丙戊酸钠通过EGFR下调CD44表达抑制胶质瘤细胞生长

目的:探讨丙戊酸钠通过抑制A172胶质瘤细胞表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的活化,下调CD44表达,进而调节细胞生长的机制。方法:实时荧光定量PCR和Western blot检测A172胶质瘤细胞中CD44以及siRNA下调CD44表达的情况,MTT检测CD44和丙戊酸钠对细胞生长的影响,Western blot检测丙戊酸钠对细胞中p-EGFR、EGFR和CD44表达影响。结果:丙戊酸钠抑制A172胶质瘤细胞生长,并具有浓度依赖性。A172胶质瘤细胞表达CD44,siRNA下调CD44表达后,细胞生长较正常组显著减缓。活化EGFR促进A172胶质瘤CD44蛋白表达,而EGFR的抑制剂Lapatinib可显著抑制上述效应。丙戊酸钠抑制EGFR磷酸化,下调CD44蛋白表达。结论:丙戊酸钠抑制A172胶质瘤细胞的生长。抑制A172胶质瘤细胞中EGFR的活化,下调CD44的表达,是丙戊酸钠抑制胶质瘤细胞生长的其中一个机制。     

酶联免疫吸附试验中HBsAg室内质控参考品的制备和应用

目的建立室内质控参考品以鉴别诊断试剂的质量和控制操作误差,提高乙型肝炎病毒表面抗原的检测准确度。方法以国家标准品为标准制备灵敏度系列参考品、特异性参考品及精密性参考品。检测其稳定性,并进行同厂家、不同批号试剂的比较及不同厂家、三批试剂的比较。结果制备的室内质控参考品在-20℃与4℃保存3～4周检测结果无统计学差异。采用同一厂家、不同批号的HBsAg诊断试剂检测室内质控参考品,结果无统计学差异。采用不同厂家、同一批号的HBsAg诊断试剂检测结果有统计学差异。结论我们建立的室内质控参考品适宜作HBsAg室内质控,提醒我们在更换试剂厂家时应特别注意室内质控参考品的变化。     

成人先天性髋关节脱位伴有股骨头坏死行人工全髋关节置换术的循证护理

目的探讨全髋关节置换治疗伴股骨头坏死的成人先天性髋关节脱位的围手术期的循证护理。方法采用循证护理的方法,对12例18个有股骨头坏死成人先天性髋关节税位进行全髋关节置换术围手术期的患者进行从心理护理到出院的继康指导。结果12例患者经护理术后恢复良好,平均经过2年的随访无疼痛发生,关节伸屈功能、负重、行走,日常生活自理能力获得完全恢复,未出现任何护理并发症。结论按循证护理选出最佳的护理方法,增加了护理方法的可信度,患者及其家属易于接受,积极配合,减少了患者痛苦,提高了护理的质量,促进了功能的恢复。     

β-D-半乳糖苷酶动力学测定方法探讨及初步临床应用

目的建立β-D-半乳糖苷酶(GAL)自动化分析方法。方法用2-氯-4-硝基苯基-β-D-半乳糖苷(CNP-GAL)为底物,在pH值4.8柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系下,在405 nm处测定产物吸光度值的变化,得出GAL活性。用此方法检测了58名正常体检者及88例患者(包括急性肾功能衰竭15例、尿毒症32例、糖尿病肾病18例、高血压肾病23例)的GAL水平。结果本方法最适pH值为4.8,基质浓度为2.5 mmol/L。批内、批间平均变异系数(CV)分别为3.44%、5.17%。米氏常数(Km)为0.45 mmol/L。正常对照组GAL中位数(范围)为6.2(4.8~7.8)U/gCr,急性肾功能衰竭组为190(74.2~285.6)U/gCr,尿毒症组为39.6(8.9~161.0)U/gCr,糖尿病肾病组为11.3(5.5~67.0)U/gCr,高血压肾病组为16.1(4.1~137.5)U/gCr,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.001、P<0.05)。结论该法简便、快捷、精确,可用于自动化分析,并且留样方便,适宜临床常规应用。GAL可作为评价肾小管疾病及肾实质性疾病的一项指标。     

基于中医认识论药膳汤粥辅助治疗糖尿病

基于中医对糖尿病的认识,探讨药膳汤粥辅助治疗糖尿病。通过文献研究和整理归纳的方法,结合糖尿病的中医病因病机,总结古代对其饮食疗法,探索研究中医治疗糖尿病的证治规律。认为糖尿病属中医"消渴"的范畴,中医药膳汤粥辅助治疗糖尿病具有重要作用,并提出了几种药膳汤粥辅助治疗糖尿病的方案,在为临床防治糖尿病提供新思路和行之有效的方法。     

远外侧锁孔入路切除枕骨大孔区脑膜瘤显微手术体会

目的探讨采用显微锁孔入路切除枕骨大孔区脑膜瘤的手术入路及手术技巧。方法我院1999年6月至2006年6月采用显微锁孔入路切除10例枕骨大孔区脑膜瘤，其中远外侧经髁后入路5例，远外侧经髁入路3例，枕下中线入路2例。结果10例肿瘤全切除8例，次全切除2例，无死亡病例。结论远外侧经髁后和部分经髁锁孔入路是切除枕骨大孔区脑膜瘤的最佳手术入路，术中应注意避免损伤椎动脉及其分支，保护后组颅神经。     

