神经元保护蛋白TAT-Bcl-XL的体外高效表达及其功能的初步研究

目的：在原核表达系统中表达对凋亡神经元具有保护作用的重要蛋白Bcl-XL与蛋白质转导序列（PTD）的融合蛋白，并检测重组蛋白对重金属离子所诱导的细胞凋亡的保护作用。方法：通过RT-PCR的方法，用Bcl-XL特异引物从乳腺癌细胞系MCF-7细胞的总RNA中扩增出Bcl-XL基因，构建相应的原核表达载体，体外表达的TAT-Bcl-XL融合蛋白经镍亲和层析介质纯化后，通过免疫荧光方法检测其转导293T细胞的能力；并用流式细胞仪检测融合蛋白抑制细胞凋亡的能力。结果：经RT-PCR从MCF-7细胞总RNA中得到相应的TAT-Bcl-XL基因片段，并将其克隆入pCRT7/CT-TOPO载体中，重组质粒pTBTOPO转化大肠杆菌后，在SDS-PAGE和Western blot的结果中出现了与预期分子量相同的蛋白条带和阳性信号，纯化的TAT-Bcl-XL重组蛋白经免疫荧光检测，主要分布于细胞的细胞质中。流式细胞仪的检测结果显示融合表达蛋白可以有效地抑制Zn2＋离子所诱导的细胞凋亡，使细胞的存活率提高40%。结论：TAT-Bcl-XL融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，初步的功能性检测表明融合蛋白具有抑制细胞凋亡的功能。     

Wnt2信号通路重要成员在胶质瘤中的表达及其意义

近来发现Wnt信号通路对个体发育和肿瘤生成具有重要作用[1-2].为进一步探讨Wnt通路在胶质瘤中是否存在表达异常及其在胶质瘤生成中的作用,我们采用RT-PcR、组织芯片免疫组织化学染色以及蛋白印迹法,对人脑胶质瘤Wnt2通路相关因子的表达变化及其意义进行了分析.     

大鼠肠系膜淋巴结高内皮微静脉与淋巴迷路之间的网状纤维支架的研究

目的 研究大鼠肠系膜淋巴结内高内皮微静脉与淋巴迷路之间淋巴细胞归巢的通路.方法 用镀银染色光镜观察法和冻裂割断扫描电镜观察法观察健康、成熟Wistar大鼠肠系膜淋巴结的基质网状结构.结果 位于高内皮微静脉和淋巴迷路周围有网状纤维支架,在二者相临近部位有密集交织的网状纤维网.结论 淋巴结内高内皮微静脉和淋巴迷路之间密集交织的网状纤维网,为细胞的居留和迁移提供结构支持和适宜的微环境,可能是淋巴细胞归巢的重要通路.     

移植物细胞因子表达与小肠移植排斥反应相关性的实验和临床病例研究

目的结合移植物细胞因子表达的实验和临床病例研究，探索早期诊断小肠移植急性排斥反应的细胞因子相关的敏感指标。方法①两例短肠综合症患者接受活体小肠移植术。定期或病情变化时随时行内镜组织学检查并测定受体大鼠移植物sIL-2R、IL-4、IL-6和IFN-γ表达水平。②BN-LEW大鼠部分小肠移植，A组：SBT（n=20）；B组：SBT＋FK506（2．5mg／kg，n=20），术后第1、4、7、14和30天测定受体大鼠移植物sIL-2R、IL-4、IL-6和IFN-γ水平同时取移植肠黏膜行病理组织学检查。结果首例术后67d发生排斥反应，第2例于术后20d和80d分别发生强烈排斥反应。发生排斥反应相应时相均发生IL-2Rα、IFN-γ表达的显著升高，排斥反应控制后IL-2Rα迅速恢复，但IFN-γ仍在较高水平维持较长时间。A组大鼠术后第1天始即显示IL-2Rα、IFN-γ和IL-6表达的显著升高，于术后7d达到最高，移植后14d仍在高水平。B组仅术后第1天出现IL-2Rα、IFN-γ和IL-6表达的迅速升高，第4天已恢复至基本正常。结论移植物IL-2Rα、IFN-γ表达的升高与小肠移植急性排斥反应密切相关，有望成为早期诊断小肠移植急性排斥反应的敏感指标。     

皮肤扩张术修复头皮合并颅骨缺损

目的探讨头皮合并颅骨缺损的修复方法。方法对2000年至2007年治疗的6例头皮合并颅骨缺损患者，采用皮肤扩张术修复头皮，钛网修补颅骨缺损。结果6例患者中，1例患者出现皮瓣下积液，经抽吸、加压包扎后愈合；其余病例未出现感染、血肿及皮瓣坏死等并发症，外观满意。结论皮肤扩张术和钛网联合应用是修复头皮合并颅骨缺损的较好方法。     

阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用.     

慢性肾功能不全患者外周血调节性T细胞的表达

目的：探讨慢性肾功能不全患者外周血调节性T细胞表达水平及意义。方法：采用流式细胞术测定40例慢性肾功能不全患者外周血CD4’T细胞占淋巴细胞（CD45^＋细胞）的比例及CD4^＋CD127^-Treg、CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg占CD4^＋T细胞的比例。结果：慢性肾功能不全各组患者外周血CD4^＋CD127^-Treg占CD4^＋T细胞的比例显著低于健康对照组，而CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg占CD4^＋T细胞的比例较健康对照组无显著性差异，代偿期患者CD4^＋T占淋巴细胞的比例跟健康对照组相比，没有统计学差异，其余各期均显著高于健康对照组。患者CD4^＋T细胞占淋巴细胞的比例，CD4^＋CD127^-Treg、CD4＋CD25^＋CD127^-Treg占CD4^＋T细胞的比例与血清BUN和Cr值之间没有相关性。结论：慢性肾功能不全患者外周血CD4^＋T细胞数量增高，CD4^＋CD127^＋Treg数量降低，免疫功能异常。     

Wnt2信号通路重要成员在胶质瘤中的表达及其意义

近来发现Wnt信号通路对个体发育和肿瘤生成具有重要作用[1-2].为进一步探讨Wnt通路在胶质瘤中是否存在表达异常及其在胶质瘤生成中的作用,我们采用RT-PcR、组织芯片免疫组织化学染色以及蛋白印迹法,对人脑胶质瘤Wnt2通路相关因子的表达变化及其意义进行了分析.