绿色荧光蛋白转染胶质瘤细胞的体内实验研究

 目的　利用体外转染绿色荧光蛋白 (Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因的胶质瘤细胞建立大鼠移植模型 ,并探索利用该模型研究肿瘤体内侵袭的可行性。方法　携有EGFP基因的 p EGFP- N3质粒体外转染 C6胶质瘤细胞 ,筛选稳定表达 GFP的细胞克隆并以立体定向法植入 SD大鼠脑实质内建立肿瘤移植模型。 4周后处死大鼠并制作连续石蜡切片 ,相邻切片分别作 HE、免疫组化染色和荧光显微镜检测。结果　GFP于体内稳定表达 ,在荧光显微镜下可较容易区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞 ,并能检测到侵袭至远端的单个肿瘤细胞 ,其检测效率明显高于HE和免疫组化染色。结论　EGFP基因体外转染 C6胶质瘤细胞并建立大鼠脑内肿瘤移植模型 ,是研究胶质瘤体内侵袭的有效模型和方法。     

整合素β1 基因在人脑胶质瘤中的表达与临床意义

 目的　检测脑胶质瘤中整合素 β1基因表达 ,阐明其临床意义。方法　应用免疫组化和原位杂交法 ,分析 53例人脑胶质瘤整合素 β1基因表达 ,对患者随访并比较其预后。结果　整合素β1蛋白阳性率 ,在 ～ 级脑胶质瘤分别为 36.3%、38.5%、72 .2 %和 81 .8% ,高级别 ( ～ )高于低级别 ( ～ ) (P<0 .0 5) ,其 m RNA表达同其蛋白表达。高表达整合素β1的患者预后较差。结论　整合素β1的高表达与脑胶质瘤分化程度低、侵袭性强密切相关 ,是预测患者预后的较好标示物。     

SIGNIFICANCE OF THE EXPRESSION OF GREEN FLUORESCENT PROTEIN ON DETECTION OF GLIOMA INVASION IN VIVO

The study on biological character of glioma is rapidly expanding day by day. However, there are some shortcomings in present experimental model and examination methods in vivo, which could not easily permit the visualization of tumor invasion, especially for the single invasive tumor cell. Identification of small numbers or individual invading tumor cells against background of host CNS cells may be impossible by standard HE staining. The deficiency of specific antibody against glioma cell de…     

血管抑素K(1～3)基因片段的克隆与序列测定

我们用自己设计的一对引物,应用ＰＣＲ法成功获得血管抑素(ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ)Ｋ(1～3)基因片段,为进一步研究其表达和实体瘤抗血管生成治疗创造条件,现将结果报道如下。一、材料和方法1.菌种、载体及模板:大肠杆菌Ｅ.ＣｏｌｉＤＨ5α,基因型ｓｕｐＥ44,ｈｓｄＲ17ｒｅｃＡｌｅｎｄＡｌｇｙｒＡ96ｔｈｉ1ｒｅｌＡ1,载体ｐＧＥＭ3Ｚｆ( )为本室保存;人白细胞ｃＤＮＡ文库购自美国Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司。2.引物设计　克隆血管抑素Ｋ(1～3)Ｎ端功能区的引物如下,在其末端引入ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点,引物由上海生物工程公司合成。…     

颅脑损伤标准大骨瓣减压术后并发硬膜下积液(附28例分析)

目的探讨颅脑损伤标准大骨瓣减压术后并发硬膜下积液的原因和防治方法。方法回顾性分析28例颅脑损伤标准大骨瓣减压术后并发硬膜下积液患者的临床资料,其中18例采用单纯骨窗加压包扎,3例行局部穿刺后骨窗加压,2例行置管持续引流术,5例保守治疗（3例有效,另2例保守治疗后行积液腔-腹腔分流术）。结果治疗后28例积液均消失。出院后随访8～24个月,无复发病例。治疗后6个月GOS评分：恢复良好14例,中残7例,重残5例,植物生存2例。结论硬膜下积液是颅脑损伤标准大骨瓣减压术后常见并发症,影响患者功能恢复,早预防、早发现和早治疗可取得满意的效果。     

人内皮抑素基因的克隆与表达及其抑瘤作用的实验研究

目的 克隆人内皮抑素基因,检测其表达蛋白的生物学活性,应用该蛋白治疗裸鼠皮下人脑胶质瘤。方法 从人肝组织提取mRNA,用反转录聚合酶链反应技术克隆人内皮抑素基因,将其重组人pUC19,双氰末端终止法测定其核苷酸序列。构建非融合表达载体pDH-endo,使其在DH5α内经温度诱导表达,纯化该表达蛋白并用鸡胚绒毛膜尿囊膜实验和内皮细胞抑制实验检测其活性。经荷瘤裸鼠皮下注射该蛋白治疗人脑胶质瘤。结果 成功获得551bp的人内皮抑素基因,测序正确。该诱导表达蛋白分子量为20000,具有抑制血管生成活性。该蛋白每天5、10或20mg/kg裸鼠皮下注射可抑制荷瘤裸鼠皮下人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长（抑瘤率分别为34．5％,76．1％和80．2％）。结论 人内皮抑素基因和表达和初步应用,为采用抗血管生成方法治疗脑胶质瘤等实体瘤研究奠定了实验基础。     

