纳米递药系统治疗阿尔茨海默病的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种进展性的神经退行性疾病,也是痴呆最常见的类型[1]。AD目前尚无有效的治疗方法,其中重要的原因就是治疗AD的药物无法有效的通过血脑屏障(blood brain barrier,BBB)[2]。纳米递药系统     

研究式教学法在神经病学八年制临床见习中的应用及评价

目的：探讨研究式教学法在神经病学八年制临床见习中的应用和教学效果.方法：八年制医学生分为研究组和对照组,研究组采用研究式教学体系,对照组采用传统教学方法,通过出科考核及问卷调查的方式评价教学效果.结果：研究组在考试的总分、基础理论知识的得分上明显高于后者（P＜0.05）;学生对研究式教学模式满意度较高.结论：研究式教学法能激发学生对科学研究的兴趣,在提高学生创新思维和科研能力方面有良好的效果.     

阿加曲班治疗椎基底动脉供血不足的疗效观察

目的:观察阿加曲班注射液治疗椎基底动脉供血不足的疗效。方法:44例椎基底动脉供血不足患者随机分为阿加曲班治疗组(23例)和低分子右旋糖苷加复方丹参注射液对照组(21例),观察临床疗效及治疗前后彩色多普勒超声检测椎动脉血流参数的改变。结果:治疗组痊愈14例(61%),对照组痊愈4例(19%),两组有显著性差异(P<0.05),治疗组总有效率(100%)亦高于对照组(76%);治疗组中治疗后椎动脉各血流参数均较治疗前明显改善(P<0.05),且两组治疗后相比,治疗组各参数均明显较对照组改善(P<0.05)。结论:应用阿加曲班治疗椎基底动脉供血不足患者疗效显著,值得推广使用。     

人血管内皮生长因子165慢病毒载体的构建及其抗放射所致细胞凋亡的作用

 【目的】 构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPhVEGF165,并转染至HT22 细胞,并进一步观察其对放射线损伤所致的细胞凋亡的保护作用。【方法】 PCR扩增hVEGF165基因,克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体;通过酶切电泳,菌落PCR初步筛选和测序鉴定构建的pCDH-CMV-MCS-EF-GFP1-hVEGF165重组载体;采用磷酸钙共转染法转染293T细胞包装制备慢病毒液,并感染HT22细胞,采用实时RT-PCR及Western Blot检测hVEGF165基因在HT22细胞中的表达情况。进一步对单纯HT22细胞、空质粒转染组以及hVEGF165转染组HT22细胞进行0、5、10 Gy的X线照射,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。【结果】 hVEGF165基因片段重组到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,酶切后电泳结果显示均能得到与理论大小相符的片段,测序结果与GenBank序列完全一致,转染HT22后hVEGF mRNA及蛋白表达水平明显增高。而且同各对照组相比,hVEGF165可以降低细胞放疗后的凋亡率。【结论】 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-hVEGF165 慢病毒表达载体构建成功,其转染HT22细胞后可获得高水平hVEGF165 mRNA和蛋白的表达,hVEGF165具有抗放射所致细胞凋亡的作用。     

同型半胱氨酸对海马神经元细胞HT22的毒性作用及其机制的探讨

目的 探讨同型半胱氨酸对海马神经元细胞系HT22细胞的毒性作用及其可能的相关机制. 方法 使用不同浓度的同型半胱氨酸(0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmo/L)作用于分化培养后的HT22细胞,采用MTS分析检测细胞活力的变化.并同时使用N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK801和美金刚进行干预处理,进一步检测其对细胞活力的影响;使用Hoechst 33342和PI染色观察细胞死亡的形态学变化. 结果 同型半胱氨酸对分化培养后的HT22细胞具有剂量反应关系的毒性作用.半数有效浓度约在1.25 mmol/L.Hoechst33342和PI染色结果 显示低浓度同型半胱氨酸(1.0 mmol/L)主要引起细胞凋亡,而随着同型半胱氨酸浓度的增加(2.0 mmol/L),细胞则主要以坏死的形式存在.NMDA受体拮抗剂MK801和美金刚可有效的抑制同型半胱氨酸的神经细胞毒性.分别在10 μmol/L浓度时显示最为明显的抑制作用,同单纯同型半胱氨酸作用组相比差异具有统计学意义(P<0.05). 结论 同型半胱氨酸对海马神经元细胞系HT22细胞具有明显的毒性作用,主要导致细胞的凋亡和坏死;其产生的神经毒性在很大程度上是通过激活NMDA受体起作用的.对于同型半胱氨酸-NMDA受体之间的作用的进一步研究将会提供神经元坏死的一个重要的研究方向.     