E-cadherin基因在卵巢癌高低转移细胞中的差异表达及其机制的探讨

[目的]探讨上皮性细胞黏附分子在人卵巢浆液性囊腺癌高、低转移细胞株HO-8910和HO-8910PM的表达情况.[方法]采用蛋白印迹及免疫细胞化学方法检测2种细胞株的E-cadherin蛋白表达差异,用RT-PCR法检测2种细胞株的mRNA表达差异,用PCR及基因测序法检测基因突变情况.[结果]E-cad蛋白及mRNA在HO-8910中表达,在HO-8910PM中不表达.在E-cadherin基因外显子6～9未发现突变.[结论]E-cad的表达可能与肿瘤的转移能力负相关.     

冲击波诱导人骨髓基质细胞成骨分化及机制的研究

目的 观察出生后人骨髓基质细胞(hIMSCs)在体外培养条件下增殖与分化的特点；研究适宜能量冲击波对出生后hMSCs成骨分化的作用及机制。方法 抽取健康自愿者髂骨骨髓，采用密度梯度离心法进行hMSCs体外培养。设冲击波组(SW组)与对照组，应用不同能量级冲击波对SW组原代细胞进行处理，根据细胞活力测定与集落形成数量确定适宜的冲击波能量值。应用适宜的冲击波能量处理hMSCs原代细胞并传代培养，采用倒置显微镜观察、细胞增殖活力测定、ELISA法检测细胞分泌TGF-81、茜素红染色、钙钴法染色、四环素荧光标记、细胞分泌碱性磷酸酶测定和逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨钙素mRNA表达等方法，对SW组和对照组的各代细胞形态、增殖与分化及其机制进行探讨。结果冲击波处理体外原代培养hMSCs的适宜能量为10kV(500)。SW组细胞在冲击波处理后早期分泌TGF-B1显著高于对照组(P＜0．001)。SW组与对照组细胞在形态学方面第3代前无明显差别；SW组各代细胞分泌碱性磷酸酶显著高于对照组(P＜0．01)；茜素红染色、钙钴法染色、四环素荧光标记等显示SW组细胞的成骨作用明显优于对照组；SW组细胞经冲击波处理后第10天应用RT-PCR方法可以检测到骨钙素mRNA的表达，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．001)。结论 冲击波对体外培养的出生后人骨髓基质细胞具有促进成骨分化的作用，适宜能量为10kv(500)，其机制之一为TGF-B1介导的促hMSCs成骨分化作用。10kV(500)能量级的冲击波对体外培养的hMSCs增殖无影响，大于该能量的冲击波具有抑制细胞增殖的作用。     

人源性同种异体去细胞外周神经材料标准制备方法的研究

目的 对目前文献报道使用的5种不同方法制备的人源性同种异体去细胞外周神经材料进行综合分析比较其优劣,以确定可供临床使用的标准的制备流程.方法 将人源性神经按5种不同方法进行化学萃取,制备的外周神经支架材料分别行苏木精-伊红(HE)染色、免疫组化(S-100、Col I)和透射电镜、氮含量测定等检测,观察5种方法去除许旺细胞、髓鞘和轴突等抗原成分以及基底膜保存完好的情况.结果 分别萃取2次持续24 h组神经的HE染色显示去除细胞和轴突彻底,纵切片上未见任何细胞,红染的神经内膜呈波浪状纵形排列,轴突、髓鞘结构消失而形成管柱状空隙;S-100染色呈阴性;Col I染色结果可以看出其结构呈松散不规则的棕黄色结构,而其它处理组则结构相对整齐的纵向带状结构.透射电镜显示该组与各处理之间髓鞘去除差异无统计学意义.氮含量测定显示该组蛋白含量比值最低.结论 使用Triton X-100处理24 h再分别脱氧胆酸钠24 h持续萃取2次,可作为供临床使用的制备人源性去细胞同种异体神经支架材料的标准流程.     

猕猴组织工程化周围神经的体外构建

目的:研究以猕猴骨髓基质干细胞作为种子细胞和以PLGA作为支架材料,体外构建猕猴组织工程化周围神经的方法.方法:采用密度梯度离心的方法分离培养猕猴骨髓基质干细胞,利用相差显微镜观察细胞生长情况,描绘其生长曲线;将4/0vicryl编织线在10倍手术显微镜下打散成PLGA细丝纤维,扫描电镜下观测其表面形态;将猕猴骨髓基质干细胞种植到经生物学修饰的PLGA纤维上共培养,倒置显微镜下观察细胞在支架材料上的生长情况.结果:采用密度梯度离心的方法可得到大量增殖能力强的猕猴骨髓基质干细胞;接种后的骨髓基质干细胞很快粘附于PLGA纤维上,生长、分裂、增殖良好,在PLGA纤维表面形成串珠样排列,部分细胞还形成连接在PLGA纤维间的链状或片状细胞桥.结论:猕猴骨髓基质干细胞与PLGA适合体外构建组织工程化周围神经.