锌指蛋白基因抑制氧损伤诱导的内皮细胞E-选择素的表达

目的：探讨外源性锌指蛋白基因A20对氧损伤诱导的内皮细胞E-选择素表达的影响。方法：DOTAP脂质体介导peDNA3．1EHA20质粒转染人脐静脉内皮细胞,经G418筛选,免疫荧光检测A20基因的表达,原位杂交、免疫组化分别检测过氧化氢诱导的内皮细胞E-选择素表达。结果：A20基因在经G418筛选后的内皮细胞中得到高效表达,过氧化氢能诱导人内皮细胞E-选择素高表达,而A20基因能抑制80％以上过氧化氢诱导的内皮细胞E-选择素表达,两者间相差显著。结论：A20基因能够显著抑制过氧化氢诱导的内皮细胞活化,有助于氧损伤的治疗。     

乳腺癌中S100A7与AKT的表达及意义

目的探讨乳腺癌中S100A7和AKT在乳腺癌中的表达及其相关性。方法采用免疫组化PV非生物素两步法检测226例乳腺癌中S100A7与AKT的表达及与ER、PR、Her-2表达的关系。结果 S100A7蛋白在乳腺导管原位癌中阳性率增高(52.50%),AKT在乳腺浸润性导管癌中阳性率高(50.00%);S100A7和AKT在伴淋巴结转移的病例中阳性率高(P=0.0062,P=0.044 8);且Ⅲ期乳腺癌阳性率高于Ⅰ和Ⅱ期(P=0.025 8,P=0.040 3)。AKT表达和肿瘤大小相关,差异有显著性(P=0.031 0);S100A7和AKT蛋白在乳腺癌中的表达与ER、PR呈负相关,与Her-2呈正相关,两者之间呈正相关。结论探讨S100A7与AKT蛋白在乳腺癌中的表达具有重要意义,两者有可能成为乳腺癌治疗的新的靶点。     

含氮二膦酸盐/IL-2诱导肿瘤患者外周血γδT细胞增殖的作用

目的探讨药物（含氮二膦酸盐联合IL-2，N-BP／IL-2）诱导实体肿瘤患者外周血γδT细胞增殖作用。方法采用流式细胞仪测定103例肿瘤患者和43例健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和相对值，测定患者外周血经药物体外刺激后御细胞增殖指数和用药前后患者外周血总T细胞、γδT细胞绝对值和相对值。结果肿瘤患者和健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1306细胞/μl和1522细胞/μlP=0．003），64细胞/μl和162细胞/μl（P〈0．001），5％和11％（P〈0．001）。24例经药物体外扩增试验阳性的肿瘤患者治疗前后体内外周血总T细胞绝对值、γδT细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1283细胞/μl和1552细胞/μl（P=0．001），54细胞/μl和107细胞/μl（P〈0．001），6％和8％（P=0．008）。全部肿瘤患者中外周血γδT细胞对药物体外诱导增殖反应阳性患者的百分率为68．9％。结论肿瘤患者外周血γδT细胞计数显著低于健康人。不同肿瘤患者外周血γδT细胞对药物刺激增殖的反应性不同。N-PB／IL-2在体内有显著增加御细胞数量的药理作用。体外增殖试验可作为N-PB／IL-2治疗患者的参考。     

PI3K/Akt与染料木黄酮增敏阿霉素体外化疗人乳腺癌 MDA-MB-453 细胞的关系研究

目的 观察染料木黄酮(GEN)对HER2/neu高表达人乳腺癌MDA-MB-453细胞PI3K/Akt信号途径的抑制作用,探讨其在GEN增敏阿霉素(DOX)体外化疗乳腺癌MDA-MB-453细胞中的作用.方法 GEN、PI3K特异性抑制剂渥曼青霉素(WT)和DOX单独或联合处理体外培养的MDA-MB-453细胞,免疫细胞化学法检测HER-2/neu蛋白表达,免疫印迹法检测总Akt和磷酸化Akt蛋白(p-Akt)表达.结果 GEN对MDA-MB-453细胞HER2/neu和总Akt蛋白没有明显影响,但可明显降低p-Akt蛋白水平;同时WT也能明显降低p-Akt蛋白,并显著增强DOX抑制MDA-MB-453细胞生长的作用.结论 GEN增敏DOX体外化疗乳腺癌MDA-MB-453细胞株可能与其抑制PI3K/Akt信号途径有关.     

细胞内外膜跨膜电位频率响应模型及滤波器特性的研究

提出球形单细胞内外膜跨膜电位频率响应模型和仿真计算方法。通过对频率响应的仿真分析，发现内外膜跨膜电位分别表现出一阶带通和低通滤波器特性，并在内膜频率响应中心频率到上限截止频率的范围内，内膜跨膜电位大于外膜同时能保持在较高水平，这将有利于诱导细胞内电处理效应。计算结果与动物实验吻合得很好，为纳秒脉冲电场治疗肿瘤的窗口参数合理选择提供了理论依据。     

