大鼠PEDF基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的 构建针对大鼠PEDF 基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体并进行鉴定,探讨PEDF基因对缺血心肌血管新生的影响.方法 构建PEDF基因过表达质粒,测序鉴定.针对PEDF基因不同干扰靶点构建4种RNAi 病毒载体质粒pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA,测序鉴定.过表达质粒和RNAi质粒共转染293T细胞后应用Western blot方法进行外源筛靶确定PEDF基因RNAi 有效靶序列.有效RNAi 病毒质粒和其他3种辅助包装原件载体质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞,培养48 h后, 收集细胞培养上清液,将其浓缩后用孔稀释法测定病毒滴度.结果 过表达质粒及4种RNAi质粒构建成功.Western blot外源筛靶显示2个靶点能有效敲减目的基因的表达.PEDF shRNA慢病毒表达载体Serpinf1-RNAi-LV经293T细胞包装成功,收集293T细胞分泌的病毒上清测定浓缩病毒悬液的滴度为2×1012Tu/L.结论 成功构建了PEDF基因的RNAi慢病毒载体,为研究PEDF基因对缺血心肌血管新生的影响打下基础.     

川芎嗪对大鼠被动型Heymann肾炎病变的影响

建立ＳＤ大鼠典型的被动型Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＰＨＮ）模型,观察川芎嗪对肾内血栓素Ａ２（ＴｘＡ２）．前列环素Ｉ２（ＰＧＩ２）及ＴＸＡ２－ＰＧＩ２平衡的影响。结果表明：川穹嗪能够降低大鼠尿中的ＴＸＡ２而提高ＰＧＩ２的含量。此外,对于减少尿蛋白的分泌及肾组织学的损伤也有一定的作用。提示川芎嗪可用于ＰＨＮ病变的防治。     

护理标识在颈肩腰腿痛科的应用及体会

通过制作护理标识并在科室规范统一使用,护理安全隐患明显降低,护士在工作中的风险亦大大降低,确保了工作质量及护理安全的有序落实,保证了护理人员及患者的安全。     

hVEGF165/Ang-1联合转染对兔缺血心肌血管再生的影响

目的 探讨VEGF/Ang-1基因联合转染对缺血心肌区域血管再生及血管成熟的影响.方法 建立兔心肌缺血模型,实验动物随机分为5组(每组5只):hVEGF165/Ang-1双基因联合转染组(A组),hVEGF165单基因转染组(B组),Ang-1单基因转染组(C组),单纯梗死组(D组),正常对照组(E组).冠状动脉左前降支(LAD)结扎后在缺血心肌区域直接注射的方法转染 rAAV-9HRE-hVEGF165和(或)rAAV-TRE-Tight-Ang-1;Fitc-lectin和α-SMA免疫荧光染色,观察缺血心肌区域血管新生及成熟情况.结果 与B、C、D组相比,A组Fitc-lectin和α-SMA阳性血管数量显著增多(P<0.05).结论 与单一促血管生成基因转染比较,hVEGF165/Ang-1双基因联合转染可改善兔心肌梗死区域血管再生.     

SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。方法以重组SARS—CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体。通过间接酶联免疫分析、间接免疫荧光、免疫双向扩散等方法鉴定抗体的特异性、亲和力、类型及亚类、配对效果等。结果共获得15个阳性克隆,其中10个与天然SARS-CoV呈阳性反应。10株单抗的相对亲和常数在108～109mol／L^-1之间;10株中有1株为IgG2b。、1株为IgG3,其余均为IgG1;10株单抗中有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与流感病毒A、B,副流感病毒有交叉反应,1株与流感病毒A、B有交叉反应;10株单抗中的5株可形成5种配对,其中两种配对用于检测重组SARS病毒N蛋白,灵敏度可达1μg/L。结论获得了特异性针对SARS冠状病毒N蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测SARS-CoVN蛋白的酶联双抗体夹心法,为SARS的早期诊断、蛋白质组学的研究奠定了基础。     

防污染超薄切片染色法的改进

超薄切片的电子染色是电镜生物样品制备的常规操作之一。目前许多实验室使用的仍是Reynolds介绍的柠檬酸铅染色液。此染液可使切片获得较好的反差,但染色过程形成的污染却时常难以避免。近年来国内有些实验室采用了一些新染色法,提高了染色效率,降低了污染的形成,们同时也存在着操作繁锁,需特殊装置等问题。1988年我们实验室在这些染色方法的基础上,经改良,建立了一种极简便的染色方法。此法染色效率高,防污染效果确切,所需装置制作方便,操作简单,介绍如下:     

