melanoma in a Swedish family and 2 additional rare DENND5A variants, 1 of which segregated with the disease in an American family. We found that DENND5A is significantly enriched in pigmented melanoma tissue. Our functional studies show that loss of DENND5A function leads to decrease in melanin content in vitro and pigmentation defects in vivo. Mechanistically, harboring the truncating variant or being suppressed leads to DENND5A losing its interaction with SNX1 and its ability to transport the SNX1-associated vesicles from melanosomes. Consequently, untethered SNX1-premelanosome protein and redundant tyrosinase are redirected to lysosomal degradation by default, causing decrease in melanin content.ConclusionOur findings provide evidence of a physiological role of DENND5A in the skin context and link its variants to melanoma susceptibility.     

基于多模态影像的难治性颞叶癫痫分型研究

约1/4的难治性颞叶癫痫患者的发作无法通过常规前颞叶切除术得到有效控制,这可能是因为疾病存在多种复杂的亚型,且部分亚型涉及颞叶外的脑区病变。基于多模态脑影像特征,使用隐含狄利克雷分布模型可以估计潜在疾病因子及各因子在患者大脑内的表达程度,有助于个体精准分型。该研究通过PET/MR同步一体扫描仪采集了86名难治性颞叶癫痫患者的T1加权影像和FDG PET影像,并采集了39名健康志愿者的T1加权影像和36名健康志愿者的FDG PET影像作为对照。该研究提取与癫痫病理相关的灰质体积和葡萄糖摄取值,使用隐含狄利克雷分布进行分型,将疾病因子的数量分别设为3、4、5,进行多次实验,并对四因子模型中的各疾病因子与临床指标之间的关系进行统计分析。研究发现,选取不同数量的疾病因子进行分型时得到的结果具有一定的相似性。在四因子模型中存在与病灶偏侧性、癫痫发作年限和认知能力显著相关（P<0.05）的疾病因子。该研究对颞叶癫痫分型具有一定的参考价值。     

A volumetric method for estimation of breast density on digitized screen-film mammograms

A method is described for the quantitative volumetric analysis of the mammographic density (VBD) from digitized screen-film mammograms. The method is based on initial calibration of the imaging system with a tissue-equivalent plastic device and the subsequent correction for variations in exposure factors and film processing characteristics through images of an aluminum step wedge placed adjacent to the breast during imaging. From information about the compressed breast thickness and technique factors used for taking the mammogram as well as the information from the calibration device, VBD is calculated. First, optical sensitometry is used to convert images to Log relative exposure. Second, the images are corrected for x-ray field inhomogeneity using a spherical section PMMA phantom image. The effectiveness of using the aluminum step wedge in tracking down the variations in exposure factors and film processing was tested by taking test images of the calibration device, aluminum step wedge and known density phantoms at various exposure conditions and also at different times over one year. Results obtained on known density phantoms show that VBD can be estimated to within 5% accuracy from the actual value. A first order thickness correction is employed to correct for inaccuracy in the compression thickness indicator of the mammography units. Clinical studies are ongoing to evaluate whether VBD can be a better indicator for breast cancer risk.     

应用FISH、FCM检测APL PML/RARA融合基因及临床应用的研究

目的　研究应用荧光原位杂交技术 (FISH)、流式细胞技术 (FCM)检测急性早幼粒细胞白血病 (APL)PML/RARa融合基因及残留白血病细胞的意义。方法　应用CG、M -FISH、FCM对 30例APL患者初发和缓解期的骨髓标本进行分析 ,分别检测t(15 ;17)易位和PML/RARa融合基因及残留白血病细胞的存在。结果　对初发期骨髓标本进行CG和FISH分析发现 ,10 0 %具有t(15 ;17)易位 ,阳性核型占 6 8%～ 10 0 % ,其中有 8例还伴有其他异常 ;10 0 %具有PML/RARa融合基因 ,且阳性中期相的比例高达 96 %～ 10 0 % ;结果具有显著差异 (P <0 0 0 1)。对CR期的骨髓标本进行CG、FISH分析 ,CG为正常核型 ,FISH仍可检出 0 %～ 4 5 %的PML/RARa融合基因。对CR后 12个月的标本进行CG、FISH分析 ,CG均为正常核型 ;FISH仍可检出 0 %～ 37%的PML/RARa融合基因 ,较CR期有所降低。对这 30例APL患者初发期、完全缓解期及完全缓解后 12个月时进行了FCM检测 ,并得出定性结果。完全缓解期检测结果与M -FISH分析一致 ;对完全缓解后 12个月时M -FISH结果进行定性分析发现 30例患者中有 6例为融合基因阴性 ,相应的FCM定性分析结果却发现只有其中的 2例呈现阴性 ,其余 4例仍然为阳性。随访至CR后 2年 ,发现 7例PML/RARa融合基因阳性中期相比例较高 (CG分     

