婴幼儿颅脑损伤后大面积脑缺血的临床特征及治疗

目的总结分析婴幼儿颅脑损伤后大面积脑缺血的临床特点。方法回顾性研究41例婴幼儿颅脑损伤后大面积脑缺血患者的致伤原因、损伤类型、临床表现，以及救治方法和预后状况。结果41例患儿中坠落伤24例，占58．5％；新生儿产伤10例，占24．4％，二者合计占82．9％。30例（73．2％）患儿伤后症状进行性加重，11例（26．8％）患儿病情稳定后又分别出现新的症状，复查头颅CT发现大面积脑缺血。而伤后1d内出现大面积缺血6例，1-3d出现的23例，3d至1W以上出现12例。经颅多普勒（TCD）检测11例大脑中动脉血流峰速（Vm）120cm／s〈Vm〈140cm/s，5例90cm／s〈Vm〈120cm／s，5例Vm〉140cm／s，2例Vm〈30cm／s。手术治疗34例，主要行颅内血肿清除术、减压术等。41例患儿均接受尼莫同、罂粟碱、丹参、低分子右旋糖酐等不同药物组合治疗。部分病例还给予静脉滴注尿激酶。格拉斯哥预后评级（GOS）：恢复良好22例（53．7％）；中残8例（19．5％）；重残5例（12．2％）；植物生存1例（2．44％）；死亡5例，死亡率12．2％。结论婴幼儿颅脑损伤后大面积脑缺血的病例以坠落伤和新生儿产伤较多见，脑缺血的发生与硬膜下血肿、脑挫裂伤所致的脑血管痉挛有紧密的关系，大面积脑缺血的危害性大，致残、致死率高，早期的扩张血管和改善循环治疗，是预防和改善颅脑创伤后大面积脑缺血的最为有效的治疗方法。     

整合素β1 基因在人脑胶质瘤中的表达与临床意义

 目的　检测脑胶质瘤中整合素 β1基因表达 ,阐明其临床意义。方法　应用免疫组化和原位杂交法 ,分析 53例人脑胶质瘤整合素 β1基因表达 ,对患者随访并比较其预后。结果　整合素β1蛋白阳性率 ,在 ～ 级脑胶质瘤分别为 36.3%、38.5%、72 .2 %和 81 .8% ,高级别 ( ～ )高于低级别 ( ～ ) (P<0 .0 5) ,其 m RNA表达同其蛋白表达。高表达整合素β1的患者预后较差。结论　整合素β1的高表达与脑胶质瘤分化程度低、侵袭性强密切相关 ,是预测患者预后的较好标示物。     

绿色荧光蛋白转染胶质瘤细胞的体内实验研究

 目的　利用体外转染绿色荧光蛋白 (Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因的胶质瘤细胞建立大鼠移植模型 ,并探索利用该模型研究肿瘤体内侵袭的可行性。方法　携有EGFP基因的 p EGFP- N3质粒体外转染 C6胶质瘤细胞 ,筛选稳定表达 GFP的细胞克隆并以立体定向法植入 SD大鼠脑实质内建立肿瘤移植模型。 4周后处死大鼠并制作连续石蜡切片 ,相邻切片分别作 HE、免疫组化染色和荧光显微镜检测。结果　GFP于体内稳定表达 ,在荧光显微镜下可较容易区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞 ,并能检测到侵袭至远端的单个肿瘤细胞 ,其检测效率明显高于HE和免疫组化染色。结论　EGFP基因体外转染 C6胶质瘤细胞并建立大鼠脑内肿瘤移植模型 ,是研究胶质瘤体内侵袭的有效模型和方法。     

SIGNIFICANCE OF THE EXPRESSION OF GREEN FLUORESCENT PROTEIN ON DETECTION OF GLIOMA INVASION IN VIVO

The study on biological character of glioma is rapidly expanding day by day. However, there are some shortcomings in present experimental model and examination methods in vivo, which could not easily permit the visualization of tumor invasion, especially for the single invasive tumor cell. Identification of small numbers or individual invading tumor cells against background of host CNS cells may be impossible by standard HE staining. The deficiency of specific antibody against glioma cell de…     

小鼠内皮抑素基因克隆、表达及其抑瘤活性鉴定

利用ＲＴ－ＰＣＲ法从小鼠肝细胞扩增出Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ基因,重组人ｐＵＣ１９质粒。经测序后,将片段重且人大肠杆菌表达载体ｐＤＨ并用温度诱导表达。将表达的蛋白经纯化及复性后直接注入大鼠Ｃ６胶质瘤模型内,检测其对胶质瘤生长的抑制作用。结果,在小鼠肝组织中成功扩增到Ｅｎｄｏｗｓｔａｔｉｎ基因,测序与报道列一致重组进一致。重组进ＰＤＨ后经温度诱导表达,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳上得到一条新的蛋白表达带,分子     

