阳离子脂质体介导的HSV-tk自杀基因疗法的体内外抗肝癌作用

为研究阳离子脂质体介导HSV-tk自杀基因系统的体内外抗肝癌作用,本课题用基因重组技术构建了含HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体,命名为pLXT。用Lipofectin介导转染人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选抗性克隆及流式细胞仪分析,获得了持续表达HSV-tk的克隆细胞SM/tk。~3H-TdR掺入法测定表明HSV-tk/ACV系统对SM/tk细胞具有强杀伤力。将Lipofectin-pLXT复合物直接注射于鼠肝癌细胞(H22)实体瘤内,ACV治疗后监测抑瘤率,发现脂质体介导pLXT、ACV治疗组及裸pLXT注射、ACV治疗组平均瘤体积均显著小于其它六组对照组(P<0.001,P<0.05),前两者比较亦有显著差异(P<0.02)。空载体转染组和阴性对照组平均瘤体积及平均瘤重均无显著差异(P>0.05)。这些结果表明阳离子脂质体介导重组逆转录病毒载体基因转染的方法简便、安全、有效,且可使目的基因获得持续表达;在体内HSV-tk/ACV系统具有强的细胞毒作用,提示存在着强的旁观者效应。此外,瘤体内直接注射裸HSV-tk基因的治疗也有效。     

原发性肝细胞癌细胞系和组织中ARID2的表达

目的:探讨原发性肝细胞癌(HCC)细胞系和组织中ARID2 mRNA的表达与原发性HCC发生发展的关系。方法:应用实时定量荧光PCR方法检测9种HCC细胞系和组织中ARID2 mRNA的表达。结果:不同感染背景下HCC细胞中ARID2 mRNA表达水平不同。与正常肝组织相比,ARID2 mRNA在HCC癌旁组织中的表达水平下降(有HBV感染:Z=10.684,P<0.05;无HBV感染:Z=16.015,P<0.05);在无HBV感染背景的HCC组织和配对癌旁组织中ARID2 mRNA表达水平差异有统计学意义(Z=1.886,P<0.05)。不同感染背景的HCC组织中ARID2 mRNA的表达差异有统计学意义(Z=13.479,P<0.001)。结论:ARID2可能与原发性肝细胞癌的发生发展相关。     

自杀基因表达产生旁观者效应的初步研究

目的:构建单纯疱疾病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)的重组逆转录病毒载体,初步探讨转染有HSV-tk基因的人肝癌细胞产生旁观者效应的作用机制.方法:EcoRⅠ和PvuⅡ酶切质粒PHSV-106,回收1.9kb HSV-tk基因片段,将其定向克隆人逆转录病毒载体LXSN的EcoRⅠ/HpaⅠ酶切位点.经lipofectin将HSV-tK基因转染入肝癌细胞系,测定转染细胞对GCV或ACV的敏感性.并把转染细胞与非转染相应细胞按不同比例混合,分别在不同细胞密度及特定培养基条件下作用亲本细胞,观察细胞与细胞接触,不接触及GCV作用转染细胞其培养基与旁观者效应的关系.结果:经酶切鉴定,成功构建了含HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体,命名为 PLXT;MTT法,~3H-TdR掺入法,流式细胞仪均表明GCV或ACV对SMMC-7721有显著杀伤作用,其作用在一定范围内与剂量和时间呈平行关系;细胞与细胞接触,不接触均有旁观者效应,但前者明显强于后者;GCV作用转染细胞后培养基对本细胞亦有弱的细胞毒作用.结论:阳离子脂质体是转基因的有效载体;经它介导的含有HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体赋于人肝癌细胞对GCV或ACV的高敏感性;HSV-tk/GCV或ACV系统的旁观者效应可能是综合因素作用的结果,其中“缝隙连接”可能是主要作用因素.     

