赫赛汀对吉非替尼诱导肺癌A549细胞凋亡的影响

目的： 研究吉非替尼与赫赛汀联合应用对人肺腺癌A549 细胞凋亡的影响。方法: 应用MTT法,流式细胞仪Annexin V－PI 双标法、DAPI荧光染色等多项方法,体外研究吉非替尼与赫赛汀联合对A549 细胞的促凋亡作用。结果: 吉非替尼与赫赛汀单独应用及联合应用均可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长，促进细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性,2者联合作用人肺腺癌A549 细胞24 h、48 h、72 h 的凋亡率显著高于单用吉非替尼或赫赛汀组(P<0.05),2者呈现出相加的抗瘤效果。结论: 吉非替尼与赫赛汀联合应用在体外对人肺腺癌A549 细胞有明显的促凋亡作用。     

人肝癌细胞系中肿瘤相关基因MAGE的克隆

目的 克隆人肝癌细胞系HHCC中的肿瘤相关基因MAGE－1的全长cDNA。方法 根据GenBank中MAGE－1基因编码区，设计PCR引物，用RT-PCR手稿,人人肝癌细胞系HHCC中获得MAGE－1全长cDNA，双酶切后连接入质粒pUC19中，转化入大肠杆菌DH5α。挑选阳性克隆提取质粒，进行DNA序列分析，并将测得的核苷酸序列与GenBank中的DNA序列进行BLAST同源性分析。结果 获得MAGE－1全长cDNA,MAGE-6基因463bp片段，以及1个与MAGE－6基因编码区有93％同源性的片段，可能为MAGE家族中的新成员。结论 人肝癌细胞系HHCC可表达多种MAGE基因，可能有效的MAGE基因出现，为研究MAGE基因在HCC中的表达模式及其在HCC免疫治疗中的靶点提供了新的资料。     

稳定表达表皮生长因子受体293细胞系的建立及其生物学特性研究

目的 建立稳定表达野生型表皮生长因子受体(EGFR)全长的293细胞系.方法 通过脂质体瞬间转染的方法将含有EGFR全长的质粒转染293细胞系.利用抗生素筛选的方法使转染阳性的细胞扩增,单克隆化,进一步稳定传代.通过Western印迹的方法挑选高表达克隆,进而使用MTT法测细胞增殖活性.反复传代、冻存、复苏鉴定表达的稳定性.结果 获得1株稳定表达EGFR的293细胞系,命名为WT293,且转染前后细胞生长速度存在差异.结论 pcDNA3.1(一)载体能够作为稳定表达的载体用于筛选.稳定表达EGFR的293细胞系为配体受体相互作用及靶向EGFR的抗肿瘤药物作用机制的研究提供了实验素材和理论依据.     

软组织肉瘤患者Th1/Th2亚群漂移研究

目的：观察软组织肉瘤患者Ｔ淋巴细胞亚群中Ｔｈ１／Ｔｈ２的变化,为细胞因子免疫治疗提供依据。方法：应用放射免疫分析法以及酶联免疫分析法检测１０例软组织肉瘤患者及１０例健康志愿者血甭中ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２的含量,检测外周血单个核细胞２上清中ＩＬ－２、ＩＬ－４含量。结果：软组织肉瘤患者血清及培养上清中ＩＬ－２、ＩＬ－１２减少,而ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－６含量增加。经过植物血凝素刺     

