乳酸血症和脑卒中样发作为主要临床表现的线粒体脑肌病(附1例报道)

目的报道线粒体脑肌病伴高乳酸血症和脑卒中样发作(MELAS)病1例,进行相关文献复习,探讨其临床表现、生化、影像学和组织病理学检查在该疾病诊断中作用。方法对线粒体脑肌病伴高乳酸血症和脑卒中样发作(MELAS)患者的临床表现、辅助检查、影像学、组织病理学、免疫组化等情况进行分析。结果 MELAS患者的主要临床表现为发作性头痛、脑卒中样发作、高乳酸血症;脑MRI示病灶位于顶叶、枕叶、颞叶脑回处;肌肉活检见肌纤维变性、破碎样改变以及异常线粒体。结论血乳酸、影像学及肌肉活检在诊断MELAS时有重要的诊断价值,但都缺乏特异表现,需要结合临床和各种检查结果而确诊。     

痘苗病毒辅助的重组丙型肝炎病毒生产体系中生产细胞的选择

目的:探讨痘苗病毒辅助的重组丙型肝炎病毒制备体系中生产细胞的选择.方法:将已构建好的质粒pT7HCV及pVHCV分别共转染BHK21,HepG2,SMMC7721细胞株,4 h后用痘苗病毒感染细胞,96 h后用RT-PCR检测HCV的RNA表达.用荧光定量PCR方法检测培养上清中RNA的拷贝数,并用Western blot检测结构蛋白E2以及非结构蛋白NS5的表达.结果:PT-PCR检测到各细胞株培养上清中均有HCV的RNA的存在,定量PCR显示RNA的拷贝数在BHK21,HepG2,SMMC7721细胞中的产量分别为(2.974±0.8)×107,(1.99±0.17)×105,(1.19±0.17)×105(copies/mL).Western blot检测到在这3种生产细胞中均有HCV非结构蛋白NS5的表达.结论:BHK21,HepG2,SMMC7721细胞株均可生产出重组丙型肝炎病毒颗粒,且以BHK21为生产细胞株时产量最高.     

穴位注射联合刮痧治疗小儿遗尿60例临床观察

目的：观察穴位注射联合刮痧治疗小儿遗尿的近期及远期疗效。方法：将120例患儿分为2组各60例,治疗组采用黄芪注射液穴位注射联合刮痧治疗,对照组采用口服甲氯芬酯（遗尿丁）治疗。比较2组近期及远期疗效。结果：近期疗效治疗组治愈率为76.67%,总有效率为91.67%;对照组治愈率为60.00%,总有效率为76.67%;2组治愈率、总有效率分别比较,差异均有显著性意义（P〈0.05）;远期疗效治疗组治愈率为55.00%,总有效率为78.33%;对照组治愈率为43.33%,总有效率为61.67%,2组治愈率、总有效率分别比较,差异均有显著性意义（P〈0.05）。结论：穴位注射联合刮痧治疗小儿遗尿的近远期治疗效果可靠,值得临床广泛应用。     

RhoE在小鼠中枢神经系统通过NF-κB信号通路调节神经细胞凋亡

目的 探讨RhoE对神经细胞凋亡的作用及可能的相关机制。方法 用免疫组织化学染色、Q-PCR和免疫印迹等方法检测RhoE^-/-及RhoE^+/+小鼠脑组织内RhoE、Caspase3和P65蛋白表达水平。结果 RhoE^-/-小鼠脑组织内无RhoE蛋白表达; RhoE^-/-小鼠多部位脑组织cleaved-Caspase3表达水平较RhoE^+/+小鼠显著降低(P<0.05); 同时RhoE^-/-小鼠脑组织内P65蛋白表达水平较RhoE^+/+小鼠显著增高(P<0.05),但mRNA水平无明显改变(P>0.05)。结论 RhoE在小鼠中枢神经系统内可能通过NF-κB信号通路中P65蛋白表达水平来调控神经元的凋亡; RhoE可能是一个新的神经元凋亡调控位点。     

