过表达TrxR1重组HEK293细胞株的构建和鉴定

目的 构建稳定过表达硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）的HEK293细胞株,为TrxR1的功能研究以及靶向TrxR1药物筛选提供细胞模型。方法 通过PCR扩增,连接转化以及Sanger双脱氧测序构建并筛选出TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-PuroTXNRD1,转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞株。后续研究分为3组进行：①TrxR1过表达HEK293细胞：pLVX-Puro-TXNRD1载体稳定转染细胞;②对照HEK293细胞：pLVX-Puro空载病毒载体稳定转染细胞;③正常HEK293细胞;通过RT-qPCR、Western blot实验检测上述3组细胞中TrxR1的mRNA以及蛋白表达情况;通过胰岛素终点法以及TRFS-green探针成像检测上述3种细胞内TrxR1的酶活力;通过CCK8实验检测上述3种细胞对TrxR1特异性抑制剂auranofin的敏感性。结果 构建载体经DNA测序,成功获得插入TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1。与HEK293以及HEK293-NC细胞相比,HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1的mRNA和蛋白高表达,且酶活力也同样显著上升（P<0.005）;而与HEK293以及HEK293-NC细胞相比,auranofin对HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1酶活力以及细胞增殖的抑制效率均显著下降（P<0.005）。结论 通过构建pLVX-Puro-TXNRD1慢病毒载体,成功获得过表达TrxR1酶的HEK293细胞株,该细胞对特异性靶向TrxR1的抑制剂的抗增殖作用具有抵抗,因而可用于靶向TrxR1药物的筛选。     

过表达miR-607通过下调TRPC5表达抑制肝细胞癌的生长和转移

目的 研究miR-607异常表达在肝细胞癌（HCC）中的临床意义及对肝癌细胞生长转移的影响。方法 荧光定量PCR检测45对HCC及癌旁组织中miR-607表达,分析miR-607表达与患者临床病理特征间的相关性。通过转染miR-607 mimics提高HCC细胞（Huh-7和HCCLM3）内miR-607的表达水平。采用CCK-8、流式细胞仪、划痕愈合实验及transwell小室模型分别检测过表达miR-607对HCC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因系统检测miR-607是否与潜在靶点TRPC5的mRNA 3'-非翻译区直接结合。Western blot检测过表达miR-607对HCC细胞内TRPC5、CCND1、MMP2表达及Akt磷酸化的影响。结果 MiR-607在HCC组织及HCC细胞中的表达水平均降低（P<0.05）;miR-607低表达与肿瘤直径>5 cm、血管侵犯及较晚TNM分期（III+IV）密切相关（P<0.05）。过表达miR-607抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡（P<0.05）。双荧光素酶报告基因系统证实 miR-607 与 TRPC5 mRNA 3'-非翻译区直接结合（P<0.05）。过表达 miR-607 抑制HCC细胞内TRPC5、CCND1及MMP2表达并下调Akt的磷酸化水平（P<0.05）。结论 miR-607低表达与肝细胞癌恶性临床特征密切相关,miR-607可能通过下调TRPC5表达进而抑制Akt通路激活来发挥抗HCC生长转移作用。     

按需带教在三甲医院新入职护士教学中的应用

目的　探究按需带教在三甲医院新入职护士教学中的应用。方法　将2017年8月至2018年8月首都医科大学附属北京世纪坛医院新入职的84名护士设为对照组,采用常规带教;将2019年8月至2020年8月新入职的116名护士设为观察组,采用按需带教。比较两组理论与实践操作成绩、综合能力及教学满意度。采用软件SPSS 22.0进行t检验。结果　观察组护士理论[（96.38±2.14）vs.（91.56±3.75）]与实践操作成绩[（95.49±2.23）vs.（90.91±4.02）]均比对照组高;观察组护士准确执行医嘱、应急能力、观察病情能力、操作水平、沟通能力、护士执业形象、与医生配合满意度、与护理人员相处融洽度评分比对照组高（P<0.05）;观察组护士对带教内容、带教方法、带教态度、带教效果满意评分均比对照组高（P<0.05）。结论　在三甲医院新入职护士带教中应用按需带教,可以提升新入职护士理论与实践操作技能,提高其综合能力与教学满意度。     

