溃结爽灌肠组方不同组分对实验性溃疡性结肠炎大鼠的氧化应激及能量代谢水平的影响

目的:分别从氧化应激及能量代谢角度研究溃结爽灌肠方对实验性溃疡性结肠炎(UC)大鼠的作用及其疗效机制,并应用正交试验设计,分析溃结爽灌肠方中各组分在不同水平对UC大鼠的的单因素效应及量效关系。方法:按照L9(34)正交表设计,70只清洁级雄性wistar大鼠进行9组试验。葡聚糖硫酸钠(DSS)法复制UC大鼠模型后,以溃结爽方灌肠10 d,麻醉取材,计算结肠黏膜损伤评分(CMDI),制作病理切片;生化法检测大鼠结肠黏膜谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、腺苷三磷酸(ATP)、一氧化氮(NO)表达水平。结果:模型组抗氧化因子SOD、GSH活性明显降低,脂质过氧化产物MDA及NO水平显著增高,并且能量代谢受到影响,ATP水平降低,与空白组比差异有显著性(P0.05)。溃结爽灌肠能够不同程度改善UC大鼠氧化应激损伤及能量代谢水平,提高SOD、GSH活性及ATP水平,降低MDA、NO的表达,并且以B组效应最佳(P0.05)。在结肠黏膜损伤评分(CMDI)方面,A组B组C组E组F组I组均较模型组有不同程度改善(P0.05),结果与抗氧化因子活性(SOD、GSH)及能量代谢(ATP酶)表达水平变化具有一致性。4味中药黄柏、苦参、白及、地榆在高、中、低剂量均可不同程度提高抗氧化因子SOD、GSH活性及ATP的表达,同时降低大鼠结肠黏膜MDA、NO的含量,但随剂量变化其表达水平呈现不同变化趋势。结论:溃结爽灌肠方可以明显降低UC模型大鼠结肠黏膜氧化应激损伤,提高能量代谢水平,从而减轻UC大鼠肠道炎症损伤,促进肠道黏膜修复。     

郭光业教授应用乌梅丸加减治疗溃疡性结肠炎临床经验

溃疡性结肠炎(UC)系消化系统难治性疾病之一,严重影响患者的身体健康和生存质量。中医治疗本病具有一定优势。郭光业教授根据自己长期临床经验,对该病具有独到见解,认为该病病程长,用药复杂,最终往往形成一个本虚标实、虚实夹杂、寒热错杂、错综复杂的病机变化。乌梅丸是治疗久痢的经方,其所治久痢形成的机理是肝脾虚弱,湿热下注,与UC病机相吻合。郭教授临床以乌梅丸为基础辨证加减治疗UC每获良效。     

DAL-1对非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移能力影响的初步研究

鉴定和测序鉴定序列及插入方向正确,其中pGPU6/GFP/Neo-DAL-1-T4表达载体在mRNA和蛋白质水平能有效抑制DAL-1的表达,抑制率分别为(87 41±1 994)%和(82 73±2 147)%.与对照组细胞比较,DAL-1稳定抑制的实验组细胞迁移和侵袭能力(P=0 000)和增殖能力显著增强(P=0 000).结论: 成功设计并构建了靶向DAL-1的shRNA表达载体,建立了DAL-1稳定抑制的NSCLC细胞株,为进一步研究DAL-1在NSCLC细胞中的作用提供了实验模型.     

成骨肉瘤患者TH1/TH2亚群漂移研究

观察成骨肉瘤患者辅助性Ｔ淋巴亚群中Ｔｈ１／Ｔｈ２亚群的变化,为细胞因子免疫治疗提供依据。方法应用放射免疫法以及酶联免疫吸附法检测成骨肉瘤患者血清中ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α的含量,检测外周血单个核细胞培养上清中ＩＬ－２、ＩＬ－４含量。结果成骨肉瘤血清中及培养上清中ＩＬ－２减少,而ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α含量增加。结论成骨肉瘤患者中存在有Ｔｈ１／Ｔｈ２平衡失调,其中Ｔｈ１亚群功能抑制,Ｔｈ２亚群功能亢进,它们与肿瘤在宿主体内生长密切相关。     

非小细胞肺癌细胞系中DAL-1表达与其启动子甲基化的关系

目的 探讨非小细胞肺癌中潜在抑癌基因DAL-1的表达与其启动子甲基化的关系.方法 10例非小细胞肺癌初诊患者,每例在治疗前抽取胸水并分离培养肿瘤细胞成系.分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、western blot检测DAL-1的mRNA水平和蛋白水平的表达,用甲基化特异性PCR检测DAL-1基因启动子的甲基化.结果 10个细胞系中有9个完全不表达DAL-1mRNA和蛋白,仅有1个表达与人支气管上皮细胞株HBE水平相当.9个不表达DAL-1的细胞系有6个检出启动子CpG岛甲基化.结论 DAL-1在大多数非小细胞肺癌患者胸水分离细胞系中表达缺失.而DAL-1启动子甲基化是造成这种现象的主要原因.     

