长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响

目的探讨长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响。方法 6月龄雌性SD大鼠30只,分为正常饮食组、能量限制(CR)20%组和CR40%组,记录正常饮食(NC)组每日摄食量,并将此摄食量的80%和60%分别喂养CR20%组和CR40%组大鼠,监测大鼠体重及动情周期变化,12个月后取大鼠卵巢。卵巢组织切片由苏木精-伊红染色,观察卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例。结果 NC组体重持续上升,而CR20%组体重小幅增加,CR40%组体重持续下降。CR40%组大鼠的卵泡储备数量(105.7±9.5)和原始卵泡数(55.0±6.8)与NC组(51.2±5.4,18.3±3.7)相比差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001),原始卵泡比例(52.1%±2.9%)与对照组(35.8%±5.5%)相比差异有统计学意义(P<0.001),而成熟卵泡比例(6.8%±1.9%)和发育卵泡比例(41.2%±3.0%)与NC组(15.6%±6.2%,48.9%±4.2%)相比差异亦有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。CR20%组卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例与NC组相比差异无统计学意义。结论长期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少发育卵泡和成熟卵泡的数量,从而减少卵泡的消耗,有益于生殖寿命延长。     

染料木素对成年及老年大鼠卵巢发育的影响

目的 探讨染料木素对中年、早期老年大鼠卵泡发育的影响.方法 用染料木素对4和10个月龄大鼠进行灌胃[160 mg/(kg·d)],连续用药4周后处死,分别取染料木素灌胃组(试验组)和对照组大鼠双侧卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,同时对9～10个月龄大鼠行阴道涂片,观察其动情周期变化,连续6周.结果 在染料木素灌胃组的4个月龄大鼠卵巢内原始卵泡、次级卵泡的比例升高,窦状卵泡、闭锁卵泡的比例下降;在染料木素灌胃组的10个月龄大鼠卵巢内原始卵泡、次级卵泡的比例升高,闲锁卵泡的比例下降,且灌胃组的10个月龄大鼠维持着规则的动情周期.结论 染料木素能延迟中年、早期老年期大鼠卵巢内原始卵泡发育启动,抑制各级卵泡闭锁,而可能有益于延长卵巢的生殖寿命.     

槲皮素对大鼠卵巢发育和卵巢寿命的影响

背景:研究发现一些植物雌激素可改变生殖系统发育,并可能最终影响生殖衰老的年龄.槲皮素是一种黄酮类物质,具有微弱的雌激素效应,但对卵巢卵泡发育和卵巢衰老进程究竟有无影响还不清楚.目的:观察槲皮素对大鼠卵巢卵泡发育和卵巢寿命的影响.方法:健康成年SD大鼠30只雌雄按2:1合笼所生的新生雌鼠,分为3组:母鼠灌胃组,对孕10.5 d母鼠槲皮素灌胃,1次/d,直至分娩,取1,2,4 d新生雌鼠;腹腔注射组,对正常出生后12 h内新生雌鼠槲皮素腹腔注射,1次/d,取2,4 d新生雌鼠:空白对照组:不进行任何干预的1,2,4 d新生雌鼠;观察新生鼠卵巢发育情况.另取12月龄雌性大鼠22只,以数字表法随机分为实验组和对照组:实验组用槲皮素灌胃4个月/1次/d.对照组灌胃给予生理盐水.对灌胃前和灌胃期间12月龄雌性大鼠行阴道涂片,观察大鼠动情周期模式:灌胃结束后,计算卵巢和子宫系数,苏木精一伊红染色观察各期卵泡发育情况和卵泡总擞变化.结果与结论:用槲皮索干预1,2 d龄新生大鼠未装配的卵泡均减少,而发育更晚期阶段的卵泡即原始卵泡或发育卵泡有所增加.灌胃前大部分大鼠动情周期已经不规则,用药后,随着大鼠年龄的增长,实验组与对照组显示了相似的动情周期变化:规则的动情逐渐消失,周期变得延长或不规则,灌胃结束时均以不规则动情为主.灌胃4个月后,实验组大鼠卵巢大部分由闭锁卵泡组成,另外可见少许原始卵泡、发育卵泡以及窦状卵泡和黄体,实验组窦状卵泡较对照组增加(P<0.05),两组卵巢和子宫系数及体质量增加无差异.提示槲皮素可能具有一定促进卵巢卵泡发育和成熟的作用,但不影响卵巢寿命.     

荷人肺腺癌裸小鼠血清癌胚抗原含量与瘤重的关系

用放射免疫双抗体法测定了荷第１１代人肺腺癌移植瘤裸小鼠的血清癌胚抗原（ＣＥＡ）含量。结果表明，荷瘤裸小鼠血清ＣＥＡ含量比对照组显著增加（分别为７７．３３±３５．１１ｎｇ／ｍｌ、９．６８±４．７４ｎｇ／ｍｌ），在瘤重量小于１ｇ时，ＣＥＡ含量与瘤重是非常显著的正相关（ｒ＝０．９０，Ｐ＜０．０１），在瘤重大于１ｇ时，血清ＣＥＡ含量增加缓慢。     