miR-155靶向调节PIK3R1对类风湿关节炎大鼠模型PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨miR-155靶向调节PIK3R1对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-155 agomir组、miR-155 antagomir组、miR-155阴性对照组,诱导RA模型,分组处理后,观察关节症状,检测关节炎指数及后足趾容积;HE染色观察大鼠关节组织病理形态;使用试剂盒检测大鼠关节组织炎性因子IL-6、IL-17及IL-18水平;免疫印迹检测大鼠关节组织PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达;qRT-PCR实验检测大鼠关节组织miR-155及PIK3R1 mRNA水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-155对PIK3R1的靶向调控作用。结果 与对照组比较,模型组大鼠关节炎症状明显,关节炎指数、后足趾容积、关节组织炎性因子IL-6、IL-17及IL-18水平、关节组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及p-mTOR/mTOR水平、关节组织miR-155水平明显升高（P＜0.05）,PIK3R1 mRNA水平明显降低（P＜0.05）。与模型组、miR-155阴性对照组比较,miR-155 antagomir组大鼠上述指标得到明显改善（P＜0.05）;miR-155 agomir组与miR-155 antagomir组趋势相反（P＜0.05）。结论 miR-155可靶向下调PIK3R1的表达,激活PI3K/Akt/mTOR信号,加重RA大鼠关节炎症损伤,下调miR-155表达,可抑制PI3K/Akt/mTOR信号激活及炎症反应发生发展,改善关节炎症状。     

Understanding Racially Diverse Community Member Views of Obesity Stigma and Bariatric Surgery

Obesity Surgery - The obesity epidemic poses serious challenges to health equity. Despite bariatric surgery being one of the most effective obesity treatments, utilization remains low. In this...     

带阔筋膜游离股前外侧皮瓣修复糖尿病足溃疡伴骨外露北大核心CSCD

目的探讨带阔筋膜游离股前外侧皮瓣(anterolateral thigh flap,ALTF)修复糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcers,DFUs)伴骨外露的疗效。方法2019年1月—2021年1月,收治20例DFUs伴骨外露患者。男17例,女3例;年龄48~76岁,中位年龄57.5岁。糖尿病足Wagner分级3级10例,4级10例。足部溃疡形成时间1~14个月,中位时间3个月。CT血管造影检查示患者均存在双下肢动脉粥样硬化表现;其中6例严重狭窄或闭塞,行经皮血管腔内成形术。入院后一期彻底清创联合封闭式负压引流处理,清创后创面范围为7 cm×6 cm~27 cm×10 cm;二期采用带阔筋膜游离ALTF修复创面及部分缺损肌腱,皮瓣切取范围为8 cm×5 cm~28 cm×11 cm。供区创面直接缝合。记录皮瓣成活情况、创面愈合时间以及并发症发生情况。术后2周及6个月使用激光散斑血流成像系统检测皮瓣及其周围皮肤血流灌注情况。术后6个月以美国矫形足踝协会(AOFAS)评分评价足部功能。结果术后6例出现皮瓣下积液,对症处理后愈合。最终14例皮瓣完全成活;3例皮瓣边缘部分坏死,经换药后愈合;3例皮瓣出现静脉危象,探查后1例皮瓣完全坏死,另2例皮瓣部分成活,经清创换药后植皮修复。皮瓣成活率95.0%,保肢率100%。皮瓣移植术后创面愈合时间14~30 d,平均19.1 d。2例患者愈合后1个月内再发皮瓣外周皮肤溃疡,经换药后愈合。供区切口18例Ⅰ期愈合;2例局部皮肤坏死,经清创缝合后愈合。患者均获随访,随访时间6~30个月,中位时间11个月。皮瓣质地、外观及弹性良好。患者均能独自行走,无行走时疼痛。术后6个月13例门诊随访患者AOFAS评分为(75.9±11.9)分,与术前(44.7±18.4)分比较差异有统计学意义(t=-7.025,P=0.000);患者皮瓣外周正常皮肤血流灌注值由术后2周(38.1±7.8)PU升高至(42.7±10.3)PU,差异有统计学意义(t=-4.680,P=0.001)。结论带阔筋膜ALTF血供丰富、成活率高,可用于修复DFUs伴骨外露创面。皮瓣愈合后可促进患足血运重建,降低溃疡复发风险,避免截肢。     

