原核表达的血管抑素K (1-3)蛋白对脑胶质瘤的生长抑制作用

目的获得具有抗血管生成活性的 angiostatin K(1-3)[AK(1-3)]基因的原核表达蛋白,应用该蛋白治疗裸鼠皮下人脑胶质瘤.方法构建和鉴定 pDH-AK(1-3)载体并在大肠杆菌DH5α内表达,诱导后用 SDS-PAGE分析、经亲和层析纯化后行Western Blot鉴定,以人脐带静脉血管内皮细胞抑制实验和鸡胚绒毛膜尿囊膜实验验证其生物学活性,应用AK (1-3) 蛋白治疗裸鼠皮下人脑胶质瘤.结果获得抑制人脐带静脉血管内皮细胞生长活性的AK(1-3) 原核表达蛋白(Mr为35×103),其蛋白总量占菌体总蛋白的12 %,该纯化表达蛋白5 mg·kg-1·次-1和10 mg·kg-1·次-1组均可抑制裸鼠皮下人脑胶质瘤生长,抑瘤率分别为34.5%和64.6%.结论该实验为应用抗血管生成药物治疗人脑胶质瘤等实体瘤研究奠定了初步基础.     

闭合性脊髓损伤的显微神经外科手术处理

目的　探讨闭合性脊髓损伤的外科处理原则。方法　回顾性分析 1990年 1月～ 2 0 0 3年 1月神经外科收治的 2 10例闭合性脊髓损伤患者的诊治方法及预后。结果　本组 2 10例患者治疗前Frankel分级 :A级 113例 (5 3 8% ) ,B级 4 9例 (2 3 3% ) ,C级 37例 (17 6 % ) ,D级 11例(5 2 % )。治疗后经随访 3个月～10年 ,A级 4 2例 (2 0 0 % ) ,B级 15例 (7 1% ) ,C级 4 5例 (2 1 4 % ) ,D级 6 1例 (2 9 0 % ) ,E级 4 7例(2 2 4 % )。结论　对于闭合性脊髓损伤患者 ,是否采用手术治疗取决于其神经系统检查、脊髓的影像学检查或解除脊髓压迫、改善骨折的稳定性及早期活动或康复的需要。外科处理原则为早期治疗、手术解除脊髓压迫、复位与固定、防治并发症和康复训练。     

靶向Survivin基因的短发卡RNA对U251细胞生长和凋亡的影响

目的观察Survivin基因特异性短发卡RNA（shRNA）对人脑胶质母细胞瘤U251细胞体外生长和细胞凋亡的影响。方法对U251细胞，稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251-SR细胞，以及稳定转染空载体pWH1的U251-P细胞。分别采用细胞计数法绘制生长曲线和平板克隆形成实验观察各组细胞的体外生长情况；采用流式细胞术（FCM）定量测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞数量；采用HE染色、Hoechst染色和原位末端标记（TUNEL）方法观察各组细胞形态学特征。结果与U251和U251-P细胞相比，U251-SR细胞生长明显减缓（P〈0．01），细胞克隆形成明显减少（P〈0．01）；U251-SR细胞G1期细胞增多，S期细胞减少，凋亡细胞增加至20．9％，并呈现典型的细胞凋亡形态学改变。结论靶向Survivin基因的特异性shRNA能够在体外明显抑制U251细胞的生长并诱导其发生大量凋亡。     

小鼠脑Willis环的解剖及其对局灶性脑缺血模型的影响

目的:研究小鼠W illis环的解剖结构,为不同种系小鼠局灶性脑缺血模型提供解剖学依据。方法:雄性昆明小鼠和Balb/C小鼠各20只,各随机等分成两组即分别为K1、K2、B1、B2组。K1和B1组经左心室灌注墨汁乳胶液约2m l,去骨取脑,观察颈内动脉及W illis环的结构。K2和B2组采用插线法制作永久性大脑中动脉栓塞(M CAO)模型,术后1h和24h观察并记录小鼠神经功能评分后,取脑并切成2mm厚片,2%TTC染色,运用图像分析系统对梗死体积进行统计分析。结果:昆明小鼠后交通动脉多发育良好,90%有完整的W illis环;而Balb/C小鼠后交通动脉多发育不良或缺失,90%W illis环不完整。昆明小鼠M CAO模型梗死灶仅波及大脑中动脉供血区,24h症状轻,生存率100%;而Balb/C小鼠M CAO模型梗死灶波及大脑中动脉和大脑后动脉供血区,24h症状重,病死率40%。结论:小鼠M CAO模型的梗死灶大小与W illis环的结构密切相关;昆明小鼠与Balb/C小鼠比较,更适宜制作永久性M CAO模型。     

Cloning and sequencing of the fragment of angiostatin K(13) gene

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｓｅｃｕｒｅａｎｔｉｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｃｙｔｅｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎＫ（１３）ｇｅｎｅ－Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＡｓｔｈｅｔｅｍｐｌａｔｅｏｆｌｅｕｋｏｃｙｔｏｔｉｃｃＤＮＡ,ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎＫ（１３）ｃＤＮＡｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲ,ｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｖｅｃｔｏｒｐＧＥＭ３Ｚｆ,ａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏ…     