长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制

目的 探讨长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 选取2018年1月—2019年10月南京江北医院骨科脊柱骨折患者手术切除的正常椎间盘标本18例,其中男11例、女7例,年龄为22~46 （38.3±4.3）岁,PfirrmannⅠ级6例、Ⅱ级12例。取椎间盘标本常规分离、培养髓核细胞,使用10 ng/mL IL-1β处理髓核细胞获得退变髓核细胞。将退变髓核细胞分为沉默对照组、KLHL7-DT沉默组、过表达对照组、KLHL7-DT过表达组。4组细胞分别对应转染沉默对照序列、siRNA-KLHL7-DT沉默序列、过表达对照序列、KLHL7-DT过表达序列。取转染后4组退变髓核细胞采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）蛋白的表达情况。结果 （1）KLHL7-DT过表达组EdU染色阳性细胞/DAPI染色阳性比值（0.147±0.002）低于过表达对照组（0.203±0.007）,而KLHL7-DT沉默组比值（0.428±0.050）高于沉默对照组（0.240±0.032）,差异均有统计学意义（t=14.25、-5.44,P值均<0.05）。（2）KLHL7-DT过表达组细胞凋亡率（19.01%±0.41%）高于过表达对照组（14.38%±0.31%）,KLHL7-DT沉默组细胞凋亡率（16.08%±0.59%）低于沉默对照组（17.42%±0.36%）,差异均有统计学意义（t=15.69、3.36,P值均<0.05）。（3）Western blot结果显示,KLHL7-DT过表达组细胞Aggrecan和Col Ⅱ蛋白的相对表达量（分别为0.34±0.29、0.57±0.11）均低于过表达对照组（1.00±0.22、1.05±0.10）,KLHL7-DT沉默组Aggrecan和Col Ⅱ蛋白的相对表达量（分别为1.77±0.14、1.63±0.12）均高于沉默对照组（1.10±0.18、0.98±0.08）,差异均有统计学意义（t=3.10、5.54、-5.05、-7.66,P值均<0.05）。结论 上调KLHL7-DT的表达可抑制退变髓核细胞的增殖,促进退变髓核细胞的凋亡,其机制可能是通过调节细胞外基质Aggrecan、Col Ⅱ蛋白的合成,进而参与椎间盘退变的发展。     

脑源性微囊泡对脐静脉内皮细胞骨架的影响研究

目的探讨脑源性微囊泡(BDMVs)对脐静脉内皮细胞骨架的影响。方法体外制备BDMVs,并予透射电镜观察及粒径检测。将PKH26荧光染料标记的BDMVs与脐静脉内皮细胞共培养0.5 h、1 h、2 h后,应用流式细胞术检测不同时间点的脐静脉内皮细胞吞噬BDMVs情况。将体外常规培养的脐静脉内皮细胞分为对照组、BDMVs组(加入终浓度1.5×10^7/mL的BDMVs处理细胞)及尼莫地平组[予2μg尼莫地平(0.2 mg/mL)预处理10 min后加入终浓度1.5×10^7/mL的BDMVs处理细胞],应用激光共聚焦显微镜观察罗丹明标记鬼笔环肽染色后各组脐静脉内皮细胞中纤维型肌动蛋白的荧光强度及应力纤维数目。结果透射电镜下可见体外制备的BDMVs具有完整的膜结构,粒径范围为100~1000 nm。流式细胞术检测显示,吞噬BDMVs的脐静脉内皮细胞比例随培养时间的延长呈时间依赖性升高(0.5 h:22.7%±1.2%;1 h:52.3%±1.3%;2 h:71.6%±1.9%),各时间点间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察显示,与对照组相比,BDMVs组中纤维型肌动蛋白的荧光强度明显升高且应力纤维数目明显增多增粗;而与BDMVs组相比,尼莫地平组中纤维型肌动蛋白的荧光强度明显降低且应力纤维数目明显减少变细。结论脐静脉内皮细胞吞噬BDMVs的作用随时间延长而增强,且吞噬BDMVs后可导致细胞骨架重构,而尼莫地平可部分阻断该作用。     

腹腔镜入路在复发性肝癌手术中的应用

正四川大学华西医院最近做了一些关于复发性肝癌患者使用腹腔镜手术治疗的初步探讨。肝细胞癌,手术切除是最佳治疗方案。肝癌术后患者,5年复发率高达77%～100%。复发的肝癌,理论上可以参照首次治疗的方式,可以再做肝切除、肝移植、射频和经肝动脉栓塞化疗等。相对于射频消融,再次切除对于一些相对危险的位置,以及在明确诊断方面,仍然有一定的优势。目前,四川大学华西医院的开腹肝脏手术最常     

肝脏螺旋CT增强扫描的最佳延时时间

目的 探讨肝脏螺旋CT增强扫描的最佳延时时间。方法 随机选取100例肝脏增强扫描的特例，采用不同的造影剂总量、注射速率和延时时间，观察肝脏的强化程度结果采用3ml／s和4ml／s的注射速率和120ml～l50ml的造影剂总量，肝脏的强化程度最高。注射速率越高，到达强化峰值的时间也越短。结论 肝脏螺旋CT增强扫描的合理的技术方案为采用120ml～150m1的造影剂总量，注射速率3ml／s～4ml／s，动脉期延时20s—26s，门脉期延时70s～80s。     

腹腔镜腹股沟疝修补术1034例临床分析

目的分析总结腹腔镜腹股沟疝修补术的临床经验。方法回顾分析武汉大学中南医院2012年1月至2017年4月1 034例腹股沟疝病人行腔镜腹股沟疝修补术的临床资料。结果所有腹股沟疝病人均顺利行腹腔镜经腹腹膜前修补术(transabdominal preperitoneal,TAPP)或全腹膜外修补术(totally extraperitoneal,TEP)。手术时间为25~180 min(平均40 min),术中出血5~30ml(平均12 ml),住院时间为3~9 d(平均4 d)。随访1~48个月,有5例病人出现腹膜前间隙血肿,腹股沟区血清肿37例,阴囊水肿7例,术后局部疼痛不适16例,术后复发1例,术后感染1例。结论腹腔镜腹股沟疝修补术恢复快,复发率低,并发症少;手术应由经验丰富的疝专科医生完成。     

Preoperative prognostic nutritional index is a significant predictor of survival in patients with localized upper tract urothelial carcinoma after radical nephroureterectomy

Background

Patient's nutritional and immunological status have a potentially significant role in survival outcome in patients with malignant tumors. We investigated the prognostic value of preoperative prognostic nutritional index (PNI) in patients with localized upper tract urothelial carcinoma (UTUC) undergoing radical nephrouretectomy (RNU).