C6细胞表达的人Angiostatin Kringle(1-3)体外抑制血管内皮细胞生长的研究

为研究人AngiostatinKringle( 1 3) [AK( 1 3) ]抑制血管内皮细胞生长的活性 ,利用脂质体法将带有大鼠血清白蛋白分泌信号的人AK( 1 3)基因导入大鼠C6胶质瘤细胞 ,并用G41 8筛选获得目的细胞株。采用电镜、流式细胞术、免疫组化和Westernblot等方法 ,检测转染前后细胞超微结构、细胞周期及AK( 1 3)蛋白表达情况 ,并用人脐静脉内皮细胞增殖实验检测目的细胞株表达的AK( 1 3)蛋白抑制血管内皮细胞生长的活性。结果表明 ,成功转染人AK( 1 3)基因的大鼠C6胶质瘤细胞可稳定表达AK( 1 3)蛋白 ,且具有抗血管内皮细胞增殖活性的良好作用 ,为进一步进行体内抗血管生成基因治疗奠定了基础。     

血管抑素K(1～3)基因片段的克隆与序列测定

我们用自己设计的一对引物,应用ＰＣＲ法成功获得血管抑素(ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ)Ｋ(1～3)基因片段,为进一步研究其表达和实体瘤抗血管生成治疗创造条件,现将结果报道如下。一、材料和方法1.菌种、载体及模板:大肠杆菌Ｅ.ＣｏｌｉＤＨ5α,基因型ｓｕｐＥ44,ｈｓｄＲ17ｒｅｃＡｌｅｎｄＡｌｇｙｒＡ96ｔｈｉ1ｒｅｌＡ1,载体ｐＧＥＭ3Ｚｆ( )为本室保存;人白细胞ｃＤＮＡ文库购自美国Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司。2.引物设计　克隆血管抑素Ｋ(1～3)Ｎ端功能区的引物如下,在其末端引入ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点,引物由上海生物工程公司合成。…     

血管内皮生长因子_(165)反义RNA治疗人脑胶质瘤的实验研究

目的　探讨应用血管内皮生长因子165(VEGF165)反义RNA治疗人脑胶质瘤的可行性。方法　构建和鉴定反义VEGF165真核表达载体 ;将其转染入人脑胶质瘤细胞SHG44 ,检测其转染前、后的生物学性状 ;比较转染前、后SHG44细胞的裸鼠皮下致瘤性 ;分别应用免疫印迹、免疫组织化学、微血管计数、电镜和流式细胞仪检测上述改变。结果　成功构建反义VEGF165真核表达载体并在SHG44细胞获得表达 ,该细胞生物学性状不受外源基因表达影响 ,其在裸鼠皮下致瘤性和血管生成能力明显下降。肿瘤终体积 :实验组 2 12mm3,对照组 7897mm3(P <0 .0 1) ;血管计数 :实验组 5 .5 0 ,对照组11 2 2 (P <0 .0 1)。结论　VEGF165反义RNA能有效抑制人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长 ,为基因治疗实体瘤奠定了基础     

人内皮抑素基因的克隆与表达及其抑瘤作用的实验研究

目的 克隆人内皮抑素基因,检测其表达蛋白的生物学活性,应用该蛋白治疗裸鼠皮下人脑胶质瘤。方法 从人肝组织提取mRNA,用反转录聚合酶链反应技术克隆人内皮抑素基因,将其重组人pUC19,双氰末端终止法测定其核苷酸序列。构建非融合表达载体pDH-endo,使其在DH5α内经温度诱导表达,纯化该表达蛋白并用鸡胚绒毛膜尿囊膜实验和内皮细胞抑制实验检测其活性。经荷瘤裸鼠皮下注射该蛋白治疗人脑胶质瘤。结果 成功获得551bp的人内皮抑素基因,测序正确。该诱导表达蛋白分子量为20000,具有抑制血管生成活性。该蛋白每天5、10或20mg/kg裸鼠皮下注射可抑制荷瘤裸鼠皮下人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长（抑瘤率分别为34．5％,76．1％和80．2％）。结论 人内皮抑素基因和表达和初步应用,为采用抗血管生成方法治疗脑胶质瘤等实体瘤研究奠定了实验基础。