低氧反应元件对缺血心肌转染人血管内皮生长因子165基因表达的调控作用

目的 观察低氧反应元件(HRE)对低氧、复氧心肌细胞及缺血心肌转染人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因表达的调控作用.方法 分离新生SD大鼠心肌细胞,采用不同氧条件进行培养;建立猪心肌缺血一复灌动物模型,将在HEK293T细胞包装后获得的rAW-9HRE.hVEGF165病毒分别转染心肌细胞及动物缺血心肌.取培养心肌细胞及培养液,另取缺血区心肌组织,采用细胞免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot方法 分别测定hVEGF165蛋白表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定hVEGF165 mRNA表达;Ⅷ因子染色,计数缺血心肌新生血管变化.结果 病毒转染率为87%;心肌细胞A、B及E组培养液中hVEGF165蛋白含量显著升高(P＜0.01),细胞免疫荧光hVEGF165蛋白染色呈阳性;RT-PCR检测显示,心肌细胞A、B及E组可见484 bp目的 条带;在动物整体水平,与转基因缺血组比较,转基因复灌组hVEGF165 mRNA及蛋白表达显著减弱(P＜0.01),心肌毛细血管密度亦减少.结论 HRE作为氧敏感基因调控开关能有效地调控缺血心肌转染hVEGF165基因的表达.     

心肌急性梗死对骨髓及外周血心肌转录因子Nkx2-5的影响

目的观察小鼠心肌梗死后，骨髓及外周血单核细胞心肌特异性转录因子Nkx2-5的变化。方法用大剂量异丙肾上腺素（10mg／kg）连续注射3天造成小鼠心肌急性缺血性梗死模型，第3天注射后30min，通过眼球摘除法取外周血，分离双后肢股骨、胫骨，冲洗骨髓腔得骨髓液，经密度梯度离心分离出骨髓及外周血单核细胞，正常组同心肌缺血梗死组。通过细胞Western blotting分析，比较正常组和心肌梗死组骨髓及外周血单核细胞中心肌特异性转录因子Nkx2-5的变化。结果正常骨髓单核细胞中存在Nkx2-5的表达，正常外周血单核细胞中Nkx2-5无表达；心肌梗死后骨髓及外周血Nkx2-5表达均明显增加，同正常组比较有统计学意义，P〈0．05。结论正常骨髓中无需培养或诱导即存在表达Nkx2-5的单核细胞，在心肌急性梗死后向外周血动员增加。     

低氧反应元件对缺血心肌转导hVEGF165基因表达的调控

目的 探讨低氧反应元件（hypoxic response element,HRE）对缺血、复灌心肌转导人血管内皮生长因子165（human vascular endous growth factor 165, Hvegf165）基因表达的调控作用.方法 在猪冠状动脉回旋支起始处以钛夹阻断回旋支血流,建立可复灌的心肌缺血模型.携带9拷贝HRE（9HRE）-Hvegf165的腺相关病毒转染模型心肌,转染后4天,复灌组二次开胸打开钛夹恢复缺血区血供.取各组心肌组织,RT-PCR法测定hVEGF165mRNA的表达情况;免疫组化及免疫印迹法测定Hvegf165蛋白的表达情况;Ⅷ因子免疫组化染色检测局部毛细血管情况.结果 缺血心肌转导Hvegf165基因后,Hvegf165蛋白表达量明显增高,而复灌组表达明显减少（P＜0.01）.结论 9HRE作为调控缺血心肌组织内转导的Hvegf165基因的氧敏感开关灵敏、高效,使Hvegf165基因在缺血时高度表达,而复灌后表达水平下降.     

60Co-γ射线全脑常规照射后大鼠血脑屏障的电镜观察

目的:观察60Co-γ射线全脑常规照射后大鼠血脑屏障(BBB)的超微结构改变。方法:20只SD大鼠随机分为5组,依次为对照组、10 Gy组、20 Gy组、30 Gy组和40 Gy组,每组4只。60Co-γ射线全脑常规照射,2 Gy.次-1,5次.周-1,照射后16 h用镧示踪电镜化学技术观察大鼠BBB超微结构的变化。结果:对照组镧颗粒局限在血管腔内;10 Gy组紧密连接处见镧颗粒沉积;20 Gy组镧颗粒弥漫性地分布于神经细胞间隙;30 Gy组镧颗粒进入神经细胞内,并分布于线粒体、内质网等细胞器表面;40 Gy组镧颗粒弥漫分布于脑组织细胞间和细胞内,可见毛细血管内皮细胞及神经细胞失去正常形态,结构破坏。结论:全脑常规外照射后大鼠BBB均出现病理改变,且射线具有降低及破坏BBB功能的作用,在全脑放疗期间随照射剂量的变化而呈规律性改变,具有可预测性。     