心肌肌浆网Ca2+-ATP酶基因转导改善慢性心力衰竭犬心功能的研究

目的： 探讨以重组腺相关病毒(rAAV)为载体的心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭犬心功能的影响。方法: 选取成年比格犬17只，随机分为对照组4只和心力衰竭组11只。快速右心室起搏建立慢性心力衰竭犬模型并随机分为心力衰竭组4只、心力衰竭＋绿色荧光蛋白（EGFP）组4只、心力衰竭＋SERCA2a组5只(其中1只在开胸后死亡)。接受基因导入的心力衰竭犬行开胸术，分别向心肌内注射携带EGFP和SERCA2a基因的rAAV载体。于基因转导30d时停止起搏后进行超声心动图和血流动力学检查。结果: 基因转导30 d时，心力衰竭＋SERCA2a 组犬的症状及超声心动图指标与心力衰竭＋EGFP组相比有显著好转（P<0.05）；与对照组相比无显著差别。血流动力学监测发现，转导SERCA2a的犬LVSP、+dp/dtmax和-dp/dtmax明显升高，平均值较EGFP组分别增加54.12％［(214.72±31.74)mmHg vs (139.32±36.79)mmHg］、146.81％［(6 779.43±217.58)mmHg/s vs (2 746.85±931.23)mmHg/s］和71.52％［(-4 341.42±322.02)mmHg/s vs (-2 531.14±616.15 mmHg/s)］，LVEDP则降低了63.43％［(21.86±6.95)mmHg vs (59.78±6.92)mmHg］，所有参数与对照组相比无显著差异。心力衰竭＋EGFP组犬心肌冰冻切片在激光共聚焦显微镜下可见弥漫绿色荧光。结论: 以rAAV为载体介导SERCA2a基因转导能够改善慢性心力衰竭犬心脏的收缩和舒张功能，是1种有前景的治疗慢性心力衰竭的方法。     

自然流产模型小鼠蜕膜细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的研究

目的：通过比较正常妊娠模型小鼠及自然流产模型小鼠蜕膜细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达，从细胞及分子水平探讨自然流产的发病机制。方法：建立正常妊娠模型CBAXBALB／c和自然流产模型CBAXDBA／2。用免疫组化SABC法测定两组模型孕13天蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达，并通过MIAS-2000医用彩色病理图像免疫组化测量系统对其表达进行半定量分析，其结果用平均灰度值表示；同时应用DNA缺口原位末端标记技术（TUNEL）测定两组模型孕13天蜕膜细胞凋亡情况。结果：与正常妊娠模型相比，自然流产模型蜕膜细胞Bcl-2蛋白的表达降低（P〈0．01）；Bax蛋白的表达明显升高（P〈0．01）。蜕膜细胞凋亡指数，自然流产模型明显高于正常妊娠模型（P〈0．01）。结论：早孕期蜕膜组织细胞凋亡异常是自然流产的机制之一，Bcl-2／Bax途径可能是诱导早孕期蜕膜细胞凋亡的重要因素。     

体外分化胚胎干细胞为造血干细胞重建造血功能的研究

目的：探讨体外定向分化胚胎干细胞（ESCs）为造血干细胞（HSCs）对体内造血功能的重建作用。方法：将小鼠E14.1胚胎干细胞采用“三步诱导法”在体外分化发育为HSCs，造血克隆形成(CFU)实验观察其体外造血集落形成情况，免疫磁珠分选纯化HSCs移植给经亚致死剂量γ射线照射的雌性SCID小鼠，观察其植入及小鼠造血功能恢复情况。结果: 经过分阶段诱导，多种造血刺激因子联合应用能有效促进ESCs定向分化发育为HSCs,流式细胞仪检测HSCs特异性表面标志物CD34+/Sca-1+表达最高为（58.64±4.20）%，CFU培养能形成较多的红系、粒系/巨噬细胞系及混合细胞集落, Wright-Giemsa 染色显示为原始的造血细胞。此阶段的HSCs经分选纯化后移植给经γ射线照射后的小鼠，移植组小鼠+10 d造血功能开始恢复，观察40 d后除血小板恢复较慢外，白细胞、红细胞、血红蛋白等指标已接近正常，植入率为71.4%，存活率为43.0%，染色体检测证实已由受体鼠的XX转为供体鼠的XY。结论: 采用分阶段诱导的方法，可在体外定向诱导小鼠ESCs分化发育为HSCs，此来源的HSCs可以有效重建体内造血功能。     

北京市学龄儿童腰围、腰围身高比分类标准对心血管代谢危险因素的筛查效度

目的在心血管代谢危险因素单一患病率和聚集水平评估的基础上,验证和提出适合北京市学龄儿童人群腹型肥胖筛查的腰围和腰围身高比分类标准。方法依据北京市儿童青少年代谢综合征研究的现况调查结果,笔者前期研究提出腰围的性别年龄别P80及腰围身高比0.46可作为初步筛查腹型肥胖的界值,但提出上述标准时,心血管危险因素相关指标中血脂、血糖水平是基于指末梢血的检测结果,因此有待于依据准确性更高的静脉血生化指标的检测结果进行验证。本研究从该项目调查人群中非随机选择3525名6~18岁学龄儿童为研究对象,对其进行血压测量和静脉血生化指标检测,对儿童肥胖与脂肪肝研究中1454名7~18岁学龄儿童,除上述检测项目外,行B超检查脂肪肝及肝功能生化检测,筛出非乙醇性脂肪肝儿童,在前期儿童腹型肥胖初筛界值的基础上,提出腰围和腰围身高比的备选分类标准,通过比较各备选标准检出心血管危险因素及其聚集的效率,对腰围、腰围身高比判定学龄儿童腹型肥胖的适宜界值做进一步的研究。结果肥胖、高血压、血脂紊乱及其聚集的检出率均随腰围及腰围身高比的升高逐渐增加。通过比较不同腰围和腰围身高比备选界值检出上述危险因素及其聚集的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值,...