经颅多普勒对颈性眩晕患者血流动力学的分型分析

目的：应用经颅多普勒(transeranial Doppler，TCD)对颈性眩晕患者血流动力学进行分型，寻找各型血流动力学差异的依据。方法：2003-11，／2004-07武汉大学中南医院诊断为颈性眩晕的住院患者91例，采用TCD检测其血流动力学。所有患者进行血压、眼底镜、血脂、血糖、血流变学、颈椎X射线、MRI及磁共振血管造影(magnetic resonance angiography,MRA)检查。结果：颈性眩晕血流动力学可分为4型：高流型(27％)、正流型(22％)、低流型(48％)、血流信号消失型(2％)。高流型存在的依据为较严重的颈椎生理弯曲异常、椎间失稳、寰椎椎动脉沟环、局部横突孔狭窄和椎间盘突出等；正流型示颈椎及椎基底动脉轻度异常；低流型存在的依据为椎基底动脉硬化、高脂血症、高黏血症、颈椎间隙变窄、钩椎关节增生等；血流信号消失型与椎动脉缺如或闭塞有关。结论：颈性眩晕血流动力学TCD分型，有利于理解颈性眩晕发病机制、推测病因及指导临床治疗实践，但尚应结合眼底镜检查、血黏度、血脂及影像学结果来制定更合理的治疗方案。     

C型Niemann-Pick病神经原纤维缠结的形成与特征

目的 探讨C型尼曼-皮克病(NPC)脑部神经原纤维缠结(NFT)形成的时相特征.方法 以17例年龄7个月至55岁的NPC患者为研究对象,采用tau蛋白和有丝分裂期相关抗体进行免疫组织化学染色和银染,分析患者脑内NFT形成的特点.结果 最早可在4岁的患者海马旁回发现典型的NFT形成,随年龄增长数量逐渐增多.在形态上与阿尔茨海默病(AD)所见高度相似,但未发现老年斑.在NPC中,有丝分裂期磷酸化表位早于tau蛋白过度磷酸化及NFT形成.结论NFT形成并非老龄化过程的结果 ,且与老年斑的存在与否并无关联.cdc2/cyclinB1可能是NFT形成的关键性早期事件,针对其活性的抑制剂对于早期干预NPC NFT的形成有重要意义.     

Packaging and Functional Identification of Recombinant Adeno-associated Virus Encoding cdc2-siRNA

Cyclin dependent kinases （cdks） play an important role in the pathogenesis of multiple neurodegenerative diseases. To explore the possibility of cdks-related gene therapy for neurodegen-erative diseases, we packed recombinant adeno-associated virus （rAAV） encoding cdc2-siRNA. The expressing plasmid pAAV-MCS-EGFP-U6-cdc2-siRNA was constructed by using molecular biological techniques. The rAAV encoding cdc2-siRNA （rAAV-EGFP-U6-cdc2-siRNA） was packed by calcium phosphate mediated co-transfection of the plasmid pAAV-MCS-EGFP-U6-cdc2-siRNA, p-RC and p-Helper into AAV-293 cells. DNA sequencing proved the successful construction of U6-cdc2-siRNA in pAAV-MCS-EGFP. Seventy-two h after packaging, the expression of EGFP could be detected in AAV-293 cells. Western blotting revealed that cdc2 gene expression in AAV-293 cells was down-regulated markedly after transfection with rAAV-EGFP-U6-cdc2-siRNA, which evidenced the satisfactory silencing effect of this virus. It was concluded that the packaging of rAAV encoding cdc2-siRNA was successful. rAAV encoding cdc2-siRNA could silence cdc2 gene effectively, which might offer a novel means for the treatment of neurodegenerative diseases.     

线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作患者抑郁的相关因素分析

目的 分析线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(MELAS)患者抑郁的相关因素。方法(1)采用抑郁自评量表( SDS)调查32例MELAS患者的抑郁状况;(2)将患者分为抑郁组与非抑郁组,比较2组患者SDS各分项的评分;(3)以性别、发病年龄、受教育年限、病程、MMSE 评分及主要症状作为可能的相关因素进行单因素分析及多因素Logistic回归分析。结果(1)MELAS患者抑郁的总发生率为62.5%,其中轻度抑郁发生率34.4%,中度抑郁18.7%,重度抑郁9.4%;(2)MELAS患者SDS评分显著高于国内常模评分(P<0.01);(3)抑郁组患者SDS 3个分项(精神性-情感症状、精神运动性障碍、抑郁的心理障碍)评分分别显著高于非抑郁组(P<0.05或0.01);(4)抑郁组与非抑郁组之间的病程、胃肠道损害及癫痫例数的比较均有显著差异(P<0.05或0.01);(5)Logistic回归分析显示MELAS患者伴发抑郁与病程、胃肠道损害及癫痫显著相关(P<0.05或0.01)。结论 MELAS患者伴发抑郁不少见,其发生可能与病程、胃肠道损害及癫痫有关。     

颈性眩晕的病因及其发病机制

颈性眩晕是指椎基底动脉(VA)颅外段受颈部病变的影响导致血流障碍引起以眩晕为主的临床综合征。其病因及发病机制为:颈交感神经受激惹,钩椎关节增生、椎间盘突出、横突孔狭窄、寰椎VA沟挤压VA、VA硬化、VA发良不良、椎间不稳和神经鞘瘤等使VA受压,颈部纤维结构炎症反应使颈交感神经受激惹,血浆内皮素使VA收缩,导致VA供血不足,以致脑干、小脑及前庭系统缺血而引起眩晕。     