半定量RT-PCR法分析两种microRNAs在肝癌和癌旁组织中的差异表达

目的 运用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分析miR18和miR224在原发性肝细胞癌(HCC)和癌旁组织中的差异表达.方法 提取肝癌细胞系SMMC7721的小分子RNA(≤200bp),通过对小分子RNA加poly-A尾和RT反应获得cDNA,建立一种扩增microRNA(miRNA)的RT-PCR方法,并采用该方法对10对HCC和癌旁组织中miR18和miR224两种miRNAs的表达进行半定量分析.结果 与癌旁组织相比,10例HCC组织中,miR18有7例表达上调,3例表达下调;miR224有5例表达上调,5例表达下调.在miR224上调的5例HCC中miRl8表达均上调.结论 HCC存在miR18和miR224表达水平的改变;半定量RTPCR方法为miRNA在肿瘤方面的研究提供了一个相对简便的方法.     

血清HBV RNA在慢性乙型肝炎临床管理中的应用价值

在我国,HBV感染所致病毒性肝炎、肝硬化、肝细胞癌等仍严重威胁我国公民的健康。积极的抗病毒治疗能够明显延缓肝脏疾病进程、减少终末期肝病的发生,但现有药物很难使患者临床治愈,特别是核苷(酸)类药物往往需要长期用药。新的血清学指标可以进一步优化抗病毒治疗方案,其中血清HBV RNA由肝组织内cccDNA转录,主要是未经或部分逆转录的前基因组RNA及其剪切变异体。总结了血清HBV RNA在HBV感染者血清中的存在形式和来源、影响其水平的因素、与其他血清病毒学指标的相关性、及其与肝组织cccDNA的关系,并评价了其在监测抗病毒疗效和预测停药后病毒反弹发生风险等方面的临床意义。     

现有肝癌筛查能降低肝癌相关病死率

<正>肝癌是我国最常见恶性肿瘤之一,排在肿瘤相关死亡的第三位,5年生存率仅为14.1%~([1,2])。但早期肝癌的根治性治疗可明显改善患者预后。故此,我国《原发性肝癌诊疗规范(2017)》建议对肝癌高危人群至少每隔6个月进行一次超声联合甲胎蛋白筛查~([3])。然而,近日Moon等~([4])发起的一项研究纳入了238例死于肝癌(病例组)和1∶1配对的存活肝硬化患者(对照组),研究发现病例组诊断日期(Index Date)前4年的超声和/或甲胎蛋     

食管鳞癌雌激素受体α基因启动子甲基化异常

【摘要】目的：研究雌激素受体α(ERα)基因及启动子超甲基化与食管鳞癌的关系。方法：用RT-PCR法检测2个食管鳞癌细胞系ERα mRNA表达情况,甲基化特异PCR技术（MSP）检测ERα基因启动子超甲基化,对超甲基化的细胞用脱氧胞苷（5-aza-dc）去甲基化后检测细胞ERα mRNA。MSP检测47份组织ERα基因启动子超甲基化。结果：食管鳞癌细胞系存在 ERα基因启动子甲基化及其引起的ERα mRNA表达缺失。57.4% (27/47)的原发性食管鳞癌细胞有ERα基因启动子区的超甲基化,其中女性患者ERα启动子超甲基化检出率73.7% (14/19),明显高于男性(15/28,53.6%,P<0.05)。结论：ERα基因启动子超甲基化与食管鳞状上皮细胞癌相关。     

戊型肝炎病毒分子生物学、血清学、诊断方法及流行病学研究

本课题由北京医科大学牵头,中国预防医学科学院病毒学研究所和新疆维吾尔自治区卫生防疫站等单位协作完成,其主要成果如下: 病原学 1.对我国2株流行性戊型肝炎病毒(HEV)基因组全序列进行了测定和分析,其与缅甸株HEV的核苷酸序列同源性分别为93.9％和94.0％,提示我国流行性HEV与缅甸株属同一亚型。 2.对从北京、西安、长春、杭州、深圳等地分离的7株散发性HEV的部分基因序列进行     

戊型肝炎病毒（HEV）基因疫苗免疫小鼠的初步研究

本研究将含ＨＥＶ ＯＲＦ３ ｃＤＮＡ的真核表达质粒作为基因疫苗直接注射到ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌内，引发了实验小鼠特异性抗－ＨＥＶ ＩｇＧ反应。小鼠经２次基因疫苗接种或１次基因疫苗，然后用ＨＥＶ重组蛋白加强免疫后，血清抗－ＨＥＶ ＩｇＧ滴度较接种１次基因疫苗组明显升高。