毒蕈胆碱M_1受体激动剂的高通量筛选模型

目的　建立毒蕈碱样胆碱M1 受体激动剂的高通量筛选模型 ,以此模型进行M1 受体激动剂筛选。方法　将M1 受体基因质粒 (M1 /pCDNA3 1 )与报告基因质粒 (3×CRE/ 3×MRE/SRE LUC)按 1∶5的比例共转染HEK2 93 ,建立了一个稳定的M1 受体激动剂报告基因筛选细胞株。配体与细胞表面M1 受体结合后 ,激活相应的信号通路 ,调节报告基因的表达 ,通过测定荧光酶素报告基因表达水平的变化 ,评估配体激活M1 受体的生物活性。结果　通过对筛选条件 ,如细胞数目、荧光素酶表达时间、底物浓度的优化 ,建立了可靠的筛选方法 ,并对多种抗衰老中药水提物进行了筛选 ,找到 3种对M1 受体有活性的中药。结论　该系统能准确、稳定、有效地应用于M1 受体激动剂的高通量筛选     

肿瘤疫苗研究进展

0 引言 肿瘤是威胁人类生命健康的疾病,对肿瘤的预防和治疗也是全世界研究的热点,随着医学的不断发展和科技的进步,肿瘤治疗的方式也开始出现多元化,目前最引人注目的 就是肿瘤疫苗的研究.     

固定多粘菌素B的新型吸附剂对血液中细菌内毒素吸附性能的实验研究

研究了固定有多粘菌素B（Polymyxin B,PMB）短肽的聚苯乙烯微球对血浆中细菌内毒素的亲和吸附性能，讨论了不同吸附条件对吸附性能的影响。用纯种大白鼠作为实验动物，建立内毒索血症动物模型。用固定有PMB短肽的聚苯乙烯微球对动物模型进行血液灌流实验，观察该吸附剂血液灌流清除血浆中内毒素的功效，考察了接有PMB短肽的聚苯乙烯微球的血液相容性及其对蛋白的影响。实验结果表明。采用血液灌流吸附疗法成功地清除动物模型血液中的内毒素，而且，固定有多粘菌素B的特异吸附剂具有良好的血液相容性。     

整合素β1亚单位对肝癌细胞与层黏连蛋白趋化行为的影响

目的 研究整合素β1亚单位对肝癌细胞与层黏连蛋白(LN)趋化行为的影响。方法 采用双微吸管实验法进行肝细胞癌(HCC)细胞趋化实验，在两侧微管内加入相同浓度(50μg／ml，200μg／m1)的LN，并引导微管尖端与同-HCC细胞紧密接触，动态观察细胞两侧伪足形成过程；当两侧微管LN浓度为200μg／ml，在一侧微吸管内加入针对整合素β1亚单位(CD29)的单克隆抗体(Anti—CD29)20μg／m1，考察β1整合素亚单位阻断对HCC细胞伪足形成的影响。利用流式细胞仪对Hcc细胞表面整合素β1亚单位的表达进行分析。结果 两侧微吸管加入相同浓度的LN，细胞向两侧微吸管两侧均有伪足形成；随作微吸管内LN浓度的增加，细胞伪足增加，且两侧微吸管内伪足的变化基本呈对称性；在此基础上，微吸管加入Anti—CD29的一侧，HCC细胞伪足生长曲线呈现明显的抑制，而未加入Anti—CD29的微吸管一侧与加入的对侧相比，该侧细胞的伪足明显增加。流式细胞仪分析表明，所研究细胞整合素β1亚单位表达率达95．78％。结论 整合素β1亚单位是联系HCC细胞与HCC细胞对LN趋化性伪足形成的重要受体基础。     

