核苷和核苷酸类药物治疗慢性乙型肝炎的耐药及其管理

在核苷和核苷酸类药物(NAs)治疗慢性乙型肝炎过程中,耐药是一个极为重要的问题。与未发生耐药的患者比较,耐药不仅可导致疾病进一步进展,并可增加发生肝功能失代偿和肝细胞癌(HCC)的风险;还会加大后续治疗的难度,增加长期治疗的医疗成本。因此,耐药的预防和管理是提高疗效、缩短疗     

医学微生物学进展课程教学模式的改革探索

研究生教育已经成为近年来研究型大学教学工作的重点,而课程建设是提高研究生教育质量、培养创新型人才的重要环节.为了培养创新型人才,北京大学医学部基础医学院微生物学教研室对研究生课程"医学微生物学进展"的教学模式进行了改革,教学目的由"重结论"转为"重过程";教学方式由"灌输式"转变为"互动式";教学由以教师为中心转为以学生为中心.实践证明,新的教学模式深受选课学生及授课教师的认可与欢迎.     

慢性乙型肝炎患者血清HBV RNA检测的临床意义

在强效核苷及核苷酸类药物(NAs)抗病毒治疗时代,绝大部分慢性乙型肝炎(CHB)患者血清HBV DNA水平低于检测下限,但血清HBV DNA消失仅提示病毒的逆转录过程被有效抑制,并不能真实反映肝细胞内共价闭合环状DNA(ccc DNA)的转录活性状态。另一方面,部分经过长期治疗的患者肝组织ccc DNA接近耗竭或残余静默,但因HBV DNA片段的整合,血清HBs Ag仍持续阳性。如何真实地评判肝细胞内ccc DNA的存在和转录活性,仍是一个亟待解决的问题。血清HBV RNA为来自肝组织内ccc DNA转录体,因未能有效地转换成rc DNA,转而以HBV RNA病毒样颗粒的方式释放进入血液循环。因此在NAs治疗下,血清HBV RNA能够定性反映肝组织内的ccc DNA是否有转录活性。目前多数专家认为,在现有治疗手段下很难达到CHB的"完全治愈"。对此,笔者提出了从"部分治愈"、"准临床治愈"、再到"临床治愈"(或"功能性治愈")的阶梯性提升模式,建议以ccc DNA消失或静默为基础、以HBV RNA持续阴性为依据的"部分治愈"预测NAs停药后复发或病毒学反弹风险,并在此基础上的以血清HBs Ag低水平作为"准临床治愈"标准。需要特别强调的是,血清HBV RNA检测的临床意义需要大规模的临床研究进行验证,更需要在未来可能的真实世界的应用中不断完善。     

用RNA/DNA嵌合寡核苷酸进行单碱基突变修正

以含有单个错配碱基的ＲＮＡ／ＤＮＡ嵌合寡核苷酸为载体,通过含ＲＮＡ残基链与靶ＤＮＡ序列的同源配对反应,启动靶细胞内源的错配修复机制,可在特定位点引入或修正单个核苷酸突变,并使修复后的基因表达仍处于原基因调控元件之下。该方法克服了同源重组打靶在哺乳动物细胞的低效问题,为单核苷酸突变所致遗传病或肿瘤的基因治疗提供了新的途径。     

柯萨奇病毒B组3型基因疫苗预防实验性心肌炎的研究

目的：以构建的柯萨奇病毒B组3型（CV3）VP1基因的真核表达系统pCEP4-CVB3VP1作为基因疫苗,评价其对CVB3实验性心肌炎的预防作用。方法：大量制备pCEP4-CVB3VP1,提纯后将其接种BALB／C小鼠,取血清进行ELISA,病毒中和试验和病毒攻击保护实验,结果：ELISA证明pCEP4-CVB3VP1表达产物可刺激机体产生抗CVB3的的特异性IgM,病毒中和试验证明其可诱导机体产生中和抗体。中和CVB3毒力,病毒攻击保护实验证明其可保护接种小鼠抵抗CVB3攻击,结论：pCEP4-CVB3VP1能诱导机产生免疫应答,可作为基因疫苗预防CVB3心肌炎。     

应警惕免疫检查点抑制剂潜在的促进非酒精性脂肪性肝病相关肝细胞癌进展的风险

原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)严重危害人类健康,根据世界卫生组织公布数据显示,2020年全球PLC新发及死亡病例分别为91 万例及83 万例[1].PLC主要包括肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及肝内胆管细胞癌,其中HCC约占PLC患者的80％～85％...     