IGF-1重组腺病毒转染对缺氧诱导的神经干细胞凋亡的影响

将人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)重组腺病毒(Ad IGF-1)转染C17.2神经干细胞;Western blot法检测IGF-1 蛋白的表达;建立神经干细胞缺氧模型,TUNEL 法检测细胞凋亡指数,流式细胞术测定细胞凋亡率的变化.发现转染Ad IGF-1的C17.2神经干细胞成功表达IGF-1 蛋白;缺氧诱导C17.2神经干细胞凋亡,转染Ad IGF-1的C17.2神经干细胞凋亡指数、凋亡率与对照组相比有显著差异.提示转染Ad IGF-1能减轻缺氧诱导的C17.2神经干细胞凋亡.     

骨骼肌细胞和脂质体介导的基因治疗帕金森病的比较研究

[目的]观察骨骼肌细胞和阳离子脂质体介导的芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)重组体脑内移植对帕金森病的治疗效果,比较两种基因治疗方法的有效性.[方法]骨骼肌细胞与pCDNA3-AADC重组体构建成AADC转基因骨骼肌细胞,将转基因骨骼肌细胞和阳离子脂质体包裹的pCDNA3-AADC重组体分别移植到帕金森病SD大鼠纹状体内,移植后进行行为学和组织形态学的检测以评价两种治疗方法的疗效.[结果]转基因骨骼肌细胞脑内移植后,帕金森病模型鼠旋转行为较对照组获得了改善(P<0.05),11周时最明显.阳离子脂质体包裹的重组体脑内注射后,PD模型鼠的旋转行为也获得了一定的改善,以1周时最为明显(P<0.05),而在第5周时,其旋转行为与移植前无明显差异(P>0.05);免疫组化证实了转基因骨骼肌细胞在脑内长时期存活以及目的基因在脑内纹状体区的稳定表达.[结论]骨骼肌细胞和阳离子脂质体介导的AADC基因重组体脑内移植可增加脑内AADC基因的表达,有效改善帕金森病大鼠的旋转行为;但骨骼肌细胞比阳离子脂质体介导的基因治疗疗效持续时间明显长.     

