载脂蛋白AI基因多态性与高脂血症关系的研究

本文利用２．２ｋｂ人ＡＰＯＡＩ基因探针，检测５７例高脂血症儿童及３８例正常血脂儿童的ＡＰＯＡＩ基因限制性片段长度多态性，发现中国上海汉族儿童人群ＡＰＯＡＩ基因存在ＰｓｔＩ多态位点，其等位基因频率Ｐ１为０．９２，Ｐ２为０．０８。并发现Ｐ２多态位点与低高密度脂蛋白血症关系密切（Ｐ＜０，０５），但与单纯高甘油三酯血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症合并高胆固醇血症无相关性。     

促红细胞生成素对Aβ25-35诱导的细胞tau蛋白磷酸化的抑制作用

目的 探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β淀粉样蛋白25-35片断(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化的影响.方法 MTT法观察不同浓度的Epo(0、5、10、20、50 U)单独作用24 h对SH-SY5Y细胞存活率的影响;20 μmol/L的凝聚态Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞不同时间点(0 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h)后,Western blot法检测tau蛋白磷酸化(Ser199、Ser396及taul)水平的变化;观察不同浓度的Epo(5、10、20 U)预处理细胞3 h后对Aβ25-35作用的影响以及P13K/Akt抑制剂LY294002(50μmol/L)预处理细胞1 h后Epo抑制作用受到的影响.结果 不同浓度的Epo作用24 h后,MTT示细胞存活率无明显变化.20 μmol/L的Aβ25-35作用不同时间点后,tau蛋白Ser396、Ser199位点的磷酸化水平3 h时开始增加,6 h达到最高峰,12 h后又逐渐下降,24h时仍维持较高水平,与0min、30min时比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而总的tau蛋白没有任何变化.5、10、20U Epo预处理均可有效地抑制Aβ25-35引起的Ser396、Ser199位点的磷酸化,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).LY294002预处理细胞后,Epo的作用受到抑制.结论 Epo可通过P13K/Akt途径对Aβ25-35诱导的tau蛋白磷酸化发挥抑制作用,本研究为研究AD的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础.     

中性氨基酸对帕金森病发生干预的实验研究

目的探讨中性氨基酸干预帕金森病发生的作用机制.方法分别在应用百草枯建立的帕金森病小鼠模型的前后腹腔注射中性的左旋缬氨酸（L-Val）、左旋苯丙氨酸（L-Phe）、右旋缬氨酸（D-Val）及碱性的左旋赖氨酸（L-Lys）,采用免疫组化、Western印迹法观察小鼠脑黑质部位百草枯沉积以及多巴胺能神经元变性和α-突触核蛋白（α-Syn）聚集的改变.结果在应用百草枯之前注射L-Val、L-Phe,小鼠脑黑质部位百草枯染色明显减弱,多巴胺能神经元变性及a-Syn聚集均明显减少;而在应用百草枯之后注射,则变化不明显.以同样方式注射D-Val及L-Lys,多巴胺能神经元变性及α-Syn聚集改变也不明显.结论L-Val、L-Phe等左旋中性氨基酸具有竞争性抑制百草枯进入中枢神经系统的作用,并且具有结构特异性,对帕金森病的发生可以起到预防性保护作用。     

百草枯诱导小鼠α-突触核蛋白表达升高并聚集的实验研究

目的观察除草剂百草枯诱导小鼠黑质细胞α-突触核蛋白(α—synuclein，α-syn)表达及聚集，探讨环境因素在帕金森病(Parkinsondisease，PD)发病中的作用机制。方法C57BL小鼠按体重10mg／kg经腹腔注射百草枯，应用原位杂交、RT—PCR分析α—syn mRNA表达．免疫组化、免疫荧光双标染色观察黑质区α—syn显色．并进一步确定表达rsyn的神经元表型及α—syn聚集。结果注射百草枯组小鼠黑质区α—syn mRNA表达量升高，rsyn阳性细胞数相对增加；rsyn与硫磺素、酩氨酸羟化酶(tyroxine hydroxylase，TH)及硫磺素复合染色的阳性细胞数均升高。结论百草枯诱导小鼠黑质细胞α—syn表达升高并出现蛋白聚集可能是导致PD发病的机制之一。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25～35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响.方法 人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验.MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20 μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化.运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响.结果 结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P＜0.05);10 U Epo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P＜0.05).Hoechst 33258核染色发现10 U Epo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P＜0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P＜0.05).结论 Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用.本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础.     

