AFP和AFP-L3％联合检测在肝细胞癌诊断中的应用价值

目的探究AFP联合AFP-L3%检测在肝细胞癌诊断中的应用价值。方法回顾性收集2010年1月-2017年12月在解放军总医院第五医学中心就诊的1208例慢性肝炎患者、1967例肝硬化患者和1569例肝细胞癌患者的血清学指标及临床资料。分析各组患者血清AFP及AFP-L3%的分布情况,比较AFP、AFP-L3%单独及两者联合诊断肝癌的灵敏度、特异度及受试者工作特征曲线下面积(AUC),并分析AFP和AFP-L3、AFP-L3%的相关性。计量资料多组间比较采用单因素方差分析或KruskalWallis H检验,计数资料组间比较采用χ~2检验。计量资料的相关性分析采用Spearman秩相关。AUC之间的比较采用Delong检验。采用logistic回归建立AFP-L3%及AFP联合诊断肝癌的模型。结果肝癌组AFP和AFP-L3水平均显著高于肝硬化组和慢性肝炎组(H值分别为1107. 3、1076. 9,P值均0. 01)。肝癌组AFP-L3%阳性率为30. 9%,显著高于肝硬化(3. 0%)及慢性肝炎组(2. 8%)(χ~2=768. 5,P 0. 01)。肝癌组AFP-L3%水平为3. 3(0～13. 4)%,显著高于肝硬化(0)及慢性肝炎组(0)(H=1034. 1,P 0. 01)。相关分析结果显示血清AFP与AFP-L3水平显著相关(r=0. 91,P 0. 01),但AFP-L3%与AFP则无相关性(r=0. 04,P 0. 05)。在特异度相同的情况下,AFP联合AFP-L3%诊断肝癌的灵敏度显著高于AFP(26. 6%vs 18. 4%,P 0. 01)或AFPL3%单用(36. 6%vs 30. 9%,P 0. 01)。亚组分析显示,对于AFP≥10μg/L的样本,联合诊断肝癌的AUC显著高于AFP单用(0. 745vs 0. 701,P 0. 01);在肿瘤直径 2 cm或乙型肝炎相关肝癌中,联合检测的灵敏度显著高于AFP单用(27. 6%vs 18. 0%,27. 7%vs19. 1%,P值均0. 01)或AFP-L3%单用(37. 0%vs 30. 3%,36. 9%vs 31. 8%,P值均0. 01)。但在肿瘤直径≤2 cm以及非乙型肝炎相关肝癌亚组中,联合检测诊断肝癌的灵敏度与单用AFP或AFP-L3%差异均无统计学意义(P值均 0. 05)。结论 AFP联合AFP-L3%能显著提高肝癌诊断的灵敏度,对乙型肝炎相关肝癌和肿瘤直径 2 cm肝癌的辅助诊断具有更好的临床应用价值。     

HHIP基因启动子区甲基化在食管癌细胞系中的研究

目的 探索人食管癌细胞系Hedgehog信号通路相关基因的表达状况、HHIP基因启动子区甲基化状态与HHIP表达的关系.方法 采用RT-PCR方法检测5个食管癌细胞系Hedgehog信号通路SHH、PTCH1、SMO、HHIP和Gli的表达情况.用基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切、并结合荧光定量PCR方法分析食管癌细...     

戊型肝炎病毒（HEV）基因疫苗免疫小鼠的初步研究

本研究将含ＨＥＶ ＯＲＦ３ ｃＤＮＡ的真核表达质粒作为基因疫苗直接注射到ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌内，引发了实验小鼠特异性抗－ＨＥＶ ＩｇＧ反应。小鼠经２次基因疫苗接种或１次基因疫苗，然后用ＨＥＶ重组蛋白加强免疫后，血清抗－ＨＥＶ ＩｇＧ滴度较接种１次基因疫苗组明显升高。     

人工酵母染色体克隆技术

人工酵母染色体是人工构建的具有着丝粒、两个染色体臂和端粒形成顺序、一或两个DNA复制起点及选择标记的酵母染色体,能够在酵母细胞内进行复制和正常分离。人工酵母染色体宿主载体系统在DNA克隆方面的应用是重组DNA技术的重大突破。其克隆外源DNA的长度可达百万碱基对,使得对复杂基因组进行大范围的克隆和分析研究成为可能。本文对其结构、性能、应用及存在的问题进行了讨论。     

柯萨奇病毒B组3型VP1基因真核表达重组质粒诱导小鼠中和抗体反应

以构建的柯萨奇病毒Ｂ 组３ 型（ＣＶＢ３）ＶＰ１ 基因的真核表达重组质粒ｐＣＥＰ４ＣＶＢ３ＶＰ１ 作为候选的基因疫苗,评价其诱导小鼠产生的中和抗体反应。大量制备并提纯ｐＣＥＰ４ＣＶＢ３ＶＰ１ ＤＮＡ,用其接种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取血清进行病毒中和试验。结果证明其可诱导小鼠机体产生特异性中和抗体,并能中和ＣＶＢ３ 毒力,起到基因疫苗的预防作用。     