脑胶质细胞瘤体内侵袭性的实验研究

目的 探讨胶质瘤的体内侵袭和转移特性。方法 利用体外转染有绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因的大鼠Ｃ６脑胶质瘤细胞移植模型,将携有增强型绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）基因的pＥＧＦＰ－N３质粒体外转染Ｃ６细胞,筛选能稳定表达ＧＦＰ的瘤细胞克隆,并做流工细胞仪和电镜检测。将阳性转染和未转染瘤细胞以立体定向法植入ＳＤ大鼠脑实质仙,建立大鼠移植瘤模型。４周后处死大鼠并作脑连续石蜡切片,相邻切片分别行苏木素－伊红（ＨＥ）及免疫组织化学染色和荧光显微镜（激发光波长为４８８mm)检测。对移植瘤细胞行原代培养,以检测荧光基因在体内的保存情况。结果 阳性转染的Ｃ６瘤细胞的ＥＧＦＰ在大鼠脑内获得稳定表达,在荧光显微镜下较易于区分肿瘤与非肿瘤区,并能发现侵袭至远处的单个瘤细胞,其敏感性及特异性明显优于ＨＥ染色或免疫组化方法。结论 ＧＦＰ基因体外转染Ｃ6胶质瘤细胞并行大鼠脑内移植,是一种较好的研究脑胶质瘤侵袭性的体内实验模型。     

白藜芦醇对小鼠脑缺血再灌注损伤后MMP-9蛋白的影响

目的探讨白藜芦醇预治疗对小鼠暂时性脑缺血的脑保护作用及其对基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达及活性的影响。方法采用插线法制作小鼠暂时性大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。白藜芦醇溶于20％环糊精／0．9％NaCL，50mg／kg强饲，1／d，于第7d行MCAO。MCAO2h再灌注22h取完整端脑，切成2mm冠状厚片，2％红四氮唑（TFC）染色，计算脑梗死灶的大小。分别于MCAO2h再灌注4h、10h及22h取患侧或对照侧端脑，提取总蛋白，采用Western blot和明胶酶谱分析方法研究MMP-9的表达及活性。结果白藜芦醇预治疗组MCAO2h再灌注22h时的梗死灶明显小于对照组（P〈0．01）。Western blot和明胶酶谱分析结果证明，白藜芦醇预治疗可降低脑缺血再灌注损伤所诱导的MMP-9蛋白的表达及其活性水平。结论白藜芦醇预治疗对脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用，这可能得益于其抑制了MMP-9蛋白的高表达及活性增高。     

Development of a rat C6 brain tumor model

Objective To establish rat C6 brain- tumor models and find a simple reliable index to judg e tumor volume. Methods C6 cell suspension (10 μl) containing 10 g/L agarose and 1×10［6］ cells was i njected into the right caudate nucleus of the rat brain by a stereotaxic method . After implantation, rats were observed and given MRI scans. Rats were perfus ed with paraformaldehyde trans- aorta at the 10th, 15th, 20th and 25th day and b efore natural death. All brains, lungs, spinal cords and tumors were sectioned and inspected. Tumor- containing samples were prepared histologically by hemato xylin and eosin (HE) stains. Results Fifty implanted rats had 100% yield of intracerebral growth, with distant metast asis of 0% to 4%. Conclusion A rat C6 brain- tumor model was successfully established. Rat survival time is correlated with tumor volume and may be useful as an index of tumor size .     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG－44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响，阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法PTEN基因体外转染SHG－44细胞，筛选阳性细胞克隆，以原位杂、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况；采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况；以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG－44细胞有PTEN蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核破裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现；流式细胞仪显示细胞周期从G1期到S期发生抑制，并且在G1期峰前出现一明显的凋亡峰（15．9％）；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带；bcl-2的表达也显著下调。结论 PTEN基因可诱导SHG－44细胞凋亡，并下调bcl-2蛋白的表达，这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。     

小鼠大脑中动脉暂时性脑缺血模型的建立方法和时间窗探讨

目的:建立稳定的、可重复性的局灶性脑缺血再灌注动物模型。方法:采用插线法建立小鼠暂时性大脑中动脉栓塞模型。栓塞时间分别为30、60、90和120min。手术后24h分别对各组小鼠进行神经功能评分。完整端脑2mm冠状厚片行2%红四氮唑(TTC)染色,计算梗死体积。结果:栓塞120min组神经功能评分最高,且变化最小。TTC染色显示,栓塞120min可引起该侧大脑中动脉供血区域广泛的梗死灶,而且梗死灶大小适宜,稳定性好。结论:插线法是一种简单、可靠的制作小鼠暂时性大脑中动脉栓塞模型的方法,栓塞120min再灌注22h可引起稳定的梗死灶,适合于脑缺再灌注损伤的对照研究。