早期游泳对新生儿生理参数改变的观察

目的观察产后早期游泳对新生儿生理参数的改变,探讨早期游泳对新生儿生长发育的作用。方法收集260例阴道分娩的足月正常新生儿,随机分成2组:研究组140例,住院期间给予沐浴+游泳;对照组120例,住院期间给予沐浴,分别观察2组新生儿胎便排出时间、胎便转黄时间、体质量及黄疸指数。结果研究组新生儿初次胎便排出时间、胎便转黄时间较对照组明显提前,研究组新生儿血清总胆红素较对照组明显降低,2组比较有显著性差异。而比较2组新生儿产后第5天体质量无显著性差异。结论产后早期游泳能加快新生儿胎便的排出及转黄,促进消化系统的功能,降低新生儿生理性黄疸,有益于新生儿的生长发育,但能否增加新生儿体质量尚待进一步观察。     

胰腺缺血再灌注损伤大鼠胰腺腺泡细胞超微结构的观察

目的　探讨胰腺缺血再灌注 (ischemia -reperfusion ,IR)损伤时胰腺腺泡细胞超微结构的改变及可能机制。方法　 2 4只大鼠随机分为 3组 :假手术组、IR 1h组、IR 6h组。测定血淀粉酶、脂肪酶 ,了解胰腺外分泌功能 ;光镜、电镜观察胰腺组织结构改变。结果　各手术组淀粉酶和脂肪酶含量均较假手术组明显增加 ,6h时增加更显著 (P <0 .0 1)。胰腺组织光镜下IR 1h组呈现急性水肿性胰腺炎表现 ,IR 6h组损伤加重 ,出现出血、坏死 ;电镜下IR 1h组内质网、线粒体、高尔基复合体肿胀 ,IR 6h组细胞器损伤进一步加重 ,可见自噬体和自噬空泡显著增多。结论　胰腺IR 1h时表现为急性水肿性胰腺炎 ,再灌注 6h发展为出血坏死性胰腺炎。胰腺IR 1h电镜下主要表现为细胞器肿胀 ,再灌注 6h特征性改变为自噬小体显著增多。     

常温缺血预处理对幼兔未成熟心肌的保护作用

目的研究常温缺血预处理(IP)对幼兔未成熟心肌的保护作用。方法将24只幼兔分为四组。组1IP1次;组2IP2次;组3IP3次;对照组。应用Langendorff心脏灌注方法,对3～4周龄幼兔离体心脏实施不同次数的5分钟缺血、5分钟再灌注的常温IP,常温缺血45分钟,再灌注30分钟。于平衡灌注末、缺血前、再灌注3分钟、5分钟、10分钟、20分钟和30分钟分别测定左心室发展压(LVDP)、左心室最大上升及下降速率(±dp/dtmax),再灌注末测定心肌组织三磷酸腺苷(ATP)含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果再灌注30分钟时,组1和组2LVDP、+dp/dtmax恢复率显著高于对照组（P<0.05,P<0.01）,组3LVDP、±dp/dtmax的恢复率与对照组比较差别无显著性意义。再灌注末组1、组2和组3心肌ATP含量显著高于对照组（P<0.05）。组2MDA含量显著低于组1、组3和对照组（P<0.05）。结论IP对未成熟心肌具有保护作用,其中2次IP的保护作用最好,而3次的保护作用减弱,表明IP对未成熟心肌的保护作用具有饱和效应和累计现象。     

在半固体培养基上制备单克隆抗体

最近,我们在半固体培养基上成功地建成了抗人体绒毛膜促性腺激素(hCG)及抗人体黄体生成素(hLH)两种单克隆抗体细胞株,制备了相应的单克隆抗体。其要点是将融合细胞悬浮于15ml IMDM培养基(含53.3％胎牛血清、2.66％HAT、8×10~6胸腺细胞/ml、133μg/ml脂多糖)中,再与25ml含2％甲基纤维素的IMDM培养基充分混匀,分装至直径35mm的塑料平皿中,每皿1.5ml,37℃,CO_2孵箱内培养。1周后,即可在每个平皿上看到近百个细胞集落。将各细胞集落挑至96孔板中再培养,并用ELISA检测,就可筛选出阳性克隆,进而建立单抗细胞株。与目前沿用的有限稀释法比较,半固体培     

苄普地尔与山莨菪碱合用对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

卡普地尔与山莨菪碱合用对结扎大鼠冠脉左室支造成心肌缺血再灌注损伤的保护作用。两药同时合用可降低缺血再灌性心律失常发生率;明显提高复灌后心肌超氧物歧化酶活性及显著减轻心肌超微结构损伤。表明两药合用有协同作用,较单用苄普地尔或山莨菪碱疗效好。