双根清脑颗粒对血管性痴呆模型大鼠行为学及血清超氧化物岐化酶、丙二醛、一氧化氮、一氧化氮合酶的影响

目的:观察双根清脑颗粒对血管性痴呆(VD)模型大鼠行为学,血清中超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的影响,探讨其干预VD的机制。方法:采用栓子注入法制成VD大鼠模型,给予双根清脑颗粒及脑复康ig15d,Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力,检测血清中的SOD,NOS活性及MDA,NO的含量。结果:与模型组比较,双根清脑颗粒组大鼠逃避潜伏期和首次穿越平台的时间明显缩短(P0.05,P0.01),中、低剂量组及脑复康组SOD活性升高,MDA含量降低(P0.05),各用药组SOD/MDA的比值均升高(P0.01)。各用药组血清NO含量降低(P0.05,P0.01),中、低剂量显著降低NOS活性(P0.01)。结论:双根清脑颗粒可显著改善VD模型大鼠的学习记忆能力,提高血清SOD活力、降低血清MDA,NO的含量及NOS活性。     

白藜芦醇抗帕金森病黑质细胞凋亡的实验性研究

目的　研究帕金森病(PD)动物模型黑质细胞的凋亡情况及白藜芦醇对神经的保护作用。方法　成年健康SD大鼠100只,分为5组,每组20只。PD模型组应用脑立体定位仪注入6-羟基多巴胺和0.2 %抗坏血酸生理盐水混合液至中脑黑质,诱发PD模型;白藜芦醇实验组应用脑立体定位仪注入6-羟基多巴胺和白藜芦醇混合液;正常对照组应用脑立体定位仪注入0.2 %抗坏血酸生理盐水混合液,术后观察SD大鼠旋转行为,及应用TH免疫组化和Tunel法观察白藜芦醇对黑质神经元的保护作用。结果　TH染色可见白藜芦醇实验组黑质部位损毁较轻、有较多的残存TH阳性细胞。6-羟基多巴胺模型组TH染色黑质大部毁损,几乎无残存的TH阳性细胞。旋转试验结果,白藜芦醇实验组大鼠旋转次数平均206圈/ 30分;6-羟基多巴胺模型组模型鼠旋转次数平均314圈/ 30分;两者存在统计学差异(P<0.05 )。术后第2天检测黑质细胞凋亡情况,白藜芦醇实验组黑质细胞凋亡较少,细胞棕黑色,可见凋亡小体;6-羟基多巴胺模型组黑质细胞凋亡数量较多。结论　白藜芦醇具有神经保护作用。     

青蒿鞣质抗单纯疱疹病毒机理初探

目的　探讨青蒿鞣质 (CTA)抗单纯疱疹病毒 2型 (HSV- 2 )的作用机理。方法　采用细胞病变效应 (CPE)抑制法和MTT法 ,以阿昔洛韦 (ACV)为阳性对照药物 ,研究青蒿鞣质在体外对HSV -2的直接杀灭、病毒感染阻断、不同时间感染后的CPE抑制效果。结果　CTA对病毒具有明显的直接杀灭作用 ,可以阻断病毒的吸附过程和抑制病毒在细胞内的复制 ,而且CTA对病毒的抑制作用受病毒吸附时间的影响很小 ,具有明显的治疗作用 ,其效果与阳性对照药物无环乌苷 (ACV)相当。结论　CTA体外抗HSV 2作用可以通过多种途径发挥作用。     

胚鼠腹侧中脑和胚肾联合移植治疗Parkinson病的实验研究

为了提高移植多巴胺(DA)能神经元的存活率和促进神经元生长,将胚鼠腹侧中脑和胚肾联合移植入Parkinson病(PD)模型大鼠脑内,检测胚肾对移植DA能神经元的影响。先用神经毒剂6 OHDA损毁大鼠左侧中脑被盖腹侧区和黑质致密部建立PD动物模型,再将胚脑的腹侧中脑(A组)、胚脑的腹侧中脑和胚肾(B组)分别移植入左侧纹状体尾壳核,C组为空白对照。于移植后3d、1月、3月将动物处死,采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化法观察3组动物移植部位DA能神经元的存活和生长状况。在移植部位可见B组较A组的TH阳性神经元和纤维的数量明显增多,C组的移植部位未见TH阳性神经元和纤维;A、B两组的移植针道及其周围也有TH阳性神经元和纤维;B组的TH阳性神经元数量、体积和神经纤维的密度均大于A组。移植1个月和3个月后,A、B两组大鼠的旋转行为均较C组减少(P<0. 05)。以上结果提示胚肾具有良好的神经营养作用,能促进移植DA能神经元的存活和生长。     