关于针刺治疗脑缺血疾病机制中血管新生途径的新思路

在针刺治疗脑缺血疾病临床疗效机制的研究中,内皮祖细胞等存在于成体内的干细胞参与机体损伤修复的作用已成为当前组织工程研究的热点之一。资料显示,针刺可以从多种途径缓解和改善脑缺血带来的损伤且具有明显的治疗效果,而血管新生可能是其中的重要途径之一。缺血性损伤会导致内皮祖细胞参与血管新生修复,多种细胞因子在这一过程中发挥作用,它们可动员并诱导内皮祖细胞归巢。现有研究表明,针刺可以影响其中部分因子的表达,这种内在联系为针刺治疗脑缺血机制的认识开辟了新的思路。     

人、Wistar大鼠、昆明小鼠成骨细胞粘弹性的测量

目的:测量人、Wistar大鼠、昆明小鼠成骨细胞粘弹性,并对测量结果进行比较.方法:利用微管吸吮技术(Micropipette aspiration technique),测量人、Wistar大鼠、昆明小鼠成骨细胞在负压作用下的变形,把成骨细胞简化成为标准粘弹性固体,通过相应的力学计算和计算机图像处理,获得成骨细胞的粘弹性.结果:人成骨细胞的刚度远大于鼠成骨细胞的刚度,Wistar大鼠成骨细胞的刚度则大于昆明小鼠成骨细胞的刚度,但二者属于同一数量级.     

细胞内趋化因子重组突变体SDF-1α/54/KDEL的构建及其对CXCR4受体在细胞膜表面表达的抑制作用

构建人基质细胞衍生因子(SDF-1)突变体SDF-1α/54/KDEL重组真核表达质粒,并考察其对T细胞性白血病细胞株Molt-4细胞表面受体CXCR4表达的影响,为尝试表型敲除肿瘤细胞CXCR4以抑制肿瘤的转移提供理论和实验依据.以SDF-WT-Gly×4-Dec/PET30a( )质粒为模板,用PCR法扩增出SDF-1α/54并将其亚克隆至真核表达质粒pEGFP-C3构建成真核表达载体pEGFP-C3/SDF-1α/54/KDEL.经酶切及测序验证后,脂质体介导转染入COS-7细胞,通过Western blot检测SDF-1α/54/KDEL的表达.电穿孔法将重组载体瞬时转染CXCR4高表达的Molt-4,并用流式细胞仪检测CXCR4含量的变化.DNA测序证明:读码框完全正确,重组真核表达载体含有SDF-1α/54基因和编码4肽KDEL的基因,Western blot证明融合蛋白能在COS-7细胞表达.电穿孔转染Molt-4细胞后发现,SDF-1α/54/KDEL可以显著降低胞膜表面CXCR4表达量.由此提示: KDEL介导的SDF-1α/54对Molt-4细胞CXCR4具有表型敲除作用,且此效应不受SDF-1α C端α螺旋缺失的影响.     

关于血管内皮细胞膜张应力累加效应的实验研究

冯元桢等的理论分析表明 ,在一定条件下血管内皮细胞膜张应力会逆血流方向累加。此结果意义重大 ,但实验验证尚难。本文试图通过不同长度的内皮细胞单层的Invitro实验为此求得一种证据。人胚肾小球血管内皮细胞 (HGVEC)单层暴露在平面剪切流场中 (切应力水平为 0 .4 5N/m2 ) 2 4h ,两种不同长度 (10cm和 6cm)单层内皮细胞的内皮素 (ET 1)累积分泌量、平均分泌速率、最大分泌速率、最小分泌速率及分泌率变异系数以及血管紧张素II(ATII)的累积分泌量、平均分泌速率等均有显著差异。其中 ,在前述两种长度下 ,平均分泌率比值 ,ET 1为 2 .7∶1,ATII为 1.5∶1。而在 0 .6 5N/m2 切应力作用 10h条件下 ,相应的比值同为 1.5∶1。本试验结果表明在相同切应力条件下 ,单层内皮细胞长度与其蛋白质代谢有密切的相关 ,进而从一个侧面证明血管内皮细胞膜张应力存在累加效应。