特发性血小板减少性紫癜患者IgG酶切片段F(ab'')2的免疫活性及其对血小板聚集功能的影响

目的制备特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者血浆IgG及其酶切片段，探讨其与血小板GPⅡb／Ⅲa和（或）GPⅠb／Ⅸ结合的免疫活性及其对正常人血小板聚集功能的影响。方法用改良MAIPA法和比浊法血小板聚集试验筛选出自身抗体阳性并且能抑制血小板聚集的患者，用蛋白A柱纯化其血浆IgG抗体并用胃蛋白酶制备F（ab’）2片段，改良单克隆抗体俘获血小板抗原技术（MAIPA）检测完整抗体及其酶切片段与血小板膜糖蛋白的结合活性；比浊法血小板聚集试验对比观察ITP患者血浆、纯化的IgG抗体及其酶切片段对正常人血小板聚集功能的影响。结果①68例慢性ITP患者中，34例（53．6％）血浆中抗GPⅡb／Ⅲa和（或）GPⅠb／Ⅸ自身抗体阳性，其中5例（14．7％）明显抑制了二磷酸腺苷（ADP）或瑞斯托霉素对血小板聚集的诱导作用；②用蛋白A柱结合蛋白酶酶切成功获得了纯化的IgG及F（ab’）2片段；③患者纯化的IgG及F（ab’）2片段均具有抗GPⅡb／Ⅲg或GPⅠb／Ⅸ活性，但去除IgG的血浆丧失了与GPⅡb／Ⅲa或GPⅠb／Ⅸ的结合活性；④2例患者纯化的IgG及其F（ab＇）2片段抑制ADP诱导的血小板聚集。结论F（ab’）2片段是IgG自身抗体的功能片段，它不但保留了良好的抗原结合活性并可抑制血小板聚集功能，其抑制聚集作用呈剂量依赖性。     

人胆囊癌裸鼠原位移植瘤模型的建立及初步观察

胆囊癌恶性程度较高，临床预后较差。为了寻找一种能更接近人体内胆囊癌特性的动物模型，我们通过瘤组织块原位接种建立了裸小鼠的胆囊癌原位移植瘤模型，现报告如下。     

CD137L基因转染对小鼠体内卵巢癌细胞生长的影响及其免疫调节研究

目的:初步探讨转染CD137L基因的小鼠卵巢癌细胞株OVHM细胞体内的致瘤性及其对免疫功能的影响。方法:以脂质体为载体将重组质粒pcDNA3.1和pcD-NA3.1/CD137LL分别导入OVHM细胞中,经HygroB筛选,用RT-PCR法检测目的基因的表达,筛选建立高表达的细胞株。计数法绘制体外培养细胞生长曲线。将转染前后的肿瘤细胞,分别接种于B6C3F1小鼠的腹部皮下观察其致瘤性。LDH法测定其CTL细胞的杀伤活性。结果:与野生型OVHM细胞相比,所建立的OVHM/CD137L细胞株可高表达CD137L。转染前后肿瘤细胞的体外生长速度无明显变化。OVHM/CD137L细胞在小鼠体内的致瘤性较OVHM/pcDNA3.1细胞和野生型OVHM细胞明显降低。接种OVHM/CD137L细胞小鼠的CTL细胞杀伤活性明显增强。结论:转染CD137L基因后OVHM细胞在小鼠体内的致瘤性显著降低,且诱导产生了明显的抗肿瘤免疫。CD137L有望成为卵巢癌基因治疗的候选基因。     

VP22增强慢病毒介导的自杀基因治疗抑制人卵巢癌裸鼠腹腔种植瘤生长的研究

目的:探讨单纯疱疹病毒壳膜蛋白VP22的细胞间传递作用促进HSV-TK/GCV(单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦)系统对卵巢癌腹腔移植瘤的杀伤效应。方法:将慢病毒包装质粒、包膜质粒、转移载体质粒采用磷酸钙沉淀法共转染包装细胞293T,收集病毒上清,并建立人上皮性卵巢癌(3AO)细胞株腹腔移植瘤模型。单药组分为TK+生理盐水(NS)组、VP22-TK+NS组、NS+NS组,分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK或NS1ml,继而腹腔注射NS;联合用药组分为TK+GCV组、VP22-TK+GCV组、NS+GCV组分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK及NS,24h后腹腔注射GCV治疗。每组裸小鼠均为5只。观察各组裸鼠的生存时间及慢病毒的毒性作用。结果:平均生存时间TK+NS组、VP2-TK+NS组、NS+NS组、NS+GCV组、TK+GCV组、VP2-TK+GCV组分别为18.3±2.7d、18.4±1.9d,17.2±1.3d、18.7±1.9d、21±4d和46±22d,6组差异有显著性(χ2=24.81,P=0.002);并且VP2-TK+GCV组平均生存时间较TK+GCV组裸鼠明显延长(χ2=7.42,P=0.006)。结论:VP22介导的自杀基因产物的细胞间扩散作用可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应。     