内耳干细胞分离培养及鉴定的实验研究

目的：明确内耳干细胞的取材、培养方法及鉴定方法,观察内耳干细胞的形态.方法：取前庭椭圆囊处上皮;大鼠内耳内螺旋沟;内耳的Corti器位置;利用无血清培养和单细胞克隆技术,进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,并用Nestin、Brdu免疫荧光方法,鉴定内耳干细胞.同时进行细胞计数.结果：从新生大鼠内耳分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化,悬浮生长的Nestin阳性细胞团,并具有增殖的能力,免疫荧光实验可表达Brdu阳性.其中内耳的Corti器位置取材组Nestin阳性细胞团的直径和其他两组存在统计学差异.而打散后的细胞团中Brdu阳性细胞数量较多,是内耳干细胞的最佳取材位置.结论：从新生大鼠前庭椭圆囊处上皮、大鼠内耳内螺旋沟、内耳的Corti器位置可分离出内耳干细胞,其中内耳的Corti器是内耳干细胞的最佳取材位置.     

白藜芦醇抗帕金森病黑质细胞凋亡的实验性研究

目的　研究帕金森病(PD)动物模型黑质细胞的凋亡情况及白藜芦醇对神经的保护作用。方法　成年健康SD大鼠1 0 0只,分为5组,每组2 0只。PD模型组应用脑立体定位仪注入6 羟基多巴胺和0 . 2 %抗坏血酸生理盐水混合液至中脑黑质,诱发PD模型;白藜芦醇实验组应用脑立体定位仪注入6 羟基多巴胺和白藜芦醇混合液;正常对照组应用脑立体定位仪注入0 . 2 %抗坏血酸生理盐水混合液,术后观察SD大鼠旋转行为,及应用TH免疫组化和Tunel法观察白藜芦醇对黑质神经元的保护作用。结果　TH染色可见白藜芦醇实验组黑质部位损毁较轻、有较多的残存TH阳性细胞。6 羟基多巴胺模型组TH染色黑质大部毁损,几乎无残存的TH阳性细胞。旋转试验结果,白藜芦醇实验组大鼠旋转次数平均2 0 6圈/ 30分;6 羟基多巴胺模型组模型鼠旋转次数平均31 4圈/ 30分;两者存在统计学差异(P <0 . 0 5 )。术后第2天检测黑质细胞凋亡情况,白藜芦醇实验组黑质细胞凋亡较少,细胞棕黑色,可见凋亡小体;6 羟基多巴胺模型组黑质细胞凋亡数量较多。结论　白藜芦醇具有神经保护作用。     

当归补血汤对感音神经性聋大鼠耳蜗干细胞移植后细胞凋亡的影响

目的 探讨感音神经性聋大鼠耳蜗干细胞移植后干细胞凋亡的时程特点及当归补血汤的抗凋亡作用.方法 分离胚胎大鼠Cord器的耳蜗干细胞进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,用Nestin免疫荧光法进行耳蜗干细胞鉴定.建立感音神经性聋大鼠模型,将其分为耳蜗干细胞移植组(45只)、当归补血汤干预组(45只)及对照组(35只),分别将耳蜗干细胞悬液、含有当归补血汤的耳蜗干细胞悬液和生理盐水移植入三组大鼠耳蜗鼓阶,于移植后1、3、5、10、15天采用原位末端标记法结合流式细胞仪及免疫荧光方法 对三组动物干细胞凋亡情况进行定量分析.结果移植后1、3、5、10、15天耳蜗干细胞移植组的耳蜗干细胞凋亡率分别为27.84%、49.37%、44.78%、39.37%、34.82%,当归补血汤干预组分别为18.35%、26.92%、23.18%、21.38%、18.19%,细胞凋亡在移植后3～5天达到高峰;当归补血汤干预组各时间点凋亡率均明显低于耳蜗干细胞移植组(P<0.05).结论 感音神经性聋大鼠耳蜗干细胞移植后3～5天是干细胞凋亡的高峰期;当归补血汤具有抗移植耳蜗干细胞凋亡的作用.     

