食管鳞癌组织中p16基因缺失及甲基化检测

目的:探讨食管癌组织中p16基因表达缺失的机制.方法:采用PCR、DHPLC、MSP及免疫组化的方法,检测45例食管鳞癌组织及其相应的间变组织和正常食管上皮组织中p16基因的缺失、突变、甲基化状态及蛋白表达情况.结果:正常食管上皮组织中p16蛋白均为正常表达(45/45,100%),间变和癌组织中异常表达率分别为84.4%(38/45)和91.1%(41/45),3者间异常表达率差异有统计学意义(x2=20.03,P＜0.001).p16蛋白表达异常的41例癌组织中,纯合型甲基化发生率为80.48%(33/41),杂合缺失发生率58.53%(24/41),不缺失发生率41.46%(17/41),均高于p16蛋白表达正常的癌组织.结论:该地区食管癌组织中p16基因主要通过纯合型甲基化失活.     

食管鳞癌多阶段癌变中14-3-3σ和P53表达特征及相关性分析

目的:探讨14-3-3σ和P53蛋白表达在食管鳞癌和癌旁正常黏膜上皮、各级癌前病变中的变化特征及相关性.方法:采用免疫组织化学方法检测14-3-3σ和P53蛋白在60例不同分化程度食管鳞癌和癌旁正常食管黏膜上皮、各级癌前病变中的表达变化.结果:癌旁正常食管黏膜上皮中均可检测到不同程度的14-3-3σ蛋白表达(表达量8.22),随着癌前病变进展,14-3-3σ的表达率和表达量逐渐下降;低分化鳞癌中14-3-3σ的表达量最低(表达量0.45),完全失表达率为64%(7/11).P53蛋白在鳞癌中表达率最高67%(27/40),表达量为4.86,而只有25%(6/24)癌旁正常上皮表达P53蛋白(表达量0.42).14-3-3σ和P53蛋白的相关性分析表明二者呈显著负相关(P＜0.05).结论:P53蛋白可能通过负调控14-3-3σ基因的表达参与食管癌变多阶段演进过程,14-3-3σ和P53可能成为食管癌早期诊断及高危人群筛查的分子指标,同时也可能成为食管癌生物预防和疗效评价的新靶点.     

河南食管癌高发区食管和贲门癌组织中粘蛋白1的表达

目的 :探讨粘蛋白 1(MUC1)表达与河南食管癌高发区食管鳞状细胞癌 (SCC)、贲门腺癌 (GCA)细胞分化程度与淋巴结转移间的关系。方法 :免疫组化ABC法检测MUC1在 5 0例SCC和 2 1例GCA及配对淋巴结组织中的表达 ,分别以活检正常的 10例食管粘膜组织及 8例贲门粘膜组织为对照。结果 :MUC1免疫阳性染色呈棕黄色或深棕黄色。 4 8例SCC(48/5 0 )和 2 1例GCA(2 1/2 1)原发病灶中均有不同程度的MUC1表达 ,6例正常食管粘膜 (6 /10 )和 4例正常贲门粘膜 (4/8)中观察到MUC1弱免疫阳性反应。正常细胞中 ,MUC1主要表达于细胞膜近管腔或腺腔侧 ,但在癌细胞中则胞膜和胞浆中均有表达。SCC与正常食管粘膜、GCA与正常贲门粘膜MUC1免疫阳性反应强度间差异有统计学意义 (分别为P =0 .0 0 5 0 6 ,P =0 .0 0 2 95 ) ,SCC和GCA原发病灶与转移淋巴结间MUC1的一致性表达差异均有统计学意义 (分别为U =4 .4 15 ,P <0 .0 0 0 1,U =2 .2 74 ,P <0 .0 5 ) ,一致性MUC1变化的发生率在SCC为 6 0 % (30 /5 0 ) ,GCA为 85 .71% (18/2 1) ;其中一致性阳性的发生率在SCC为 5 6 % ,GCA为10 0 %。SCC组织分化的恶性程度与MUC1免疫反应的强度呈负相关 (r =- 0 .35 6 6 ,P <0 .0 5 ) ,GCA出现类似趋势 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。MUC1免疫反     