紫杉醇奥曲肽偶合物对A549裸鼠移植瘤的靶向治疗研究

目的 研究生长抑素类似物奥曲肽(OCT)与紫杉醇(FTX)的偶合物对人肺腺癌细胞株A549裸鼠移植瘤的靶向治疗作用.方法 构建1分子紫杉醇-1分子奥曲肽偶合物(PTX-OCT)和2分子紫杉醇-1分子奥曲肽偶合物(2PTX-OCT),建立裸鼠腋部皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为8组.在l、7、21 d尾静脉分别注射150 nmol/kg PTX-OCT;2FTX-OCT;OCT、PTX混合物(OP);OCT;PTX;300 nmol/kg PTX(2PTX)和2PTX-OCT[2(2PTX-OCT)].测各组小鼠体重及肿瘤体积;计算肿瘤倍增时间;眼内眦静脉取血测每组小鼠白细胞数量;组织切片HE染色及核仁区银染(AgNOR)观察肿瘤细胞生长情况;DNA梯度法检测细胞凋亡;RT-PCR法测肿瘤细胞生长抑素受体(SSTR)1至5亚型(SSTRI-SSTR5)mRNA表达情况;免疫组化SP法检测肿瘤微血管密度(MVD)以及生长抑素受体2和5亚型表达情况.结果 2PTX-OCT与2(2PTX-OCT)处理组在3次给药后与对照组相比:肿瘤生长显著抑制(均P<0.01);肿瘤倍增时间延长(均P<0.01).PTX与2PTX-OCT处理组相比,在每次给药后5 d裸鼠体重减轻差异有统计学意义(P<0.05);PTX与2PTX组的白细胞总数在26 d降到最低,与对照组、2PTX-OCT组及2(2VTX-OCT)组相比差异均有统计学意义(均P<0.05).2PTX.OCT组及2(2PTX-OCT)组MVD均明显少于对照组(均P相似文献   

小剂量金喜素与顺铂、VP16及5-FU对人卵巢癌细胞株生长抑制作用的实验研究

目的 :探讨小剂量国产盐酸拓扑替康 (金喜素 )与顺铂 (cDDP)、足叶乙甙(VP16 )及 5 -氟尿嘧啶 (5 -FU)对人卵巢癌细胞株 3AO细胞生长抑制的作用。方法 :采用MTT法观察上述药物单用及联合使用对 3AO细胞生长的影响 ,并评价药物的联合作用。结果 :相当于临床用药浓度的金喜素 (80 0ng/ml)及其半量浓度 (40 0ng/ml)与cDDP、5 -FU或VP16联合应用对 3AO细胞具有显著的协同生长抑制作用 ,较各药单用组抑制率显著提高。半量金喜素联用即可达到全量联用时的抑制效果。结论 :小剂量金喜素与cDDP、5-FU或VP16具有协同抑制 3AO细胞生长的作用 ,可为临床小剂量应用提供参考     

p53基因转染对卵巢癌MDR细胞药物敏感性及恶性表型的影响

研究 ｐ５３基因导入已知内源背景的肿瘤 ＭＤＲ细胞所致的恶性表型和ＭＤＲ表型的改变及两者的关系。方法：用磷酸钙沉淀法将含有野生型及全长反义 ｐ５３ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＤＷｐ５３及 ｐＤＡｐ５３转染病毒包装细胞 ＰＡ３１７,测定病毒滴度。用此病毒感染卵巢癌多药耐药细胞株Ａ２７８０／ＡＤＭ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ鉴定,检测转导基因后细胞株的恶性度、多药耐药性等情况。结果：野生型及反义全长ｐ５３ｃＤＮＡ均转入 ＰＡ３１７细胞获得效价为（１－ １．５） Ｘ１０５ＣＦＵ／ｍｌ的前病毒,以此感染卵巢癌多药耐药细胞株Ａ２７８０／ＡＤＭ,Ｓｏｕｔｈｅｍ Ｂｌｏｔ证实ｐ５３基因导入该细胞并整合到基因组ＤＮＡ中,进一步测试观察到：①导入野生型ｐ５３基因的Ａ２７８０／ＡＤＭ细胞生长被抑制、恶性度降低,细胞形态和生长曲线改变,软琼脂集落形成率及裸鼠接种成瘤率降低;②细胞多药耐药性减弱,对ＡＤＭ耐药性下降,Ｐ－ｇｐ表达降低;③反义ｐ５３的导入也对Ａ２７８０／ＡＤＭ恶性度有一定的影响;④野生型ｐ５３导致的ＭＤＲ细胞恶性表型与ＭＤＲ水平的降低似有平行关系。结论：ｐ５３基因对肿瘤细胞ｍｄｒ－ １基因的表达可能起调控作用,ｐ５３发生突变的 Ｍ?     