同一体位下斜外侧腰椎椎间融合术联合经皮椎弓根螺钉内固定治疗腰椎结核

【摘要】 目的：探讨同一体位下斜外侧腰椎椎间融合术（oblique lumbar interbody fusion,OLIF）联合经皮椎弓根螺钉内固定治疗腰椎结核的可行性,并评估其临床疗效。方法：回顾性分析2018年9月~2019年12月我科采用OLIF联合经皮椎弓根螺钉内固定治疗的35例腰椎结核患者,其中男16例,女19例;年龄33~68岁（51.1±12.8岁）;术前术后均配合系统抗结核治疗。记录所有患者术前术后的C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate,ESR）、手术时间、术中出血量、术后相关并发症、植骨融合情况,比较手术前后疼痛视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS）、美国脊柱损伤协会（American Spinal Injury Association,ASIA）神经功能分级、Oswestry功能障碍指数（Oswestry disability index,ODI）、病变节段后凸Cobb角、腰椎前凸角。结果：所有患者均顺利完成手术,手术时间125~280min（168.8±51.4min）;术中出血量260~1500ml（347.5±121.7ml）。35例患者均获得随访,随访时间为24~48个月（37.8±8.9个月）;术后不同时间点（术后1、3、6个月及末次随访）ESR、CRP、VAS评分及ODI均较术前显著降低（P<0.05）,术后不同时间点之间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）;术后不同时间点Cobb角及腰椎前凸角较术前显著降低（P<0.05）,但术后不同时间点间两两比较无统计学差异（P＞0.05）。末次随访时13例神经损伤患者ASIA分级均较术前有不同程度的改善,所有患者均获骨性融合。2例患者于引流管口持续渗液合并窦道形成,予以换药、调整敏感抗结核药物及营养支持分别于术后3个月、术后5个月切口愈合;1例患者出现肺部感染合并胸腔积液,3例患者出现不同程度的药物性肝功能损伤,经药物保守治疗后好转。结论：同一体位下OLIF联合经皮椎弓根螺钉内固定治疗腰椎结核安全、可行,病灶清除彻底,骨融合率高,并具有创伤小、手术时间短、术后恢复快的优点。     

胚胎移植术中胚胎滞留的发生及其对妊娠结局的影响

目的了解胚胎移植术中胚胎滞留的发生率并探讨其对妊娠结局的影响。方法回顾性分析2017年1月至2020年12月于我院生殖中心行IVF-ET助孕的1834个周期的临床资料,根据胚胎移植术中是否发生胚胎滞留分为两组,发生胚胎滞留的为胚胎滞留组(n=65),未发生胚胎滞留的为对照组(n=1769),比较两组患者的一般资料和妊娠结局;同时,根据移植管不同污染因素分为4个亚组,即血液污染组、粘液污染组、渣污染组和未见异常组,比较各亚组的妊娠结局。结果两组患者一般资料比较无显著差异(P>0.05);两组间临床妊娠率、种植率、异位妊娠率、流产率和活产率比较均无显著差异(P>0.05);胚胎滞留组移植管被血液、粘液污染的发生率(分别为24.62%、16.92%)均显著高于对照组(分别为14.09%、7.70%)(P<0.05),而未见异常的发生率显著低于对照组(50.77%vs.71.48%,P<0.05)。在发生胚胎滞留的情况下,移植管血液污染亚组的临床妊娠率显著低于粘液污染亚组和移植管未见异常组(12.5%vs.63.64%、54.55%,P<0.05);在未发生胚胎滞留的情况下,移植管血液污染亚组的临床妊娠率显著低于粘液污染亚组(44.58%vs.55.88%,P<0.05)。结论本研究提示胚胎移植中胚胎滞留未显著影响妊娠结局,但与移植管粘液污染相比,血液污染可能对妊娠结局带来更多的负面影响。     