GST-PPARγC1原核表达载体的构建、表达及抗GST-PPARγC1多克隆抗体的制备

目的 在大肠杆菌中表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1(PPARγC1)与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白，并制备抗PPARγC1的多克隆抗体。方法 从肝癌细胞系HepG2提取总RNA，用RT-PCR扩增出PPARγC1 cDNA的编码序列，克隆入表达载体pGEX-4T-1中，重组载体在酶切鉴定后，在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-PPARγC1蛋白，SDS-PAGE分析表达产物，通过亲和层吸法纯化表达的GST-PPARγC1融合蛋白，并以此为抗原制备多克隆抗体。Western blotting检测重组抗原的免疫活性。结果 经测序、酶切鉴定证明，PPARγC1基因已正确插入到pGEX-4T-1中，经IPTG诱导后，表达出相对分子量为44000的融合蛋白。Western blotting鉴定所制备的多克隆抗体可以与PPARγC1特异性结合。结论 PPARγC1片段在大肠杆菌中的成功表达及制备得到的多克隆抗体，为检测PPARγC1及其在其他组织中的表达提供了一种检测途径。     

HLA-A2相关肝癌抗原肽的初步研究

目的寻找肝癌细胞表达的肿瘤抗原肽.方法应用0.2mol/Lph3.0柠檬酸缓冲液酸洗肝癌细胞系HHCC,经Sephadex G-25过滤及反向高效液相色谱分离纯化,获得可与HLA-Ⅰ类分子结合的不同组分短肽.将其与抗原加工缺陷的HLA-A2+T2细胞反应,进行肿瘤细胞特异性表位测定,同时进行CTL杀伤鉴定.结果获得4个可与HLA-A2结合的组分,其中2个可以激发较强的CTL杀伤反应.结论肝癌细胞系HHCC中存在能够激发CTL特异性反应的肿瘤抗原肽,并证实上述寻找肿瘤抗原肽的技术路线具有可行性.     

CT高压增强扫描的护理配合

对100例CT增强检查患者在检查前、检查中及检查后的护理经验进行分析,97例患者检查顺利,轻度过敏1例,轻度迟缓过敏2例。     

突变的肝细胞生长因子受体被肝癌细胞HLA-A2分子递呈的实验研究

目的 寻找肝癌细胞抗原肽。方法 应用细胞膜酸洗技术使抗原肽从人肝癌细胞膜表面脱落,经过凝胶层析,应用反相高效液相色谱层析得到不同组份多肽。细胞表位重建及生物学鉴定确定其活性,高效液相色谱－质谱仪联用技术获得抗原肽的一经结构,在互联网上进行氨基酸同源性分析确定其同源性序列。结果 经过反相高效液相色谱层析后可以获得20多个多肽组份,生物活性鉴定有2个活性组份,其中1个组分经过液 质联用鉴定和氨基酸同源性分析,确定其序列为SLIVHLNEV,是肝细胞生长因子受体前体第1175－1183肽段发生突变,第1180位点的苯丙氨酸变为亮氨酸。结论 液质联用技术为寻找抗原肽的有效方法,肝细胞生长因子受体突变体SLIVHLNEV为肝癌抗原体。     

肝癌细胞稳定转染B7.1后的免疫学特性

目的 探讨赋予肝癌细胞第二信号分子Ｂ７．１增强癌细胞与淋巴细胞之间的识别与激活作用,从而达到增强淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤或抑制作用。方法 利用逆转录方法,转染Ｂ７．１分子至包装细胞系ＰＡ３１７。筛选获得高滴度的克隆后,以病毒上清感染肝癌细胞,使其表达Ｂ７．１分子,最后以ＬＤＨ释放法测定ＬＡＫ细胞的细胞毒活性。结果 肝癌细胞可稳定表达Ｂ７．１分子,阳性率达９４．３％,未转染的细胞无表达,其所诱发的Ｌ     

大肠癌疫苗的最新进展

在寻求针对大肠癌的新疗法过程中,肿瘤疫苗因其具有低毒高特异性的特点给肿瘤治疗带来新的希望。大量的临床前期及临床实验证实,该方法通过多种主动特异性免疫治疗,激活特定的免疫系统并杀死体内肿瘤细胞。在这项研究工作中,我们概括了肿瘤疫苗的主要原则及研究结果,探讨最新的临床前期大肠癌免疫治疗方案,并有望提高这种生物治疗途径的效率。