IPASS临床研究公布不同EGFR分子标记物改变对临床疗效的影响

肺癌的靶向治疗中以EGFR-TKI应用最为广泛,已有研究证实了EGFR突变检测与靶向治疗的相关性,使用EGFR-TKI之前应当进行EGFR突变检测已经深入人心.     

人黑色素瘤特异性抗原基因的克隆及其在原核系统中的表达

目的：克隆及表达人黑色素瘤特异性抗原(PRAME)基因的cDNA片段。方法：从人急性髓细胞白血病细胞系HL-60提取总RNA，用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从中扩增出PRAME基因cDNA片段。将PRAME基因cDNA片段插入载体pGEM-T-easy中，经全自动序列分析仪测序正确后，再克隆至表达载体pGEX-4T-2中，构建高效表达克隆，并转化大肠杆菌进行表达。结果：1mmoL／L异丙基-β—D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5h，PRAME蛋白表达即达高峰。结论：PRAME基因在极少数正常组织中低表达，而在白血病患者高表达，并编码被自体细胞毒T淋巴细胞识别的抗原，所以该基因有望成为肿瘤免疫治疗的新成员。     

人NY-ESO-1基因的原核表达、纯化和初步应用

目的：克隆人NY-ESO-1基因，进行原核表达和分离纯化，并初步应用于肝癌患者血清NY-ESO-1抗体的检测。方法：通过RT-PCR技术从人肝癌组织中扩增NY-ESO-1基因片段，插入原核表达载体pGEX4T-1( )中，构建重组表达质粒pGEx／ESO1，导入大肠杆菌BL21(DE3)，诱导目的蛋白表达，经包涵体透析复性和GSTrap亲和层析纯化目的蛋白，Westem blot鉴定。应用间接ELISA方法初步检测50例肝癌患者血清和20例正常人血清NY-ESO-1抗体的表达。结果：扩增得到NY-ESO-1基因3′端276bp片段，与GeneBank公布序列一致，构建的pGEX／ESO1原核表达质粒经IPTG诱导，在大肠杆菌中表达分子量约36kD的GST-ESO1融合蛋白，纯化后蛋白纯度为90％。50例肝细胞癌患者血清中4例检测到NY-ESO-1抗体(8％)，正常人血清均为阴性。结论：成功构建pGEX／ESO1重组表达质粒，得到有活性的NY-ESO-1融合蛋白，对肝癌患者血清NY-ESO-1抗体的检测有-定的应用价值。     

人肝癌细胞中一个MAGE抗原表位的获得及mRNA水平分析

0　引言　寻找和鉴定肿瘤抗原肽是肿瘤免疫研究中的重要任务 .人细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL)可通过特异性识别与人类 HL A分子结合的肿瘤抗原决定簇而介导肿瘤抑制 ,用这些肽支撑的疫苗可以预防或治疗肿瘤 [1 ] .寻找和鉴定肝癌细胞表面表达的抗原肽对肝癌治疗有重要意义 .目前这方面报道很少 .本实验用细胞膜温和酸洗、液质联用技术分析了人肝癌细胞系 HHCC细胞膜表面表达的抗原肽 .并用 RT- PCR的方法在 m RNA水平上分析了该抗原肽编码基因的表达1　材料和方法1.1　材料　人肝癌细胞株 HHCC购于上海动物细胞所 .反相 C18柱为 Nobe…     

诱导型一氧化氮合酶反义核酸在脊髓损伤后细胞凋亡和p-p38 MAPK信号转导通路中的作用

目的研究一氧化氮合酶(NOS)反义核酸(ASODN)对脊髓损伤后NOS表达、细胞凋亡、信号转导通路的影响。方法设计并合成诱导型NOS反义寡脱氧核苷酸(ASODN-iNOS)及诱导型NOS无义寡脱氧核苷酸(NSODN-iNOS),微量注入大鼠蛛网膜下腔并制备成脊髓压迫伤动物模型。伤后6 h分别用RT-PCR检测iNOS mRNA表达及用Western blotting检测组织中磷酸化丝裂原激活蛋白激酶(p-p38 MAPK)的变化,用双标染色流式细胞术检测伤后72 h细胞凋亡情况。损伤对照组鞘内注射不含核酸的溶液成分。结果脊髓损伤后组织中存在iNOS的表达和p-p38 MAPK变化;损伤后局部组织中存在明显的细胞凋亡;ASODN-iNOS可以抑制iNOS的表达,并可以显著抑制损伤后p-p38 MAPK的表达和细胞凋亡的发生,与损伤对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论ASODN-iNOS可以抑制脊髓损伤后iNOS的表达和细胞凋亡,ASODN的这种作用可能与p-p38 MAPK信号转导通路有关。