血管内皮生长因子_(165)反义RNA治疗人脑胶质瘤的实验研究

目的　探讨应用血管内皮生长因子165(VEGF165)反义RNA治疗人脑胶质瘤的可行性。方法　构建和鉴定反义VEGF165真核表达载体 ;将其转染入人脑胶质瘤细胞SHG44 ,检测其转染前、后的生物学性状 ;比较转染前、后SHG44细胞的裸鼠皮下致瘤性 ;分别应用免疫印迹、免疫组织化学、微血管计数、电镜和流式细胞仪检测上述改变。结果　成功构建反义VEGF165真核表达载体并在SHG44细胞获得表达 ,该细胞生物学性状不受外源基因表达影响 ,其在裸鼠皮下致瘤性和血管生成能力明显下降。肿瘤终体积 :实验组 2 12mm3,对照组 7897mm3(P <0 .0 1) ;血管计数 :实验组 5 .5 0 ,对照组11 2 2 (P <0 .0 1)。结论　VEGF165反义RNA能有效抑制人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长 ,为基因治疗实体瘤奠定了基础     

经颅多普勒对原发性脑出血病人脑血流的监测

目的探讨经颅多普勒(transcranial doppler,TCD)对原发性脑出血(primary intracerebral hemorrhage,PICH)病人脑血流量和颅内压的监测作用。方法回顾性分析80例CT确诊PICH病例资料,采用TCD监测大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)血流动力学指标和血流频谱变化。结果与自身健侧比较,出血后3 d、7 d、21 d出血侧搏动指数(pulsatility index,PI)明显升高(P0.05)。当PI1.0,阻力指数(resistance index,RI)0.6时,应考虑颅内压升高。结论 TCD血流频谱可作为监测颅内压辅助指标,采用TCD监测PICH病人脑血流变化,部分参数与颅内压有一定相关性,可间接了解颅内压改变,是临床治疗和预后评估的重要参考依据。     

联合应用angiostatinK(1-3)和endostatin裸DNA对人脑胶质瘤生长的抑制作用

目的 :探讨联合应用angiostatinK(1 3) {ASK(1 3) }和endostatin(ES)裸DNA对人脑胶质瘤生长的影响和作用特点 .方法 :在 1 5只裸鼠皮下接种SHG4 4人脑胶质瘤细胞并分A ,B和C组 (n =5 ) ;在接种后第 1 2日 ,A组 :给予瘤体内注射 2 0 μL脂质体包裹的各 5 μg的 pcDNA S ASK (1 3)和pcDNA S ES质粒 ;B组 :瘤体内注射 2 0 μL脂质体包裹的 1 0μgpcDNA 3.1质粒 ;C组 :瘤体内注射 2 0 μL无菌生理盐水 ;3d后重复注射 1次 .每日定时观察肿瘤生长情况 .4 0d后处死裸鼠 ,检测和计算肿瘤体积、坏死率、血管数和抑瘤率 .结果 :A ,B和C组肿瘤的终体积分别是 4 .4 1 6± 1 .88cm3 ,8.0 34± 1 .85cm3 和 8.0 5 6± 1 .91cm3 ,A组抑瘤率为 4 6 .8% ;A ,B和C组肿瘤的平均坏死率分别为 39.1 2± 7.35 % ,9.1 7± 7.89%和 9.2 1± 7.4 8% ,A与B或C组比较差异显著 (P <0 .0 1 ) ,B ,C组比较差异不显著 (P >0 .0 5 ) .3组的血管计数分别为 3.92± 1 .89,1 1 .8± 2 .0 4和 1 2 .0± 2 .2 1 ,A与B或C组比较差异显著 (P <0 .0 1 ) ,B ,C组比较差异不显著 (P >0 .0 5 ) .结论 :联合应用ASK(1 3)和ES裸DNA可抑制胶质瘤的血管生成、导致其坏死增加 ,进而抑制肿瘤生长 .其作用机制有待深入研究 ,该实验为胶质瘤的抗血管生成     

神经导航显微手术切除颅内肿瘤

目的探讨应用神经导航辅助显微外科手术切除颅内肿瘤的作用方法采用VectorVision神经导航系统、以显微外科技术切除215例颅内肿瘤,分析导航定位的准确性及与疗效的关系结果215例颅内肿瘤,全切除209例(97.2%)、次全切除6例(2.8%)。出院时患者症状明显改善186例(86.5%)、无明显变化27例(12.6%),死亡2例(0.9%)应用VectorVision的注册准确性为(1.95±0.54)mm,持续准确性为(0.65±0.32)mm。结论使用VectorVision神经导航系统,在术前可制定详细的颅内肿瘤手术计划,术中可辅助显微手术动态地追踪瘤体,手术定位准确、可靠,有利于颅内肿瘤的全切除并降低手术并发症。