内耳干细胞培养、移植实验研究

目的 通过移植内耳干细胞入中毒性耳聋模型大鼠内耳,观察内耳干细胞的生长、整合等情况.方法 选用健康SD大鼠20只,连续10天肌内注射中等度中毒剂量的庆大霉素[80 mg/(kg·d)],制作中毒性耳聋动物模型.实验分为2组,每组10只.干细胞组:移植用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的耳蜗干细胞,观察移植后的内耳干细胞存活、增殖能力;用流式细胞仪测定移植后内耳组织CD4( )T细胞占整个淋巴细胞的百分比.生理盐水组:耳蜗内注入生理盐水,观察同上.结果 与结论移植到中毒性耳聋模型鼠内耳的内耳干细胞能够向周围扩散、存活,而且有一定的增殖能力,表现为正常的毛细胞形态;移植后内耳组织CD4( )T细胞占整个淋巴细胞百分比与移植前差异无显著性[(48±5)% vs.(45±6)%,P＞0.05],移植后的排斥反应不明显.     

当归补血汤对耳蜗干细胞鼓阶内移植治疗药物性感音神经性耳聋大鼠增效作用研究

目的:观察当归补血汤对耳蜗干细胞移植治疗感音神经性耳聋大鼠增效作用.方法:感音神经性耳聋大鼠分为耳蜗干细胞移植组、当归补血汤组和空白对照组3组.体外培养耳蜗干细胞进行内耳移植,耳蜗干细胞移植组将耳蜗干细胞悬液移植入内耳耳蜗结构,当归补血汤组将含有当归补血汤的耳蜗干细胞悬液移植入内耳耳蜗结构,空白对照组移植生理盐水.分别于术后1、3、6和12个月采用听觉脑干诱发电位方法检测模型大鼠的听力恢复情况,处死大鼠,通过免疫荧光染色方法观察移植的耳蜗干细胞在内耳存活、分化和迁移情况.结果:从E14大鼠耳蜗分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化悬浮生长的Nestin阳性细胞团, Brdu表达阳性,说明是具有自我更新和增殖潜能的干细胞.免疫荧光检测发现在耳蜗干细胞移植组、当归补血汤组在移植针道两侧可见移植的干细胞,有些还迁移到基底膜区.存活的细胞部分呈 Myosin Ⅶ A阳性染色.与耳蜗干细胞移植组比较,当归补血汤组 Myosin Ⅶ A阳性染色细胞数量较多,差异有统计学意义(P<0.05).听觉脑干诱发电位结果显示当归补血汤组的感音神经性耳聋模型大鼠听力恢复情况较耳蜗干细胞移植组和对照组好,差异有统计学意义(P<0.05).结论:经体外培养的耳蜗干细胞移植入内耳鼓阶后能够存活和迁移,并分化为内耳毛细胞;当归补血汤可以提高耳蜗干细胞分化为内耳毛细胞的比例,并促进感音神经性耳聋模型大鼠听力恢复.     

胚鼠腹侧中脑组织联合胚肾组织脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的 :观察胚肾组织对DA细胞的作用 ,为临床治疗PD提供实验依据。方法 :采用 6-OHDA损毁黑质区和腹侧被盖区制作成功的PD大鼠模型 46只。随机分组 :实验组 1:分为VM 1组 (胚VM组织和胚肾组织联合培养移植组 ;N =6)和VM2组 (单纯VM组织培养移植组 ;N =6)。分别取 14天和 18天大鼠胚VM和肾组织 ,制备成约 (1～ 1.5 )× 10 5个细胞的细胞悬液 ,植入PD大鼠毁损侧尾壳核内。移植后 1天 ,行TUNEL、TH染色和流式细胞仪检测。实验组 2 :分为VM单独移植组 (singleVM组 ,N =12 ) ;VM和胚肾组织联合移植组 (Co移植组 ,N =12 ) ;空白对照组 (N =10 )。取 14天和 18天的胚VM和肾组织 ,制备胚VM细胞悬液 ,同时将肾组织修成 0 .2mm3的组织块。singleVM组每只动物分两点植入 9μlVM细胞悬液 ;Co移植组每只动物亦植入 9μl的VM细胞悬液 ,留针 10分钟后再植入0 2mm3的胚肾组织块。动物分别存活 3、6个月 ,存活期间用APO诱导 ,观察旋转行为行TH和HE染色。结果 :实验组 1:TH染色显示 ,移植后 1天VM 1移植组和VM 2移植组纹状体针道部位有大量THir阳性细胞 ,前者较后者THir阳性细胞数显著增多 (P <0 .0 5 )。TUNEL法显示移植后 1天VM1移植组和VM2移植组纹状体针道部位有大量TUNEL阳性细胞。前者较后者TUNEL阳性细胞数显著减少