RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究

目的：通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸（siRNA）表达载体，鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系U87细胞中对MAGE．1基因表达的干涉作用。方法：化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE—1基因寡核苷酸链，克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上，重组构建核糖核酸干扰（RNAi）质粒载体。利用RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜，检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达，以了解siRNA的干涉效果。结果：重组构建的pSUPER—MAGE—1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析，表明寡核苷酸链成功地插入至预计位点，且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达经RT—PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测，2对siRNA均有较明显的干扰作用。结论：载体的成功构建并能对U87细胞中的MAGE—1分子进行RNAi，为进一步研究MAGE—1在肿瘤中的作用，分析基因功能，展开肿瘤基因治疗奠定了基础。     

白藜芦醇抑制胶质瘤细胞生长与诱导细胞凋亡实验研究

目的探讨白藜芦醇(Res)对脑胶质瘤细胞(C6细胞株)和正常成纤维细胞(3T3细胞株)体外增殖的影响,进而观察Res诱导C6和3T3细胞系的凋亡作用.方法用不同浓度的Res处理C6和3T3细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Res对C6和3T3细胞的增殖作用,通过HE染色、扫描电子显微镜(SEM)、原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪Annexin Ⅴ荧光染色,观察细胞的形态学结构改变,并定量检测细胞凋亡.结果 Res抑制了C6细胞的生长与增殖( P < 0.01 ),呈浓度依赖性反应;Res能明显诱导C6细胞凋亡,经210 μmol/L、120 μmol/L Res处理24 h后及对照组的C6细胞,其凋亡率分别为29.7%、14.6%及2.1%;相应的3T3细胞凋亡率分别为4.3%、3.5%、2.6%. 结论 Res能通过诱导C6细胞凋亡而抑制其生长与增殖,但对3T3细胞无此作用.本研究为临床应用Res治疗脑胶质细胞瘤提供了实验依据.     

小鼠内皮抑素基因真核表达载体的构建和表达

目的 构建小鼠内皮抑素（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）ｃＤＮＡ的真核表达载体并将其在体外培养的脑胶质瘤细胞内表达。方法 将带有分泌信号的小鼠ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ克隆入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３,构建ＣＭＶ启动子控制的载体ｐｃＤＮＡ－ｓＥｎｄｏ,并将上述载体转染体外培养的脑胶质瘤细胞（ＳＨＧ４４）,采用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定其表达,应艇牛微血管内皮细胞抑制实验检测其活性,结果 成功地构建了真核表达     

裸小鼠皮下人脑胶质瘤模型的建立与观察

为建立裸小鼠皮下人脑胶质瘤模型,体外培养SHG44人脑胶质瘤细胞,用无血清1640培养液洗涤和离心两次,行活细胞计数后以甲氧氟烷吸入方式麻醉裸小鼠,分别将50μl含1,2,3×10~6个SHG44细胞的无血清悬液注入各组裸小鼠右腿上部皮下,现察SHG44细胞裸小鼠皮下致瘤性并计算肿瘤大小。30d后处死裸小鼠,取其肝、肺和皮下肿瘤组织,进行HE染色和电镜检查,确定肿瘤本质和有无肿瘤转移,比较各组裸小鼠肿瘤生长特点。研究结果表明建立裸鼠皮下人脑胶质瘤模型,以2×10~6个SHG44细胞接种效果较理想,未发现肿瘤远处转移。所建裸小鼠皮下人脑胶质瘤模型为人脑胶质瘤化疗、放疗和基因治疗等相关研究奠定了基础。     

靶向Survivin基因的短发卡RNA在体内对U251细胞移植瘤的影响

Surivin基因属于凋死蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis,IAP）家族，具有抗细胞凋亡、促细胞增殖和促血管形成等多种生物学活性，其在脑胶质瘤发生和发展过程中的作用尚不完全明确，本研究结盟在观察稳定转染靶向Survivin基因的特异性短发卡RNA（shRNA）真核表达载体对人脑胶质母细胞瘤U251细胞裸鼠体内肿瘤生长和血管形成的影响。方法：将U251细胞，稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWHI-SR的U251-SR细胞，以及稳定转染空载体pWHI的U251-P细胞，分别接种于裸鼠背部皮下，建立人脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型，定期观察肿瘤生长情况，测定肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线，观察45天后处死动物、称瘤重，采用免疫组化SABC法检测Survivin、增殖细胞核抗原（proliferating cell muclear antigen，PCNA）以及八因子相关抗原（factor Ⅷ related antigen,FⅧRAg）在各组肿瘤标本中的表达，采用TUNEL法检测凋亡细胞，分别计算各组肿瘤标本的增殖指数（proliferative index,PI），凋亡指数（apoptotie index,AI）以及微血管密度（microvessel density,MVD）。结果：与U251、U251-SR组肿瘤标本，U251-SR组裸鼠肿瘤形成时间延迟，肿瘤生长缓慢，肿瘤体积及瘤重均明显减小（P〈0.01）；U251-P组裸鼠相丝，U251-SR组肿瘤标本Survivin蛋白表达明显下调：PI和MVD明显减少，AI明显升高（P〈0.001）。结论：靶向Survivin基因的sbRNA能够在体内明显抑制U251细胞的肿瘤生长和血管形成，Survivn基因可作为脑胶质瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference,RNAi）技术可为脑胶瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference，RNAi）技术可为脑胶质瘤的基因治疗提供新的重点手段。     