氧自由基在缺血预处理对未成熟心肌延迟性保护机制中的作用

目的　探讨氧自由基 (OFRs)在缺血预处理 (IP)对未成熟心肌延迟性保护 (第二窗 )机制中的作用。方法　 3～ 4周龄的幼兔 30只 ,随机分为 5组 (n =6 ) :Ⅰ组 ,正常对照组 ;Ⅱ组 ,缺血 再灌注损伤组 ;Ⅲ组 ,单纯IP组 ;Ⅳ组 ,IP +L -精氨酸 (L -arginine ,30 0mg kg)组 ;Ⅴ组 ,IP +L -硝基精氨酸甲酯 (L -NAME ,10mg kg)组。建立幼兔活体心脏缺血预处理及缺血 再灌注损伤模型 ,监测左心室血流动力学变化 ,化学比色法检测心肌一氧化氮合酶 (NOS) (iNOS eNOS)活性 ,同时测定SOD活性及MDA含量。结果　缺血预处理 2 4h后 ,各组间的LVDP、±dp dtmax无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;缺血 再灌注 6 0min ,Ⅱ组和Ⅳ组的LVDP、+dp dtmax、-dp dtmax恢复率低于Ⅲ组和Ⅴ组 (P <0 .0 1)。缺血前 ,Ⅲ组和Ⅴ组的iNOS活性高于Ⅱ组和Ⅳ组 (P <0 .0 5 ) ;再灌注 6 0min ,Ⅲ组和Ⅴ组的eNOS活性高于Ⅱ组和Ⅳ组 (P <0 .0 5 )。缺血前和再灌注末 ,Ⅲ组和Ⅴ组的SOD活性高于Ⅱ组和Ⅳ组 (P <0 .0 5 )。结论　OFRs对IP延迟性心肌保护起到了“触发物”的作用 ,而iNOS的升高可能仅是炎性反应标记物 ,eNOS活性的升高可能是形成第二保护窗 (SWOP)的原因之一 ,外源性NO取消了SWOP的形成 ,可能与其清除了OFRs有关。     

钙调素在脑缺血与再灌注时含量和分布的变化

本文采用ELISA和免疫胶体金标记电镜技术,研究了蒙古沙土鼠急性脑缺血及再灌注后CaM的含量和分布变化。ELISA测定结果;结扎双侧颈总动脉10分钟后,CaM含量较正常组显著降低(P<0.01),再灌注20分钟,CaM含量较缺血10分钟组显著降低(P<0.01),免疫胶体金电镜观察表明,缺血组和缺血再灌组每个视野胶体金颗粒数明显低于正常组(P<0.01),在缺血神经元突触附近,可见胶体金颗粒明显减少。     

乌鲁木齐县达坂城地区碘缺乏病防治现状

乌鲁木齐县达坂城地区碘缺乏病防治现状何鸿超，张福源，关保齐，崔新春，董红燕，刘玉梅（乌鲁木齐县卫生防疫站８３００１１）林法福，王峰锐，赵红星，杨成忠，马丽（新疆地方病防治研究所乌鲁木齐８３０００２）一、达坂城地区碘缺乏病历年监测情况达坂城碘缺乏病（Ｉ...     

ER和PR在甲状腺乳头状癌的表达及意义

目的 探讨雌激素受体（ER）、孕激素受体(PR)在甲状腺乳头状癌中的表达以及ER、PR与肿瘤生物学特征的关系。方法 取新鲜甲状腺乳头状癌标本69例,结节性甲状腺肿7例,用免疫酶组织化学方法检测ER、PR的表达。分析受体与肿瘤生物学特征的关系。结果 在甲状腺乳头状癌中ER和PR的表达率分别为52.17%和46.38%,结节性甲状腺肿没有ER和PR表达,ER和PR的表达与患者性别、肿瘤大小以及MACIS评分无关,但是PR和肿瘤浸润甲状腺包膜以及淋巴结转移成正相关（P＜0.05）,ER与患者年龄成负相关。结论 甲状腺乳头状癌中ER、PR的表达高于结节性甲状腺肿,甲状腺乳头状癌中PR的表达反应肿瘤浸润甲状腺包膜和淋巴结转移情况,ER表达随着患者年龄增加而减少。