(R,R’)-富马酸戊乙奎醚通过诱导细胞周期G0/G1期阻滞抑制非小细胞肺癌H157细胞增殖

目的:考察抗胆碱药(R,R’)-富马酸戊乙奎醚[(R,R’)-penehyclidine fumarate,R2PHF]对非小细胞肺癌H157细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法:应用RT-PCR检测H157上M受体的表达;磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法测定R2PHF作用于H157后细胞活力改变;流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡;Western Blot分析细胞周期蛋白cyclin D1表达水平的变化。结果:M受体五种亚型在H157上有不同的表达,R2PHF在体外可时间及浓度依赖性抑制H157细胞增殖并诱导其发生G0/G1期阻滞。FCM检测结果显示,20μmol.L-1R2PHF作用48 h后,H157细胞G0/G1期比率显著增高,S期比率显著下降,而细胞凋亡未发生明显变化。Western Blot分析表明R2PHF可时间及浓度依赖性下调细胞周期蛋白cyclin D1的表达。结论:R2PHF抑制非小细胞肺癌H157细胞增殖与其下调cyclin D1的表达水平并将细胞阻滞在G0/G1期密切相关。     

爪蟾卵母细胞表达的大鼠ASIC3电生理学特性研究

目的:研究大鼠酸感受离子通道亚基3 (acid-sensing ion channel subunit 3,ASIC3)组成的同聚体离子通道的电生理学特性.方法:将编码ASIC3亚基的cRNA注射到爪蟾卵母细胞中以表达ASIC3离子通道,使用双电极电压钳技术记录H 诱发电流,分析电流的药理学和门控动力学特征,并观察了Ca2 、Na 及K 离子对H 诱发电流的影响.结果:在注射ASIC3亚基cRNA的爪蟾卵母细胞上,降低胞外液pH值可诱导出内向电流.pH值越小则H 诱发的电流幅度越大,pH50＝5.83.H 诱发电流可被阿米洛利(氨氯吡咪)可逆性阻断,电流呈现快速和稳态失活,其失活常数分别为τ1＝(1.5±0.7) ms,τ2＝(364.5±1.3) ms.提高胞外Ca2 浓度可降低H 诱发的电流幅度,IC50＝9.16 mmol/L.当细胞外液中无Na 时,H 基本上不能诱发出内向电流;当同时去除细胞外液中Na 和K 时,H 可诱发出外向电流.结论:成功建立了特异性表达大鼠ASIC3亚基同聚体离子通道细胞模型.ASIC3除了对Na 通透外,对K 具有一定程度的通透.胞外Ca2 对ASIC3的开放具有抑制性作用.     

组胺H1受体阻断药及其对心脏影响的研究进展

组胺H₁受体阻断药主要用于治疗过敏性疾病、晕动病和失眠等。随着该类药物的不断发展,其对中枢和外周神经的副作用越来越少,对心脏的安全性越来越高。但是,要完全消除它对心脏的副作用似乎是一个难题。目前,对组胺H₁受体阻断药的评价逐渐集中到它对心脏功能的影响上,其研究越来越受到人们的重视。     

豚鼠耳蜗单离Hensen细胞钾电流特性及三磷酸腺苷对其影响

目的　研究豚鼠耳蜗单离Hensen细胞的钾离子电流及其特性以及三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate ,ATP)对Hensen细胞电生理特性的影响。 方法　采用传统全细胞膜片钳技术 ,对单离Hensen细胞进行记录。ATP通过压力注射仪对单离Hensen细胞给药。结果　Hensen细胞的钾电流呈明显的外向整流性 ,只有延迟整流性钾电流 (delayedrectificationpotassiumcurrent,IK) ,没有瞬间外向性钾电流 (transientoutwardpotassiumcurrent ,IA)。低浓度 ( 0 1 μmol/L ,1 μmol/L ,1 0μmol/L)ATP可以使Hensen细胞的钾电流的幅度明显降低 ,且呈浓度依赖性 ,浓度越高 ,降幅越大。高浓度ATP( 1 0 0 μmol/L ,1mmol/L ,1 0mmol/L)可以引起Hensen细胞的内向离子流 ,呈浓度依赖性 ,浓度越高 ,升幅越大。ATP的这两种作用均可被ATP受体拮抗剂 ( 1 0 0 μmol/L舒拉明 )所逆转。结论对Hensen细胞不同电压的刺激可以诱发出延迟整流性钾电流 ,低浓度ATP对Hensen细胞的钾电流有明显抑制作用 ,且呈浓度依赖性。高浓度ATP可以引起Hensen细胞的非选择性内向离子流 ,为钾离子依赖性 ,而且是通过ATP受体起作用     

烟碱受体变构调节和变构调节剂的研究进展

本文综述了烟碱受体变构调节的证据和变构调节剂的种类,指出变构调节发生在烟碱受体除识别位点以外的多个位点上,这些位点在受体与细胞膜交界的外侧、内侧、离子通道中和细胞膜上。膜片钳技术是重要研究手段之一,根据变构调节剂导致的烟碱受体性质的改变能确定它们的作用位点,这为进一步阐明烟碱受体的性质和明确一些药物的作用机制提供了依据。     

