褪黑素对长期接受己烯雌酚(DES)大鼠垂体非组织特异性calpains表达及活性调节

目的研究褪黑素(melatonin)对长期接受己烯雌酚(DES)大鼠垂体非组织特异性calpains表达及活性变化的影响。方法30只♀Wistar大鼠,实验分5组:组1:腹腔注射葵花油(1ml.kg-1,每周两次)共计16wk;组2:腹腔注射己烯雌酚(DES,5mg.kg-1,每周两次),共计16wk;组3:腹腔注射DES(5mg.kg-1,每周两次),连续12wk,之后停止给予DES至第16周结束;组4和组5:腹腔注射己烯雌酚溶液(1mg·kg-1,每周两次),连续16wk,并于实验第13周开始分别同时给予皮下注射褪黑素(0.25mg.d-1和1.0mg.d-1),至第16周结束。使用蛋白质印迹(Westernblot)法检测垂体组织μ-和m-calpains表达,采用酪蛋白酶谱法观察不同组别垂体组织胞质及膜成分中μ-和m-calpains的活性变化。结果长期给予DES垂体组织μ-和m-calpain水平升高,膜成分活性增高,而停止给予DES或同时应用不同剂量褪黑素可不同程度降低μ-和m-calpain水平,抑制两种非组织特异性calpains的激活。结论长期给予♀性Wistar大鼠DES可使垂体组织中calpains表达及激活明显增高,并具有一定的雌激素依赖性。不同剂量的褪黑素可减少cal-pains表达,稳定胞质中calpains,抑制其转膜激活。     

Neuro-2a细胞替代神经元原代培养进行神经轴突测量实验研究

目的 建立使用小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞替代原代培养神经元进行神经轴突测量的方法,用于神经损伤研究.方法 使用浓度200 μmol/L、500 μmol/L、1 000μmol/L过氧化氢处理Neuro-2a细胞12h,戊二醛固定,生物染色,在光学显微镜下手动测量突起长度.结果 过氧化氢可剂量依赖性引起神经突起逐渐回缩变短,1 000 μmol/L过氧化氢处理组光镜下见不到明显突起,突起测量数据显示,过氧化氢处理后突起长度与未经处理细胞有显著差异.结论 Neuro-2a细胞在一定程度上可替代原代培养神经元进行轴突测量研究,该测量方法可用于神经轴突再生研究.     

大鼠模型示教辅助脑血管病临床教学

脑血管病是神经系统常见病和多发病，具有高发病率和死亡率的特点，有必要在短时间内让学生准确和系统掌握从脑血管病发病机制、临床表现到治疗的相关知识。目前临床教学中病人资源有限，尚不能充分适应上述要求。本文以蛛网膜下腔出血为例阐明在脑血管病临床教学实践中引入脑血管病动物模型的重要性和可行性。     

噬菌体展示筛选人源细胞黏附分子L1结构域抗体及其体外实验研究

目的使用噬菌体展示技术筛选人源细胞黏附分子L1结构域抗体并体外观察其对神经来源细胞信号通路及细胞聚集的影响。方法以L1纤黏连蛋白FN2-3区肽段为抗原,利用噬菌体抗体库(DAb library)筛选并纯化相应人源结构域抗体,并通过酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫荧光观察抗体与抗原结合特性。给予神经来源SK-N-SH细胞抗体,使用蛋白质印迹(Western blot)观察24 h时其对L1下游信号通路Erk及Akt1激活的影响。使用结晶紫进行细胞染色观察抗体对细胞聚集的影响。结果成功筛选出与L1FN2-3区肽段结合的结构域抗体H2-1,与SK-N-SH细胞内源性L1结合良好。与溶剂对照组相比,该抗体可有效促进SK-NSH细胞中L1下游信号分子Erk1/2及Akt1磷酸化激活(分别为P<0.01和P<0.05),并可促进神经突生长及神经细胞聚集。结论 L1激动型结构域抗体可激活L1相关信号分子,促进神经突生长等作用,具有进一步实验治疗脊髓损伤等神经系统创伤性疾病的研究价值。     

Heregulin-1可调节垂体细胞ErbB受体磷酸化

目的 Heregulin-1是重要的内皮样生长因子家族成员,本研究观察体外条件下重组Heregulin-1α对垂体GH3细胞ErbB受体磷酸化激活水平、时相变化规律影响以及恒河猴垂体组织中Heregulin-1及其受体表达.方法 给予过夜培养GH3细胞重组Heregulin-1α 0～10nM,分别于给药10min,6h,24h和48h提取细胞蛋白,行Western blot,检测磷酸化ErbB-3受体和GAPDH,定义磷酸化ErbB-3受体与GPADH比值（P/G）为磷酸化水平.使用免疫荧光双标法检测恒河猴垂体组织Heregulin-1及ErbB-4受体的表达与分布.结果 体外给予重组Heregulin-1α可引起ErbB-3受体的快速持续的磷酸化激活,以5和10nM Heregulin-1α效果显著;GH3细胞ErbB-3受体自分泌激活,提示GH3细胞可自身合成并释放一定量的Heregulin-1.免疫荧光显示Heregulin-1及其受体ErbB-4可部分表达于恒河猴垂体组织细胞中,但无明显共位.结论 本研究提示Heregulin-1α/ErbB受体信号通路存在于垂体瘤细胞系及高等动物垂体组织中,其生理功能及在垂体肿瘤发生中的作用有待深入研究.