阳离子脂质体介导的HSV-tk自杀基因疗法的体内外抗肝癌作用

为研究阳离子脂质体介导HSV-tk自杀基因系统的体内外抗肝癌作用,本课题用基因重组技术构建了含HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体,命名为pLXT。用Lipofectin介导转染人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选抗性克隆及流式细胞仪分析,获得了持续表达HSV-tk的克隆细胞SM/tk。~3H-TdR掺入法测定表明HSV-tk/ACV系统对SM/tk细胞具有强杀伤力。将Lipofectin-pLXT复合物直接注射于鼠肝癌细胞(H22)实体瘤内,ACV治疗后监测抑瘤率,发现脂质体介导pLXT、ACV治疗组及裸pLXT注射、ACV治疗组平均瘤体积均显著小于其它六组对照组(P<0.001,P<0.05),前两者比较亦有显著差异(P<0.02)。空载体转染组和阴性对照组平均瘤体积及平均瘤重均无显著差异(P>0.05)。这些结果表明阳离子脂质体介导重组逆转录病毒载体基因转染的方法简便、安全、有效,且可使目的基因获得持续表达;在体内HSV-tk/ACV系统具有强的细胞毒作用,提示存在着强的旁观者效应。此外,瘤体内直接注射裸HSV-tk基因的治疗也有效。     

用RNA／DNA嵌合寡核苷酸进行单碱基突变修正

以含有单个错配碱基的ＲＮＡ／ＤＮＡ嵌合寡核苷酸为载体，通过含ＲＮＡ残基链与靶序列的同源配对反应，启动靶细胞内源的错配修复机制，可在特定位点引入或修正单个核苷酸突变，并使修复后的基因表达仍处于原基因调控元件之下。     

N-端加flag标签增加P21Cip1/WAF1蛋白质稳定性

背景与目的： 已知细胞分裂周期抑制因子P21通过蛋白酶体通路降解,其氨基端的泛素化可能参与了这一过程。Flag为一蛋白标签,常用于标记重组蛋白质,以便对靶蛋白进行生物学功能分析。本文旨在研究N-端加flag对P21蛋白质稳定性的影响。 材料与方法： 建立稳定表达外源flag-p21蛋白质的NIH3T3细胞株,应用蛋白印迹法 (WB) 检测NIH3T3细胞表达的flag-p21,并比较其与内源P21蛋白质半衰期的差异;确定阻断蛋白酶体水解通路对其降解过程的影响。 结果： NIH3T3细胞表达的内源P21蛋白质半衰期约30 min,而同一细胞表达的flag-p21融合蛋白半衰期则明显延长;用抑制剂MG-132阻断蛋白酶体水解通路后,P21蛋白质的量明显增加,但同一细胞内表达的flag-p21量却无明显改变。 结论： N-端加flag标签可增加P21蛋白质的稳定性。在对P21蛋白质的生物学功能进行研究时,应考虑N-端加flag对P21泛素化-蛋白酶体依赖的降解过程的影响。     

猪囊尾蚴特异性DNA片段的分离及聚合酶链检测方法的建立

目的分离猪囊尾蚴特异性ＤＮＡ技术片段并建立猪囊尾蚴聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。方法应用随意引物聚合酶链反应（ＡＰＰＣＲ）技术分离猪囊尾蚴特异性ＤＮＡ片段，根据其核苷酸序列设计引物，建立ＰＣＲ方法。结果应用ＡＰＰＣＲ技术从不同患者囊尾蚴结节活检标本中扩增得到基本一致的ＤＮＡ带谱。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证实随意扩增所得片段与猪囊尾蚴ＤＮＡ同源。对其中一个片段再次扩增并克隆测序。依据测序结果设计合成引物，分别以猪囊尾蚴、猪和人组织ＤＮＡ作模板，仅有前者ＰＣＲ阳性，并可检出低至１０ｐｇ的猪囊尾蚴ＤＮＡ。结论猪囊尾蚴ＤＮＡＰＣＲ检测方法的建立为猪囊尾蚴感染的临床诊断和病原流行病学调查提供了实验基础。     

慢性乙型肝炎病毒感染的自然病程特征

目的：通过对单中心大样本慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染队列的分析,对我国慢性HBV感染自然病程的划分提出修订建议。方法：回顾性地纳入2014年1月至2020年10月在中国人民解放军总医院第五医学中心接受过肝组织活检的慢性HBV感染者。参考《欧洲肝病学会乙型肝炎病毒感染管理临床实践指南(2017年版)》等国内外最新版慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)防治指南,将患者按乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)状态及肝损伤程度分为HBeAg阳性感染(免疫耐受期)、HBeAg阳性CHB(免疫清除期)、HBeAg阴性感染(免疫控制期)和HBeAg阴性CHB(再活动期)四个自然病程分期,并重点比较了不同分期患者的人口学和实验室检验结果。两组间年龄差异采用Mann-Whitney U检验。结果：最终纳入符合纳排标准的患者760例,包括197例未成年(年龄<18岁)和563例成年感染者,男性456例、女性304例,纳入患者的中位年龄为29岁,(四分位间距：16,39岁)。上述四个自然病程分期患者...