神经节苷酯对鼠脑放射性损伤后空间学习记忆力下降的影响

背景记忆力下降是放射性脑病早期的主要临床表现,已有许多人认为神经节苷酯在神经修复中对记忆功能具有改善作用.目的研究神经节苷酯对鼠脑放射性损伤后空间学习记忆能力减退的影响.设计以动物为观察对象的随机对照实验.单位中山大学第二附属医院的神经科和放射科.材料实验于2001-03/2002-05在中山大学附属第二医院实验室完成.选取SD大鼠80只,分为空白对照组、神经节苷酯治疗组、生理盐水治疗组、未干预组,20只/组.干预神经节苷酯治疗组、生理盐水治疗组、未干预组大鼠麻醉后头部接受60Coγ射线照射,7 Gy/次,1次/d,连续照射6 d,总剂量42 Gy.空白对照组麻醉后不予照射.接受照射的3组每天照射后隔1 h给药,神经节苷酯治疗组腹腔注射神经节苷酯30 mg/kg;生理盐水治疗组注射等量的生理盐水,1次/d,连续6 d;空白对照组和未干预组不给药.评估①照射结束后采用Morris水迷宫的定位航行实验,通过记录大鼠寻找平台所需时间(潜伏期)来测定大鼠对水迷宫的学习记忆能力.②采用空间搜索实验,通过记录大鼠在120s内搜索平台的路线图,测量其平台象限的游泳距离占总距离的百分比,从而测定大鼠学会寻找平台后,对平台空间位置记忆的能力.③迷宫试验结束后将神经节苷酯治疗组、生理盐水治疗组、未干预组大鼠断头取脑,观察各组大鼠的脑组织病理改变.结果①各组第4天起潜伏期渐趋平稳,第5天时神经节苷酯治疗组寻找平台潜伏期(13.6±1.4)s,短于生理盐水治疗组和未干预组[(17.1±2.9),(15.8±2.2)s,P＜O.05].②神经节苷酯治疗组和空白对照组能依靠空间搜索寻找平台,运动轨迹多位于原平台所在象限,而生理盐水治疗组及未干预组多绕池壁游泳,运动轨迹呈随机分布于各象限中.神经节苷酯治疗组平台象限游泳距离百分比高于生理盐水治疗组及未干预组,但较空白对照组低.③组织学检查显示,生理盐水治疗组神经元轻度变性,部分细胞呈空泡变性,出现细胞皱缩,染色质浓缩,核边聚,星形细胞数量减少;未干预组病理改变与生理盐水治疗组基本相似;神经节苷酯治疗组部分神经元出现胞体变小,胞浆红染等变性改变,但数量、核皱缩、核边聚、空泡现象较前两组少.结论放射性脑损伤使大鼠的学习记忆能力明显下降,神经节苷酯治疗可减轻照射后脑组织病理改变,对放射所致的空间学习记忆能力减退有明显改善作用.     

芳香族氨基酸脱羧酶转基因治疗帕金森病模型大鼠的研究

目的　观察人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)基因修饰的原代培养SD大鼠骨胳肌细胞脑内移植后对帕金森病模型鼠的治疗效果。　方法　将AADC转基因骨骼肌细胞及空骨骼肌细胞分别移植于实验组与对照组帕金森病模型鼠毁损侧纹状体 ,观察其病理性旋转行为的改善 ,并在该基础上对两组大鼠分别采用一定浓度的L dopa进行治疗 ,观察脑内移植AADC基因后对大鼠旋转行为的进一步改善。采用免疫组化方法确定AADC的表达。　结果　AADC转基因骨骼肌细胞脑内移植后 ,帕金森病模型大鼠旋转行为获得了一定的改善 (P <0 0 5 ) ,并可持续至少 15周 ;外源性L dopa治疗后旋转行为有更明显改善 ,以 11周时最为显著 ,由移植前 (10 0± 0 2 )圈 /min减少至(1 8± 0 8)圈 /min ;免疫组化证实转基因骨骼肌细胞在脑内存活可达 15周 ,以及目的基因在脑内的稳定表达。　结论　脑内植入AADC转基因骨骼肌细胞 ,增加了脑内AADC基因的表达 ,有效地改善了帕金森病大鼠的旋转行为 ,增加了L dopa治疗效果 ,有助于在低剂量L dopa维持的疗效。     

含有NURR1基因的重组复制缺陷性腺病毒的构建和鉴定

[目的]构建并鉴定携带NURR1基因的重组复制缺陷腺病毒高效表达载体,为基因调控神经干细胞分化后治疗帕金森病奠定基础.[方法]将测序鉴定正确的NURR1基因插入穿梭质粒pTrack-CMV后,与Adeasy整合,重组Adeasy质粒在肾293A细胞内包装成病毒,PCR鉴定并测定病毒滴度,电镜鉴定病毒颗粒.[结果]成功构建的穿梭质粒pTrack-CMV-NURR1与pAdeasy整合后,重组Adeasy质粒在肾293A细胞内包装和复制时,细胞病变效应(cytopathogeniceffect,CPE)明显,PCR鉴定病毒DNA中有NURR1基因,病毒滴度测试表明病毒含量高,电镜显示病毒为多面体.[结论]成功构建出含有NURR1基因的重组复制缺陷性腺病毒表达载体.