CD133在实体肿瘤干细胞研究中的作用

肿瘤干细胞理论的提出使靶向性杀伤肿瘤干细胞成为可能,而肿瘤干细胞的研究关键是寻找特异性表面分子标志物。表面黏附分子CD133是一种跨膜糖蛋白,其表达的一个显著特点就是,随着细胞的分化迅速下调,这使得它成为一个分离和鉴定干细胞和祖细胞的独特分子标志。作为理想的分子标志,CD133在脑肿瘤、前列腺癌、结肠癌、喉癌和肝癌等多种实体肿瘤干细胞分离研究中发挥着重要作用。多种实验证实,CD133^＋细胞与肿瘤信号转导、肿瘤免疫逃逸、药物耐受和放疗抵抗均有相关性,CD133^＋细胞可望成为肿瘤治疗的新靶点。     

CDglyTK自杀基因系统治疗小鼠慢性粒细胞白血病皮下移植瘤的研究

为了探讨逆转录病毒介导的CDglyTK自杀基因系统时K562细胞的体内外杀伤作用，将逆转录病毒介导的CDglyTK自杀基因转染入K562细胞，体外实验用MTT法观察5-氟胞嘧彰丙氧鸟苷（5-fluorocytosine／ganciclovir，5-FC／GCV）时K562／CDglyTK细胞的生长抑制率。体内实验时将K562／CDglyTK细胞和K562细胞接种于裸鼠皮下，使用GCV和5-FC后，观察裸鼠肿瘤体积的变化及裸鼠的生存率。体外实验表明，GCV联合5-FC时K562／CDglyTK细胞具有明显的杀伤作用；体内实验结果显示，皮下注射K562细胞和K562／CDglyTK细胞后小鼠成瘤率无明显区别；使用5-FC／GCV可明显抑制裸鼠体内的肿瘤形成；经5-FC／GCV治疗后K562／CDglyTK组的肿瘤体积较对照组明显缩小，裸鼠生存率也较时照组明显提高。结论：双自杀基因在体内外对K562细胞均有杀伤作用。     

联合转染mdrl和mcll基因短发夹RNA干扰表达质粒逆转K562/A02细胞耐药的实验研究

目的构建针对 mdrl 和 mell 基因的短发夹 RNA(shRNA)干扰表达质粒,并探讨联合转染对 K562/A02细胞耐药的逆转作用。方法根据 mdrl 和 mell 基因表达序列设计有效的 RNA 干扰片段,分别将其构建入质粒表达空载体中,以获得两种基因特异性 shRNA 干扰表达质粒;然后在脂质体介导下分别和联合转染 K562/A02细胞,用 G418和(或)Hygro B 筛选出稳定表达的细胞克隆。用RT-PCR 分析 mdrl 和 mcll mRNA 的表达;MTT 法检测阿霉素对 K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC_(50));流式细胞术测定细胞 P-糖蛋白表达水平以及细胞凋亡率。结果成功构建两个基因的 shRNA干扰表达质粒。mdrl、mell shRNA 干扰表达质粒单独和联合转染 K562/A02细胞可有效封闭相应基因表达,联合转染组 mdrl 基因和 mell 基因的 mRNA 相对表达水平分别是未转染细胞的52%,44%。mdrl、mell shRNA 干扰表达质粒单独和联合转染后 K562/A02细胞耐药逆转率分别为63.8%,71.1%,83.1%,转染两种质粒组对 K562/A02细胞耐药逆转率最高,P 糖蛋白相对表达量由未转染组的19.70±1.15降至6.40±0.92(P<0.01),阿霉素诱导的细胞凋亡率由(1.53±0.42)%提高至(7.77±0.42)%(P<0.01)。联合转染两种质粒组和单独转染组比较,细胞对阿霉素敏感性和阿霉素诱导的细胞凋亡率差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论转染 mdrl 或 mell 基因的 shRNA 干扰表达质粒可有效抑制相应基因表达,皆不同程度逆转 K562/A02细胞对阿霉素的耐药性;联合转染两种质粒可显著增加逆转耐药的效果。mell 基因可能与 K562/A02耐药相关。