自制腹腔镜胆道冲洗器在腹腔镜胆总管取石术中的应用：双中心经验总结

背景与目的 腹腔镜胆总管探查取石术（LCBDE）是治疗胆总管结石的主要治疗方式,但在LCBDE过程中,由于术中缺少窦道支撑,经典的胆道镜下网篮取石相对较为困难,对术者的操作技术要求高,反复的胆道镜取石也容易造成胆道镜损坏或胆管壁损伤。为了更好地提高取石效率,降低手术难度,笔者对胆道镜取石术进行改良,即LCBDE术中采用自制腹腔镜胆道冲洗器配合胆道镜取石。本研究总结两个中心应用该方法的临床效果。方法 回顾2017年1月—2021年1月福建省立医院和福建省浦城县医院收治的313例LCBDE术中应用自制腹腔镜胆道冲洗器治疗的胆总管结石患者的临床资料,分析患者围手术期情况及近期预后。结果 313例患者中,男132例,女181例;平均年龄（56.3±13.2）岁;173例患者为胆总管单发结石,140例患者为胆总管多发结石（结石最多者为10枚）;中位结石直径为0.5（0.2~3.1） cm,中位胆总管直径为1.2（0.6~3.3）cm。手术均顺利完成,无中转开腹。其中281例（89.8%）患者使用自制腹腔镜胆道冲洗器取净结石,32例（10.2%）患者术中联合网篮取石。307例（98.1%）患者一期取净结石,6例（1.9%）患者残留结石;157例（50.2%）术后一期缝合胆总管,156例（49.8%）术后留置T管引流。平均手术时间（109.3±29.4）min,平均术中出血量（42.5±8.4）mL,平均术后住院时间（7.6±3.2）d。术后12例出现胆汁漏,12例出现腹腔感染,9例出现肺部感染,7例出现切口感染,1例出现术后出血,均经保守治疗后痊愈。6例无法一期取净结石患者均于术后1.5个月行经T管窦道胆道镜取净结石。术后随访6~12个月,无胆管结石复发、胆道狭窄等其他并发症。结论 LCBDE术中应用自制腹腔镜胆道冲洗器安全可靠,取石效率高,故推荐使用。     

沙棘籽油对雌雄亚急性衰老小鼠氧化还原物质影响的参数分析

目的：定量描述沙棘籽油对雌雄衰老小鼠脑组织中氧化还原物质的影响。 方法：实验于2004-04／11在南京大学药业股份有限公司动物房完成，选择昆明小鼠J28只，雌雄各半。将64只雄性小鼠按随机数字表法分为8组，分别是沙棘籽油2mL／kg，4mL／kg．6mL／kg，8mL／kg，10mL／kg，14mL／kg组、模型组和正常对照组，每组8只。籽油组分别以籽油：糊精为1：9，2：8，3．7，4：6，5：5．7：3配比灌胃．正常对照组灌以蒸馏水。模型组灌以糊精．8个组灌胃剂量均为5mL／kg．每两天灌1次。除正常对照组外均用D-半乳糖进行皮下注射，1次／d，建立亚急性衰老模型。雌性小鼠64只．方法同上。灌胃45d后．分别检测雌雄小鼠脑组织中的氧化性物质丙二醛和还原性物质谷胱甘肽的含量；并建立量效函数模型。 结果：128只小鼠全部进入结果分析，无脱失。①雌雄模型组小鼠脑组织的谷胱甘肽含量均显著低于正常对照组（P〈0．05），6个剂量组雌雄小鼠的谷胱甘肽含量均高于模型组．沙棘籽油8mL／kg，10mL／kg，14mL／kg组与模型组相比差异具有显著性意义（P〈0．05）。雌雄模型组小鼠脑组织的丙二醛含量均显著高于正常对照组（P〈0．05），除雄性小鼠2mL／kg组外，其他剂量组雌雄小鼠的脑组织丙二醛含量均低于模型组，但沙棘籽油8mL／kg，10mL／kg，14mL／kg组与模型组相比差异具有显著性意义（P〈0．05）。②以函数y=A2＋（A1-A2）／（1＋（x／X0）^Ap）拟合量效函数发现存在最佳剂量，雌性小鼠对药效敏感性低于雄性。 结论：沙棘籽油能明显拮抗D-半乳糖的氧化损伤，在实验设置的剂量范围内较高剂量组的效果更为显著，且对雄性小鼠的药效优于雌性。