肥胖通过抑制SIRT1信号加速大鼠卵泡的发育与消耗

目的：研究肥胖与能量限制（CR）对大鼠卵泡发育和卵巢寿命的影响及其作用机制。方法：雌性SD大鼠随机分为对照（NC）组（自由取食）、高脂（HF）组（自由取食添加20%猪油的标准饲料）、CR组（摄食NC组70%的饲料）,每周测重,每天检测进食量和阴道涂片观察大鼠动情周期;苏木精-伊红染色观察卵泡发育和各级卵泡计数,Western blot检测SIRT1和其下游靶分子FOXO3a蛋白表达水平。结果：HF组体质量、内脏脂肪和卵巢质量均高于NC和CR组（P〈0.05）。HF组存活卵泡总数与NC组比无统计学意义,但原始卵泡数（22.1±0.7）及比例（10.3%±0.2%）相对于NC组（43.6±0.6,23.0%±0.2%）显著减少（P〈0.05）,而发育卵泡数（106.8±2.5 vs 81.0±1.8;P〈0.01）、闭锁卵泡数（79.2±0.9 vs 63.6±1.0;P〈0.01）和黄体数（36.1±1.4 vs 20.5±1.8;P〈0.05）均增多。CR组存活卵泡总数（138.9±1.2）、黄体数（28.6±1.5）和原始卵泡数（62.8±1.4）及比例（32.7%±0.4%）均显著增加,闭锁卵泡数（53.2±0.9）及比例（27.4%±0.3%）均减少。Western blot结果显示HF组卵巢SIRT1和FOXO3a蛋白表达低于NC组（P〈0.05）,而CR组SIRT1和FOXO3a表达高于NC组（P〈0.05）。结论：肥胖可能通过抑制SIRT1信号加速卵巢卵泡的发育与消耗,从而导致卵巢早衰;相反CR可能通过激活SIRT1信号抑制原始卵泡的发育启动以及各级卵泡的发育与闭锁,保持卵巢中卵泡的储备量,以此延长卵巢寿命。     

短期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响

目的：探讨短期能量限制对雌性大鼠生殖寿命的影响。方法：21只8周龄雌性sD大鼠随机分为对照组和能量限制组,并监测大鼠体质量及动情周期变化,8周后取大鼠卵巢,其切片由苏木精．伊红染色,观察存活卵泡数和不同发育阶段的卵泡比例。结果：对照组体质量持续上升,能量限制组较平缓。能量限制组健康卵泡（135．3．4±11．7）比对照组（90．7±7．1）多（P〈0．05）,原始卵泡数（57．7±7．7）与对照组（19．4±4．0）比显著增多（P〈0．001）,原始卵泡比例（41．9±2．9）比对照组（20．5±3．5）要多（P〈0．01）,而发育和成熟卵泡比例与对照组比则降低。结论：短期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少每个周期成熟卵泡的个数来降低卵泡消耗,有益于生殖寿命延长。     

NIH小鼠末稍血常规及肝肾功能正常值的测定

NIH小鼠是医学科研常用的实验动物,有关小鼠血常规及肝肾功能正常值的资料,由于品系,测量样本大小不同等因素,测量结果有差异。本文结合科研检测了320只成年健康NIH小鼠末梢血液常规和肝肾功能。材料和方法 1.动物由本院动物中心提供的NIH小鼠(2月龄)320只,雌雄各半,体重25-30g;小鼠均活泼,毛顺有光泽,尾、唇、掌红润。动物严格按清洁级要求饲养。 2.方法小鼠空腹时于尾端约0.5cm处断尾采血约0.3ml,然后用C-D610全血细胞     

阴道毛滴虫两个Sir2同源基因的克隆和功能

目的探讨寄生性原虫阴道毛滴虫细胞生长和衰老的相关基因。方法从阴道毛滴虫的cDNA表达文库中分离出两个与酵母沉寂信息调节因子（Sir2）有较高同源性的cDNA克隆,分别命名为TvSir2和TvSir2-like,它们的编码框分别长915bp和1116bp。结果序列分析显示这两个cDNA克隆与酵母Sir2同源性很高,其氨基酸序列中含有Sir2p及其同源蛋白三个特征性保守结构域。分别从这两株cDNA克隆中扩增出表达片段植入表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coli BL21并用IPTG（isopropylthio-β-D-galactoside）诱导表达到大量融合蛋白。用亲和层析法纯化的融合蛋白分别免疫豚鼠,获得的抗血清用Western-blot法识别到滴虫虫体全蛋白中大小为34000Mr和42000 Mr的条带。免疫荧光法检测TvSir2和TvSir2-like蛋白位于细胞核外的内质网和高尔基复合体区域。结论TvSir2和TvSir2-like克隆是酵酶Sir2的同源基因,为TvSir2和TvSir2-like在模式生物阴道毛滴虫的功能研究奠定了基础。     

用人食管鳞状细胞癌移植建立裸小鼠移植瘤模型

将６例人食管癌的手术切除组织移植于ＮＩＨ裸小鼠皮下，其中３例移植成功并能传代，建成３株人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤，其病理组织学特点均与原人体肿瘤相似，染色体分析显示人类恶性肿瘤特征，电镜下形态属鳞状细胞癌，移植瘤中证实有人Ａｌｕ序列在，表明它们来源于人类组织。３年多来３株移植瘤生长稳定，传代成功率达１００％。     

酵母双杂交诱饵蛋白LASS1合表达质粒的构建及鉴定

目的构建酵母双杂交系统诱饵蛋白大鼠LASS1融合表达质粒，为进一步筛选大鼠脑神经元内与LASS1p相互作用的蛋白奠定基础。方法应用PCR方法获得大鼠LASS1基因2个片段，分别克隆人酵母双杂交系统诱饵蛋白质粒载体pGBKT7，转染酵母菌AH109并检测重组质粒的自激活现象及毒性。利用Western印迹检测重组质粒在AH109的表达情况。结果LASS1基因的PCR产物片段大小分别为Flag（111bp）、Slag（109bp）；Western印迹结果表明2个重组质粒表达的蛋白均可以与抗c-Myc抗体在22ku处特异性反应；重组质粒转化酵母后无自激活作用。结论重组质粒pGBKT7-Flag、pGBKT7-Slag均能够存AH109内正确表达，可作为酵母双杂交系统诱饵蛋白使用。