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将1例人肺高分化腺癌手术标本直接移植于NIH裸小鼠皮下,建立了CEA高表达人肺高分化腺癌裸小鼠移植瘤模型(LAX-91),裸鼠间已传32代,历时2年余,LAX-91潜伏期短,生长稳定,移植成功率100%,各代移植瘤病理组织学观察均保持了原病人肿瘤的结构。并且有分泌功能,染色体分析显示人恶性肿瘤特征。血清CEA含量多次测定结果表明,LAX-91具有稳定高分泌CEA的生物学特性。该移植瘤模型的建立,为进一步研究人肺癌和癌胚抗原的关系提供了有用的手段。 相似文献
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目的探讨寄生性原虫阴道毛滴虫细胞生长和衰老的相关基因。方法从阴道毛滴虫的cDNA表达文库中分离出两个与酵母沉寂信息调节因子(Sir2)有较高同源性的cDNA克隆,分别命名为TvSir2和TvSir2-like,它们的编码框分别长915bp和1116bp。结果序列分析显示这两个cDNA克隆与酵母Sir2同源性很高,其氨基酸序列中含有Sir2p及其同源蛋白三个特征性保守结构域。分别从这两株cDNA克隆中扩增出表达片段植入表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coli BL21并用IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达到大量融合蛋白。用亲和层析法纯化的融合蛋白分别免疫豚鼠,获得的抗血清用Western-blot法识别到滴虫虫体全蛋白中大小为34000Mr和42000 Mr的条带。免疫荧光法检测TvSir2和TvSir2-like蛋白位于细胞核外的内质网和高尔基复合体区域。结论TvSir2和TvSir2-like克隆是酵酶Sir2的同源基因,为TvSir2和TvSir2-like在模式生物阴道毛滴虫的功能研究奠定了基础。 相似文献
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珍香胶囊对裸鼠原位移植的人胃癌的抗癌作用 总被引:4,自引:1,他引:3
目的:了解珍香胶囊对裸鼠原位移植的人胃癌的疗效,为临床试验提供科学依据,方法:用珍香胶囊分别对人胃低分化腺癌SGC-7901以及人胃高分化腺癌MKN-28裸鼠原位移植模型进行治疗。实验分5组:珍香胶肮浓度组(4800mg/kg.bw),中浓度组(2400mg/kg.bw),低浓度组(1200mg/kg.bw)以及阳性对照组(丝裂霉素C1mg/kg.bw)和阴性且(生理盐水),珍香胶囊灌胃给药,每天2次,连续给药40次,丝裂霉素C皮下注射给药,每2天1次,共给药10次,实验以荷人胃癌裸鼠的生命延长率,胃指数,血清唾液酸(SA)含量作为疗效评价指标,实验重复3次,:(1) 香胶囊高,中,低三剂量对荷人胃癌SGC-7901裸鼠生命延长率分别为57.78%-72.03%(P<0.01),42.22%-56.59%(P<0.01),28.13%-33.79%(P<0.01),阳性对照丝裂霉素C对荷人胃癌SGC-7901裸鼠生命延长率为52.58%-60.02%(P<0.01),(2)经珍香胶囊高,中剂量治疗后,荷人胃癌MKN-28裸鼠的胃指数,血清SA含量显著减少(P<0.01或P<0.05),结论:在裸鼠可耐受的剂量下,珍香胶囊对裸鼠原位移植的人胃低分化腺癌SGC-7901以及人胃高分化腺癌MKN-28均有明显的抗癌作用,且随着剂量增加,其抗癌疗效增强。 相似文献
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目的:克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis,Tv)衰老生物学标志分子β-半乳糖苷酶(β-gal)同源基因,表达β-GAL重组蛋白。方法:从Tv cDNA表达文库中分离获得Tv β-gal同源基因的cDNA克隆,测序和序列分析。将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体(pQE-80L),转化宿主菌E.coli SG13009,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定。结果:在Tv cDNA文库中获得1株2445 bp的cDNA克隆。序列分析表明,该序列开放读码框有2415 bp,推测肽链具有804个氨基酸,等电点为5.4;该肽链与多种来源的β-GAL同源蛋白均具有较高同源性。用PCR扩增了该cDNA序列中的2277 bp片段,构建了pQE-80L/Tv β-gal,所表达重组蛋白产物的相对分子质量为82 ku。结论:推测该克隆是Tv β-gal的同源基因,Tv β-gal基因可以在E.coli中得到表达,为进一步研究其细胞内定位和蛋白功能奠定了基础。 相似文献
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目的:克隆并应用计算机分析小鼠LASS1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控奠定基础。方法:实验于2006-03/07在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。培养EC109细胞株,预测小鼠LASS1基因启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,构建重组质粒pGEM-T-501、pGEM-T-181、pGEM-T-26,并转化JM109感受态菌,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,酶切pGEM-T-501、181、26重组质粒及pGL3-Basic、pEGFP-1载体,制备插入片段和载体,构建重组表达质粒pGL3-501、pGL3-181和pGL3-26及pEGFP-501、pEGFP-181和pEGFP-26,转化JM109感受态菌。用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果:①在预测启动子区构建了3种荧光素酶报告基因表达体系及3种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系,分别为pGL3-501(-501bp~ 106bp)、pGL3-181(-181bp~ 106bp)、pGL3-26( 26~ 106)、pEGFP-501、pEGFP-181和pEGFP-26。②pGL3-501表达载体与pGL3-181表达载体荧光素酶表达活性相近,pGL3-26表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近, 26bp~ 106bp无启动子活性。绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-501和pEGFP-181有明显的绿色荧光蛋白表达,pEGFP-26和空载体pEGFP-1无表达活性。结论:-181bp~ 26bp区域含有小鼠LASS1基因转录所必需的基本启动子序列。其中2个SP1保守序列是小鼠LASS1基因启动子所必需的。 相似文献