食管鳞癌及癌前病变组织中环氧合酶-2及血管内皮生长因子的表达

目的 探讨河南省食管癌高发区食管鳞癌及癌前各级病变中环氧合酶-2和血管内皮生长因子（VEGF）的表达及意义。方法 应用免疫组织化学法（ABC）检测环氧合酶-2及VEGF在癌旁正常食管黏膜组织34例、基底细胞过度增生36例、轻中度不典型增生15例、重度不典型增生18例及食管鳞癌32例中的表达。结果 食管上皮重度不典型增生、鳞状细胞癌组环氧合酶-2、VEGF阳性表达率明显高于其他组（P〈0．05），且二者表达有相关性（P〈0．01）。结论 环氧合酶-2和VEGF在食管上皮细胞重度不典型增生中及食管鳞癌中表达异常增高，提示二者的表达增高与食管癌的多阶段演变过程相关，环氧舍酶-2和VGEF可能成为食管癌高危人群筛查和食管癌早期诊断的分子指标之一，并为食管癌的治疗提供了新靶点。     

热休克蛋白-肽复合物与肿瘤免疫

<正>热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一类在生物进化过程中高度保守,广泛表达于所有生命机体组织细胞并具有管家功能的蛋白质。根据分子量的差异,HSP可分为10个家族,包括HSP110/grp170、gp96/grp94、HSP90、HSP70/grp78、HSP65、HSP25/27等,每个家族有1~5个成员[1]。在正常生理状态下,HSP的结构性表达约占细胞蛋     

转染NF-κB抑制物基因对食管癌细胞系生物活性的影响

目的:将NF-κB抑制物基因pcDNA3/mIκBαS32A/S36A转染食管癌细胞株EC1,观察对NF-κB因子活性及对细胞生长的影响。方法:采用脂质体转染法将pcDNA3/mIκBαS32A/S36A质粒转染入EC1细胞进行瞬时表达,检测其对EC1细胞的影响,用Westernblot和RT-PCR方法检测转染前后NF-κBp65、NF-κBp50蛋白和mRNA表达水平的变化。结果:与转染pcDNA3.0质粒和未转染质粒组比较,转染pcDNA3.0/mIκBαS32A/S36A质粒EC1细胞的生长速度受到明显抑制,P<0.05。转染pcDNA3/mIκBαS32A/S36A质粒的EC1细胞,在0、24、48、96小时未见NF-κBp65、NF-κBp50蛋白和mRNA表达,而转染pcDNA3.0质粒EC1细胞可见核内NF-κBp65和NF-κBp50蛋白表达。结论:转染NF-κB抑制物基因IκBα后可抑制EC1细胞的生长,并抑制细胞NF-κBp65、NF-κBp50基因的表达,该结果提示调节NF-κB的表达可能是食管癌基因治疗的靶点。     

凝胶电泳蛋白质组学蛋白样品纯化方法比较

目的 探讨超滤法和7种不同沉淀方法纯化含PBS的蛋白样品对蛋白凝胶电泳的影响。方法 应用超滤法和7种沉淀方法［包括硫酸铵、氯仿甲醇、酸化丙酮甲醇、乙醇、丙酮、三氯乙酸（TCA）、TCA/丙酮］纯化PBS稀释的混合食管癌组织蛋白（10例）,二喹啉甲酸（BCA）、Bradford及2D法测定蛋白浓度并进行一维和二维聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳,Image Master软件分析二维电泳图谱蛋白点。 结果 Bradford法和2D法适用于二维电泳水化液溶解的蛋白样品浓度测定。超滤法和硫酸铵沉淀法的蛋白回收率分别为40%和4%,其他方法的蛋白回收率约为22%。丙酮沉淀法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点边界清晰、分辨率高且数目最多;其次是乙醇沉淀和氯仿甲醇沉淀法;再其次是超滤法,该法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点表现不同程度的弥散;酸化丙酮甲醇沉淀蛋白的二维电泳图谱中蛋白点丢失最多。 结论 丙酮沉淀法适用于原始浓度高、体积小的蛋白样品除盐及浓缩,超滤法是原始体积较大、浓度较低蛋白样品浓缩纯化的首选方法。