新时代背景下医学微生物学课程思政的建设与应用探索

近年来,高等教育已经步入了课程思政全面建设的新时期,积极有效地落实课程思政已经成为高校教学的重点。医学微生物学是医学各专业学生均需要学习的专业必修课。目前,各种新发传染病不断出现,给社会带来巨大威胁。在同传染病做斗争的过程中,一线医务工作者和科研人员表现出了极大的勇气和担当,为我国各种传染病的有效控制做出了突出贡献,因此在医学微生物学教学过程中进行课程思政具有极强的必要性。但目前对医学微生物学课程思政的探索尚非常有限,为此,本研究对医学微生物学课程思政进行了建设,设计了多种可执行的模式并进行了探索,收到了良好的效果。本研究可以为医学微生物学的课程思政提供参考。     

衣壳组装调节剂联合核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎临床试验中亟待解决的科学问题

慢性HBV感染是病毒性肝炎、肝硬化和原发性肝癌的主要病因。目前临床应用的核苷(酸)类似物(NUC)和聚乙二醇干扰素α(PEG-IFNα)均无法直接靶向共价闭合环状DNA,难以实现慢性乙型肝炎患者(CHB)的临床治愈。因此,33亟需研发靶向HBV复制周期各阶段的直接抗病毒药物。衣壳组装调节剂(CpAM)通过不同机制靶向病毒衣壳的组装,进而发挥直接抗病毒作用,其与NUC联用本应发挥良好的协同抗病毒作用,但现有临床试验结果均表明,接受有限疗程CpAM与NUC联合抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者均发生停药后病毒学反弹。本文根据两类药物的作用机制,对上述临床试验结果进行了合理解释,并提出在未来以安全停药为观察终点的临床试验中,可能需要更长时间的CpAM与NUC联合抗病毒治疗,以耗竭或沉默共价闭合环状DNA池,从而提高CHB患者安全停药的可能性。此外,多靶点的联合抗病毒治疗策略仍需进一步研究。     

食管鳞癌分泌素-3A1基因启动子甲基化异常

[目的]研究具有抗癌活性的细胞因子分泌素-3A1基因启动子超甲基化所至该基因表达抑制在我国食管鳞癌发生中的作用。[方法] 用RT-PCR 方法检测分泌素-3A1基因在12个食管鳞癌细胞系的表达,并用甲基化特异PCR技术（methylation specific PCR, MSP）检测上述细胞系及37例来自我国河南的原发性食管鳞癌标本分泌素-3A1基因启动子甲基化状态,通过5-aza-dc处理使培养细胞去甲基化,RT-PCR技术检测处理后该基因在Kyse30的重新表达。[结果] 该基因仅在Kyse410、Kyes520和TE8等3个细胞系有表达,5-aza-dc处理可使Kyse30重新表达分泌素-3A1。此外,在18/37（48%）例原发性食管鳞癌细胞有分泌素-3A1基因启动子区域的超甲基化。[结论] 启动子超甲基化造成分泌素-3A1基因在上述食管鳞癌细胞系表达抑制,原发性食管鳞癌细胞分泌素-3A1基因启动子超甲基化提示该基因表达抑制可能与食管鳞癌发生有关。     

食管鳞癌RASSF1A基因启动子区甲基化研究

目的 研究肿瘤抑制基因RASSF1A启动子区甲基化所致该基因表达抑制在我国食管鳞癌发生中的作用及可能机制. 方法 用甲基化特异PCR技术(MSP)检测43例原发性食管鳞癌标本及6例对照食管上皮组织标本、食管鳞癌细胞系TE11和TE12中RASSF1A启动子甲基化状态;逆转录(RT)-PCR法检测5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理前后食管鳞癌细胞系中RASSF1A mRNA表达水平;Western blot方法检测食管鳞癌细胞系中细胞微管蛋白的表达. 结果 20.9%(9/43)原发性食管鳞癌标本有RASSF1A启动子超甲基化,正常食管上皮组织未发现该基因超甲基化改变.RASSF1A基因甲基化与食管癌患者的性别和TNM分期无关(P＞0.05),但在不同年龄组间的差异有统计学意义(P＜0.05).TE12细胞RASSF1A启动子发生甲基化,RT-PCR检测不到RASSF1A mRNA.TE11细胞系启动子未发生甲基化,RT-PCR检测其有RASSF1A mRNA表达.5-Aza-CdR处理可使TE12重新表达RASSF1A mRNA.TE12细胞的β-微管蛋白水平比TE11细胞低87.8%. 结论 原发性食管鳞癌存在RASSF1A启动子超甲基化,该基因甲基化与年龄相关.RASSF1A在食管鳞癌细胞系表达抑制与其甲基化状态有关.RASSF1A表达缺失可能导致β-微管蛋白减少.