注射针头固定转移的肌筋膜皮瓣治疗肉芽创面骨外露25例

各种创伤所引起的四肢软组织缺损,因处理不及时或失当,均会形成肉芽创面伴骨外露,对此以往常要等局部条件好转后再行植皮等治疗。因等待时间较长,创面暴露,并有炎性分泌物浸泡容易引起骨髓炎,骨坏死。临床处理被动。我们自1989年6月至1996年6月采用注射针头固定转移的肌筋膜皮瓣治疗肉芽创面骨外露25例,效果满意,报告如下。1　临床资料1·1　一般资料　本组25例,男18例,女7例。年龄10～61岁,平均286岁。创面位置:小腿16例,踝关节2例,膝关节1例,足3例,上肢3例。肉芽创面骨外露范围:20～180ｃｍ2。手术时间:伤后2周内手术20例,余5例因创面及病…     

neurturin基因转染c17.2神经干细胞移植治疗帕金森病模型大鼠的实验研究

目的探讨neurturin(NTN)基因转染c17.2神经干细胞脑内移植后对帕金森病(PD)大鼠模型的治疗作用,并探讨神经干细胞介导的基因治疗方法的有效性。方法在构建成功高表达NTN蛋白NTN-c17.2细胞克隆的基础上,分别在6-羟多巴胺单侧模型大鼠的纹状体区移植入NTN-c17.2、Mock-c17.2和磷酸缓冲液(PBS),通过免疫组化、旋转行为变化和高效液相色谱监测观察c17.2神经干细胞的分化,NTN基因的表达和NTN蛋白的治疗作用。结果NTN-c17.2细胞移植后,标记抗原巢蛋白(nestin)逐渐消失,细胞分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,但仍持续分泌NTN蛋白。动物模型旋转行为动态观测和高效液相色谱法(HPLC)检测都提示NTN-c17.2和Mock-c17.2好于PBS组,两组之间差异无统计学意义(P>0.05),RT-PCR和免疫组织化学检测提示c1 7.2神经干细胞能产生多种神经营养因子,移植后部分细胞可分化成酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经细胞。结论用带有NTN基因的神经干细胞移植治疗PD,显示出一定的治疗效果,然而,这种治疗作用主要和神经干细胞分泌的多种神经营养因子和移植后的细胞分化有关,NTN蛋白可以增强这种作用。     

成年大鼠脑内ATP敏感性钾通道亚型mRNA表达的研究

为探讨ATP敏感性钾通道(KATP)亚型在大鼠脑组织中的表达,本研究采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测了大鼠小脑、大脑皮质、海马、纹状体、黑质的KATP亚型mRNA的表达。结果显示Kir6. 1、Kir6. 2、Sur1、Sur2B在小脑、大脑皮质、海马、纹状体、黑质中均有表达,Sur2A在脑组织中未见表达。Kir6. 1mRNA在海马和黑质的相对表达水平明显高于小脑、大脑皮质和纹状体(P<0.01);Kir6. 2和Sur1mRNA在黑质的相对表达水平明显高于小脑、大脑皮质、海马和纹状体 (P<0.01 );Sur2BmRNA在黑质、海马和纹状体的相对表达水平明显高于小脑和大脑皮质(P<0.01 )。以上结果提示KATP在脑内具有广泛表达,其表达水平在不同部位存在着差异性。     

Neurturin基因的克隆及其在C17.2神经干细胞中表达的研究

目的 探讨Neurturin(NTN)基因转染的C17．2神经干细胞移植后对帕金森病(PD)大鼠模型的保护作用，为其提供基因修饰的神经干细胞。方法 用RT—PCR方法获取Prepro-NTN cDNA，并克隆至pBlueskipt Ⅱ载体中，再将Prepro-NTN基因克隆至pcDNA3．1—hygro真核表达载体中，经量Lipofectamine 2000转染C17．2神经干细胞，挑选稳定表达的克隆，用RT—PCR及Western Blot印迹分析鉴定。结果 pcDNA3．1—hygro-NTN质粒转染C17.2神经干细胞后有5个稳定表达的克隆生长，克隆1有NTN蛋白的高表达。结论 获得了稳定表达NTN蛋白的C17．2神经干细胞克隆，为移植治疗PD打下了坚实的实验基础。