内皮缩血管肽A受体拮抗剂ETP-508对内皮缩血管肽1诱导的心肌细胞肥厚的作用

目的观察内皮缩血管肽(ET)A受体拮抗剂ETP-508对ET-1诱导的心肌细胞肥厚的作用。方法心肌细胞用ET-1(10nmol·L-1)或ET-1+ETP-508(10μmol·L-1)处理24h,分别采用光学显微镜、[3H]亮氨酸掺入、激光扫描共聚焦显微镜和RT-PCR技术方法观察ETP-508对心肌细胞表面积、蛋白质合成、肌原纤维肌节重新组装和基因表达的影响。结果ET-110nmol·L-1诱导心肌细胞表面积和[3H]亮氨酸掺入增加,胚胎基因心钠素和肌球蛋白轻链2的mRNA表达增加,肌原纤维节重新形成;ETP-50810μmol·L-1可显著抑制ET-1诱导的心肌细胞表面积和[3H]亮氨酸掺入增加,抑制率分别达56%和46%;并显著减弱肌原纤维节的重新形成和胚胎基因的再表达。结论ETP-508对ET-1诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚有显著的阻断作用。     

非选择性阳离子通道与缺血性脑损伤

非选择性阳离子通道是一类对阳离子的选择性较低的配体门控性离子通道。缺血性脑损伤发生时,一价或二价阳离子进入神经元细胞内,可引发和加重神经元的凋亡和坏死。部分非选择性阳离子通道亦分布于血管内皮细胞,脑缺血发生时可导致血管内皮细胞功能异常和脑水肿。啮齿类动物脑缺血模型亦证明非选择性阳离子通道的非特异性阻断剂,如匹诺卡兰和利莫那班等,能明显减小血管的梗死面积,降低死亡率,发挥神经元保护作用。越来越多的实验证明,在缺血性脑损伤中,非选择性阳离子通道及其非特异性阻断剂与脑缺血密切相关,此通道将成为神经元保护的新靶标。     

从噬菌体随机七肽库中筛选hERG钾通道亲和肽的研究

目的获得与hERG钾通道特异性结合的功能性亲和肽。方法以hERG1a亚基第3个细胞外环（L3）为靶蛋白分子,对噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,ELISA法检测噬菌体克隆与靶蛋白的亲和性,使用全自动膜片钳技术观察亲和肽的活性。结果与结论经过3轮亲和筛选后,随机挑选15个噬菌体克隆对其亲和性做ELISA鉴定,均显示较强的阳性结果。将上述阳性克隆进行DNA测序得到3种不同小肽序列。电生理学研究表明,合成的3个小肽均能显著抑制hERG钾电流,为靶向hERG钾通道抗肿瘤研究提供了新的研究思路。     

罗哌卡因和布比卡因对大鼠海马神经元电压门控性钾电流的影响

目的 研究罗哌卡因和布比卡因对大鼠海马神经元电压门控性钾电流的作用,从离子通道水平探讨局麻药所致中枢神经系统毒性的机理。方法 采用全细胞膜片钳技术观察罗哌卡因和布比卡因对培养大鼠海马神经元延迟整流钾电流(IK)和短暂外向钾电流(IA)的影响。结果 浓度为100、1000 μmol·L-1的罗哌卡因和布比卡因对IK的抑制率分别为8.2％±2.0％、12.3％±3.0％(P>0.05)和24％±4％、33％±6％(P<0.05)。浓度为0.1、1、10 μmol·L-1的罗哌卡因和布比卡因对IA的抑制率分别为33％±4％、44％±4％(P<0.001)和56％±4％、72％±6％(P<0.001)及86％±4％、92％±5％(P<0.01);其半数抑制浓度(IC50)分别为(0. 39±0.19)μmol·L-1和(0.14±0.05)μmol·L-1。两种药物对IA的抑制作用为非电压依赖性。结论 罗哌卡因和布比卡因对大鼠海马神经元IA均具有显著抑制作用,但罗哌卡因对IA的抑制效能明显低于布比卡因。局麻药对海马神经元IA电流的抑制作用可能是其引起中枢神经系统毒性的原因之一。     

NMDA受体NR1a与NR2A亚单位重组体在HEK-293细胞的功能表达

目的 :建立表达大鼠NMDA(N methyl D aspartate)受体NR1a与NR2A亚单位重组体的细胞模型 ,研究其生物学及药理学特性。方法 :利用脂质体转染方法将大鼠NR1a与NR2A亚单位重组体共转染到HEK 2 93细胞中 ,在细胞培养 4 8～ 72h后 ,利用膜片钳全细胞记录技术 ,观察和分析L 谷氨酸诱发的NMDA受体电流。结果 :向转染后的HEK 2 93细胞表面喷射NMDA受体激动剂L 谷氨酸可在 38%细胞上诱发出瞬时内向电流 ,该电流可被NMDA受体选择性拮抗剂D AP5 (5 0 μmol/L)完全阻断。L 谷氨酸诱发的电流具有快速失敏的动力学特征和内向整流特性 ,衰减时间常数 (τ值 )为 (5 3± 9)ms(n =2 0 )。L 谷氨酸诱发电流的EC50 值为 (8.5± 0 .5 ) μmol/L。 结论 :成功地将NR1a与NR2A亚单位转染入HEK 2 93细胞并形成NMDA受体的功能性表达 ,为进一步深入研究NMDA受体不同亚单位组成与其功能的关系及其药理学特性奠定了基础。