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本研究旨在克隆并分析阴道毛滴虫LAG1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控提供实验资料。预测启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,然后测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果表明在构建的6种荧光素酶报告基因表达体系及2种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系中,表达载体pGL3-455(-455~ 55bp)、pGL3-417(-417~ 55bp)、pGL3-280(-280~ 55bp)、pGL3-202(-202~ 55bp)、pGL3-81(-81~ 55bp)的荧光素酶表达活性相近,均明显高于表达载体pGL3-47(-47~ 55bp)荧光素酶表达活性,而pGL3-47表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,提示-47~ 55bp区无启动子活性。绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-81(-81~ 55bp)有明显的绿色荧光蛋白表达,而pEGFP-47(-47~ 55bp)和空载体pEGFP-1未见表达。因此-81~-47bp区域含有阴道毛滴虫LAG1基因转录所必需的基本启动子序列。 相似文献
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淫羊藿甙对大鼠早期卵巢卵泡发育和卵母细胞凋亡影响的初步研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 探讨淫羊藿甙对早期卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响.方法 用淫羊藿甙对受孕11.5 d大鼠灌胃[100mg/(kg·d)]直至生产,分别取淫羊藿甙灌胃组(试验组)和空白对照组中出生2 d、4 d、8 d龄新生大鼠卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化,免疫组化染色观测caspase-3的定位和表达水平.结果 在试验组新生大鼠,2d龄卵巢卵母细胞巢内卵母细胞比例增高,原始卵泡比例下降;4 d龄卵巢中原始卵泡比例显著增高,发育卵泡比例降低;8d龄卵巢各不同发育阶段卵泡比例与对照组相一致;试验组2d卵巢内TUNEL阳性率降低;Caspase-3主要在卵母细胞巢和原始卵泡的卵母细胞中表达,2 d卵巢表达水平高于4 d卵巢.结论 淫羊藿甙能延缓新生大鼠卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵泡的消耗;能降低2 d龄卵巢卵母细胞的凋亡率,抑制卵母细胞凋亡,增加原始卵泡池的储备量. 相似文献
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目的探讨雷帕霉素对成年雌性大鼠卵泡发育及卵巢寿命的影响,并研究mTOR信号在其中的作用。方法将16只8周龄雌性SD大鼠随机分为对照组和雷帕霉素干预组,观察两组大鼠动情周期的变化;10周后取大鼠卵巢,组织切片经苏木精-伊红染色,计数不同发育阶段的各级卵泡数;用蛋白免疫印迹(Western-blot)检测卵巢中mTOR和其磷酸化的靶分子S6K的蛋白表达水平。结果雷帕霉素干预组大鼠健康卵泡数(225.0±16.2)显著多于对照组(178.4±5.3),差异有统计学意义(P〈0.05)。其中原始卵泡数(132.5±13.7)是对照组(59.6±5.2)的2倍多,而窦状卵泡和闭锁卵泡数则明显低于对照组,差异均有统计学意义(P〈0.01)。雷帕霉素干预组mTOR和P-P70S6K蛋白表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论雷帕霉素可能通过抑制mTOR信号,从而抑制原始卵泡向发育卵泡转化,保存原始卵泡储备,由此使卵巢的寿命延长。 相似文献
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目的探讨长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响。方法 6月龄雌性SD大鼠30只,分为正常饮食组、能量限制(CR)20%组和CR40%组,记录正常饮食(NC)组每日摄食量,并将此摄食量的80%和60%分别喂养CR20%组和CR40%组大鼠,监测大鼠体重及动情周期变化,12个月后取大鼠卵巢。卵巢组织切片由苏木精-伊红染色,观察卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例。结果 NC组体重持续上升,而CR20%组体重小幅增加,CR40%组体重持续下降。CR40%组大鼠的卵泡储备数量(105.7±9.5)和原始卵泡数(55.0±6.8)与NC组(51.2±5.4,18.3±3.7)相比差异均有统计学意义(P〈0.001,P〈0.001),原始卵泡比例(52.1%±2.9%)与对照组(35.8%±5.5%)相比差异有统计学意义(P〈0.001),而成熟卵泡比例(6.8%±1.9%)和发育卵泡比例(41.2%±3.0%)与NC组(15.6%±6.2%,48.9%±4.2%)相比差异亦有统计学意义(P〈0.001,P〈0.05)。CR20%组卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例与NC组相比差异无统计学意义。结论长期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少发育卵泡和成熟卵泡的数量,从而减少卵泡的消耗,有益于生殖寿命延长。 相似文献