四种Notch配体信号功能活性比较

目的 观察四种Notch配体的功能活性．探讨其在Notch信号传导机制中的作用。方法以Notch1—CHO和Notch2—CHO作为宿主细胞，瞬时转染报告质粒TP1，分别加入转染有不同Notch配体Delta1、Jagged1、Jagged2、Delta4的CHO细胞及未转染CHO细胞，使Notch分子与其配体充分结合，加入发光底物PGL100，用Lumat测定发光情况，由此观察并比较各配体对上述两种宿主细胞的信号功能活性水平。结果 各配体与Notch1结合后均能引起荧光素酶活性增高，尤其以Jagged2—CHO、Delta4—CHO1—4、Delta4—CHO1—5为著，而Deltal—CHO、Jagged1—CHO引起的活性增加程度较低，尚不能确定其信号功能活性；各配体与Notch2结合后都有较高的信号功能活性，其反应强于与Notch1的作用。结论 4种配体与Notch2作用后均能使荧光素酶活性增加多倍，故有较强的信号功能活性。     

慢病毒介导的双自杀基因对T淋巴细胞杀伤作用的实验研究

目的:探讨慢病毒介导的双自杀基因对T淋巴细胞的杀伤作用。方法:在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMVΔ8.2、包膜基因pCMV.VSVG、目的基因pHR'CS.GFP或pHR'CS.CDglytk导入病毒包装细胞293T,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩后转染T淋巴细胞,荧光显微镜及RT-PCR检测基因的整合及表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或无环鸟苷(GCV)后,MTT法测定细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞。对照组荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光,透射电镜下观察可见许多病毒颗粒。慢病毒介导的双自杀基因在T淋巴细胞中高效、稳定表达,单独使用GCV或5-FC对T细胞/CD+tk的存活率与未转染T细胞比较明显降低(P<0.01),与单独使用5-FC或GCV比较,联合使用5-FC和GCV时T细胞的存活率明显降低(P<0.01)。结论:慢病毒介导的双自杀基因可高效稳定转染T淋巴细胞,双自杀基因系统较单一自杀基因系统(CD/5-FC或HSV-tk/GCV)对T淋巴细胞的杀伤具有明显增强作用。     

树突细胞应用于荷白血病小鼠免疫治疗的实验研究

目的探讨白血病抗原活化的树突细胞(DC)应用于荷白血病小鼠异基因骨髓移植 (allo-BMT)后免疫治疗的可行性及有效性。方法应用mGM-CSF及mIl-4从小鼠骨髓细胞扩增出成熟DC,使其负载经冻融法制备的L7212白血病细胞相关抗原。将进行allo-BMT后的荷白血病小鼠分 A(对照组)、B(T细胞组)、C(DC T细胞组)三组进行免疫治疗,观察小鼠生存率、生存期、移植物抗宿主病(GVHD)发生等情况及血清细胞因子水平和脾细胞细胞毒活力变化。对各组长期生存小鼠行二次攻击,以观察其体内抗白血病免疫能力。结果小鼠骨髓单个核细胞经mGM-CSF、mIL-4联合作用7 d可生成大量成熟DC。B、C二组复发率分别为30％及0％,移植后长期生存率分别为30％及 70％,两组差异均有统计学意义(P<0．05),而GVHD发生率差异无统计学意义。两组平均生存时间分别为(32．95±13．29)d、(41．15±13．88)d,差异有统计学意义(P<0．01)。MYT法检测发现C组小鼠脾细胞对L7212细胞产生特异性杀伤作用;EIJSA法检测显示血清中Th1类因子IL-2水平为 (419．75±26．66)pg／ml,明显高于其他两组(P<0．01)。二次攻击后B、C二组生存率分别为33．3％及85．7％,差异有统计学意义(P<0．05)。结论肿瘤抗原负载的DC联合供者淋巴细胞输注是增强 allo-BMT后移植物抗白血病效应、减少白血病复发的有效手段。