抑制细胞周期依赖性蛋白激酶-5表达对C型尼曼-皮克病小鼠的神经保护作用

目的:观察抑制细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cdk5)的表达对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠(npc-/-)的治疗作用。方法:采用携带cdk5特异性小干扰RNA(cdk5-siRNA)的重组腺相关病毒rAAV-cdk5-siRNA-GFP,对出生三天内的npc-/-小鼠进行双侧侧脑室注射,以rAAV-GFP注射组及非手术的同龄npc小鼠为对照(n=6～10/组);采用免疫组织化学染色、HE染色和小鼠衣架悬挂试验来评价小鼠脑内的神经病理改变和运动功能。结果:rAAV2-cdk5-siR-NA-GFP能显著减少轴突球状体的数量,延缓浦肯野细胞的死亡并改善npc-/-小鼠的运动功能。结论:降低cdk5的活性对npc-/-小鼠的神经元有一定的保护作用。     

小脑顶核电刺激对脑微出血患者认知功能的影响

目的观察小脑顶核电刺激（FNS）对脑微出血（CMB）患者认知功能的影响。方法35例CMB患者随机分为观察组及对照组。两组都给予内科常规药物治疗,观察组还接受FNS 治疗。采用蒙特利尔认知评估量表（MoCA）于治疗前、治疗15 d 后对两组患者进行认知功能测评,并用MRI 磁敏感加权成像对CMB 病灶进行检查。结果①FNS 治疗后与治疗前观察组CMB 病灶数目的比较差异无统计学意义（P >0.05）。观察组治疗后CMB 病灶数目与对照组治疗后的数目比较差异无统计学意义（P >0.05）;②药物治疗前、后对照组MoCA 8个分项认知功能评分及总评分的比较差异无统计学意义（ P>0.05）。观察组FNS 治疗后MoCA 8个分项认知功能评分及总评分比治疗前的评分有提高（P <0.05）。观察组治疗后MoCA 8个分项认知功能评分及总评分比对照组治疗后的评分有提高（P <0.05）。结论FNS 可改善CMB 患者的认知功能,且安全,其有可能为CMB认知功能障碍患者提供1 种辅助治疗手段。     

携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒的包装

背景：细胞分裂周期2(cell division cycle 2, cdc2)在神经变性疾病如阿尔茨海默病的神经元变性过程中扮演了重要角色。以腺相关病毒为载体对cdc2基因进行沉默,可能对神经变性疾病的神经元起保护作用。 目的：包装携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV)。 设计、时间及地点：空白对照实验,于2007-10/2008-08在武汉同济医院神经科实验室完成。 材料：Helper Free 腺相关病毒系统(pAAV-MCS-EGFP、p-RC、p-Helper)及AAV-293细胞为Stratagene公司产品。 方法：应用分子生物学方法构建生成pAAV-MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP表达质粒;用磷酸钙法将该质粒和p-RC、p-Helper质粒共转染AAV-293细胞,包装生成携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒 (rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP)。病毒感染AAV-293细胞后行Western Blot 检测cdc2-siRNA对细胞内cdc2基因的沉默效果,并用斑点杂交方法测定该病毒的滴度。 主要观察指标：pAAV-MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP质粒中插入片段U6-cdc2-siRNA的测序;3质粒pAAV- MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP、p-RC、p-Helper共转染AAV-293细胞; rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP感染AAV-293细胞后cdc2的表达。 结果：①DNA测序证明U6-cdc2-siRNA已成功构建到表达质粒pAAV-MCS-EGFP中。②AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白,共转染成功。③包装得到的重组腺相关病毒 (rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP)感染AAV-293细胞后能显著下调 AAV-293细胞cdc2基因的表达量。④rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP的滴度为1x1012 v.g/mL。 结论：携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒的包装获得成功,它具有沉默cdc2基因表达的功能。     

细胞周期依赖性蛋白激酶-5在C型尼曼-皮克病神经元变性中的作用

目的 确定细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cyclin dependent kinases-5,cdk5)在C型尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease type C,NPC)神经元变性过程中的作用.为NPC的临床治疗提供可能的药物作用靶点.方法 将针对cdk5基因的siRNA序列克隆入rAAV-2载体,对4周龄npc-/-小鼠进行小脑rAAV-cdk5-siRNA-GFP注射(n=8),以空载体病毒(rAAV-GFP)注射组及非手术的同龄npc小鼠为对照(n=8).在干预后4周连续观察小鼠脑内cdk5水平及小鼠神经生化和病理的改变.结果 注射后1周可见针道附近、小脑深部核团及浦肯野细胞出现绿色荧光蛋白表达.与空载体病毒组相比,注射4周后小鼠脑内cdk5的表达水平降低34.17%(P<0.05,n=6);轴突球状体数量减少30.76%(P<0.05,n=6),存活浦肯野细胞数增加300%(P<0.05,n=8);细胞骨架蛋白磷酸化程度降低16.32%(P<0.05,n=6).结论 rAAV2-cdk5-siRNA小脑注射,能显著减轻npc小鼠神经生化和病理改变.cdk5的激活在NPC神经元变性过程中起到了关键性的作用,有可能成为NPC治疗的新靶标.