神经内镜与显微手术切除前、中颅底肿瘤

目的探讨神经内镜与显微神经外科技术在切除前、中颅底肿瘤中的意义和手术方法。方法应用神经内镜辅助的显微神经外科技术切除前、中颅底肿瘤89例,其中包括颅眶沟通瘤9例、颅鼻沟通瘤7例、颅眶鼻沟通瘤6例。在显微镜下尽可能切除可见的肿瘤部分,再用神经内镜寻找残余的肿瘤并切除。结果在常规显微神经外科切除肿瘤后,仍有不同程度的残余肿瘤,在内镜下进一步切除,80例(89.9%)肿瘤达全切除,6例(6.7%)获次全切除,3例(3.4%)为部分切除,无手术死亡。结论神经内镜辅助与显微神经外科技术切除前、中颅底肿瘤有助于提高肿瘤全切率,减少手术创伤。     

创伤性颈动脉海绵窦瘘的可脱性球囊栓塞治疗技术

目的探讨创伤性颈动脉海绵窦瘘的临床表现和血管内介入栓塞治疗效果。方法回顾性分析本组共32例创伤性颈动脉海绵窦瘘的临床表现,采用可脱性球囊微导管技术经股动脉途径闭塞颈内动脉破口处或破口处患侧颈内动脉主干。结果28例一次性治愈;4例术后16~48h因球囊发生早泄移位复发,经再次以可脱性球囊栓塞后治愈。本组有28例(87.5%)闭塞了瘘口,颈内动脉主干保持通畅;4例同时闭塞了瘘口及颈内动脉主干。27例获随访(术后6个月~5.2年),无复发。结论采用可脱性球囊栓塞技术是治疗创伤性颈动脉海绵窦瘘的首选方法。     

颅脑损伤多发性颅内血肿的临床研究

目的探讨颅脑外伤后多发性颅内血肿的临床特点、早期诊断及防治措施。方法回顾性分析152例外伤性多发性颅内血肿的病例资料。GCS 13-15分25例,9-12分46例,6-8分39例,3-5分42例。结果手术123例,非手术29例。随访12周,GOS5分（恢复良好）93例（61.2%）,4分（轻残）18例（11.8%）,3分（重残）22例（14.5%）,2分（植物状态）7例（4.6%）,1分（死亡）12例（7.9%）。死亡原因为多器官功能衰竭、脑干功能衰竭、颅内感染和肺部感染等。结论提高诊断意识、加强临床监测和动态CT扫描有助于多发性颅内血肿的早期诊断和治疗,并改善预后。     

小鼠内皮抑素基因的克隆、表达及其抑瘤效应研究

克隆小鼠内皮抑素（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）基因,检测其表达蛋白的生物学活性,应用该蛋白治疗大鼠Ｃ６脑胶质瘤。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ法,从小鼠肝组织克隆ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ基因,重组入ｐＵＣ１９,测序后构建非融合表达载体ｐＢＶ２２０－ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ,使其在ＤＨ５α内经温度诱导表达,纯经ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ蛋白并用鸡胚绒毛膜尿囊膜实验和内皮细胞抑制实验检测其活性,经荷Ｃ６胶质瘤大鼠皮下注射该蛋白,     

人骨形成蛋白-2对人脑胶质瘤细胞增殖细胞周期的影响及其抑瘤作用

本研究旨在观察人骨形成蛋白(ＢＭＰ) 2对人脑胶质瘤细胞增殖、细胞周期的影响及其抑瘤作用 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :人脑胶质瘤细胞系ＳＨＧ 44由本所保存。 18只ＢＡＬＢ/Ｃ胸腺缺陷裸小鼠 ,4～ 6周龄 ,体重 (18± 2 )ｇ ,购自本校动物实验中心。重组人骨形成蛋白 2 (ｒｈＢＭＰ 2 )由本校生物化学教研室蒲勤博士提供 ,16 40培养基及胰蛋白酶购自Ｇｉｂｃｏ公司。四甲基唑蓝 (ＭＴＴ)及二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)购自华美生物公司。2 .细胞培养 :参照司徒镇强[1] 方法。3.ＭＴＴ实验 :以 5× 10 3 个对数生长期细胞接种于…