大鼠早期局灶性脑缺血再灌注损伤中USP10的表达水平变化及其与自噬的关系

目的 探讨早期局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型中再灌注不同时间点USP10的表达水平变化及其与自噬的关系。方法 将36只成年雄性SD大鼠随机分成4组:假手术组、脑缺血2 h再灌注6 h模型组、脑缺血2 h再灌注12 h模型组、脑缺血2 h再灌注24 h模型组; 采用线栓法致大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,给予神经行为学评分,用TTC染色法测定脑梗死体积,透射电镜观察梗死周边区皮层神经元自噬,Western blot 法检测梗死周边区皮层USP10和自噬相关蛋白LC3B的表达水平,免疫荧光双标法检测梗死周边区皮层神经元中USP10及LC3B的表达水平变化。结果 免疫荧光双标显示模型组自噬蛋白阳性细胞数与存活神经元数均于再灌注12 h最多(P<0.05),二者某种程度上趋势一致; Western blot免疫荧光双标均显示与假手术组相比,USP10及LC3B蛋白在模型组中表达上调(P<0.01),且于再灌注12 h组达到高峰(P<0.05); 透射电镜显示再灌注不同时间点自噬强度的变化与免疫荧光自噬蛋白表达水平的趋势基本一致。结论 早期脑I/R损伤中自噬的激活某种程度上可减轻神经元的损伤,而USP10可能通过某种机制调控脑I/R中自噬的发生发展。     

华支睾吸虫合并HBV感染对肝星状细胞和巨噬细胞作用的体外研究

目的华支睾吸虫合并HBV感染对肝星状细胞和巨噬细胞的作用。方法以华支睾吸虫分泌排泄蛋白(CsESP)(10μg/mL)合并HepG2.2.15细胞(5×10~5个)共孵育人肝星状细胞(LX-2),同时设10μg/mL CsESP、5×10~5个HepG2.2.15单独处理组和PBS组。荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组肝纤维化相关指标α-平滑肌蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ的转录水平;利用CsESP(10μg/mL)合并乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)(5μg/mL)共同刺激巨噬细胞RAW264.7细胞,同时设10μg/mL CsESP、5μg/mL HBeAg单独处理组和PBS组,qRT-PCR法检测各组一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、NLRP3炎症小体、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况,同时使用流式细胞术检测其凋亡水平变化。结果 qRT-PCR法检测结果显示,CsESP合并HepG2.2.15处理组中LX-2细胞α-SMA和Collagen-Ⅰ的m RNA水平与CsESP或HepG2.2.15单独处理组相比显著上升,差异有统计学意义(P0.05),而Collagen-Ⅲ表达变化不明显。CsESP与HBeAg共处理诱导RAW264.7细胞中NLRP3、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α和iNOS的mRNA水平与CsESP或HBeAg单独刺激组相比显著上升,差异有统计学意义(P0.05)。CsESP与HBeAg共处理组凋亡细胞比率为16.35%,明显高于CsESP、HBeAg单独处理组的6.03%和12.52%,差异有统计学意义(P0.05)。结论华支睾吸虫合并HBV感染体外可促进肝星状细胞的激活,并可促进巨噬细胞炎症因子的释放及细胞凋亡,可能促进肝脏炎症、肝纤维化的进展。     

Rnd3在中枢神经系统对IL-8的调控作用及其机制

目的:探讨小GTP酶蛋白家族成员Rnd3对白细胞介素-8(IL-8)的调控作用,及可能的调控位点及机制。方法:通过免疫荧光染色、q-PCR、免疫印迹等方法检测Rnd3-/-及Rnd3+/+小鼠脑组织内IL-8表达量改变;通过转染siCtrl,siRnd3,myc,myc-Rnd3至PC12细胞,构建体外Rnd3低表达/高表达细胞模型,通过q-PCR、荧光素酶检测、免疫印迹检测PC12细胞内IL-8表达活性及表达量的改变。结果:Rnd3-/-小鼠脑组织内IL-8表达量较Rnd3+/+小鼠增高。在转染Rnd3小干扰片段至PC12细胞致Rnd3低表达后,IL-8的mRNA和蛋白水平较siCtrl组明显升高(P<0. 05)。较myc组,myc-Rnd3组细胞内IL-8的mRNA和蛋白水平明显降低(P<0. 05)。提示Rnd3可能通过转录前水平调控IL-8的表达量。结论:Rnd3在神经细胞内与IL-8表达量呈负相关,可能在mRNA或蛋白水平对IL-8进行调控,是一个新的IL-8调控位点。