不同温度条件下体外培养小鼠皮质神经元形态及骨架蛋白的表达

目的：观察不同温度条件下体外培养的小鼠皮质神经元的形态及其骨架蛋白表达的变化，以及与热休克蛋白70的关系。 方法：实验于2005-02／06在解放军第四军医大学西京医院神经内科实验室完成。①选取孕15-18d昆明种二级孕鼠1只，处死后取胎鼠的大脑皮质进行神经元原代培养，培养第7天经鉴定的神经元用于实验，随机分为高温处理组和正常对照组。②高温处理组建立热应激损伤模型，将培养好的神经元移入经乙醇消毒的全自动水浴加热器，分别于38。39，40，41，42℃处理30min。正常对照组不造模，于37℃对神经元进行常规培养。③两组均随机选取3个细胞爬片，应用倒置相差显微镜观察刺激后神经元的形态变化，应用激光共聚焦扫描观察不同温度刺激后神经元中骨架蛋白、热休克蛋白70的表达变化。 结果：①两组培养的神经细胞光镜观察结果：培养7d时正常对照组细胞光晕明显．胞体饱满并聚集成团，细胞团间有粗大的突起并相互连接，神经网络稠密：高温处理组38℃时漂浮细胞增加，神经网络稀疏。39℃时部分细胞坏死。42℃大部分细胞出现坏死，胞体碎裂，突起漂浮或消失。②培养神经细胞的纯度鉴定结果：培养7d的神经细胞，荧光显徽镜下可见神经元及突起为绿色荧光，突起一至两个不等，计算结果显示培养细胞中神经元占（82．0&;#177;1．9）％。⑧不同温度条件下两组骨架蛋白及热应激蛋白荧光强度的变化：高温处理组38，39，40，41，42℃热刺激后骨架蛋白荧光强度低于正常对照组，且温度愈高降低愈明显。热休克蛋白70荧光强度呈钟形分布，39℃最高，37，42℃最低。 结论：高温可以导致神经元形态变化，其中骨架蛋白结构紊乱可能是神经元形态变化的原因之一，热休克蛋白70可能参与其中。     

尿激酶动脉溶栓治疗急性脑梗死31例

目的:探讨应用尿激酶动脉溶栓治疗急性脑梗死患者的临床疗效。方法:回顾性分析我院65例应用尿激酶动脉溶栓治疗急性脑梗死患者,根据溶栓开始时间分为:研究组,开始时间小于4h,31例;对照组,开始时间超过4h,34例。记录两组患者溶栓前、溶栓后第1d、7d、30d的卒中量表评分(NIHSS),随访1月观察重要器官出血、肢体肌力改善情况及病死率。结果:与对照组相比,研究组的溶栓前、溶栓后第1d的美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)无明显差异(P>0.05),而溶栓后第7d、30d的NIHSS明显较低(P<0.05)。随访1月后,研究组的脑出血、泌尿系出血、胃肠道出血率明显较对照组低(P<0.05),而肢体肌力改善情况及病死率则明显较好(P<0.05)。结论:尿激酶动脉溶栓治疗急性脑梗死溶栓开始时间越早,临床疗效越好,患者获益越多。     

改良线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的实验研究

目的通过对使用改良线栓法制作的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的实验研究,探讨规范合理的模型制作方法,使动物模型更加稳定。方法48只SD大鼠随机分为手术组(36只)、假手术组(6只)和对照组(6只),其中手术组再根据缺血再灌注时间不同分为脑缺血2h再灌注0.5h、2h、6h、12h、24h和48h组,每组6只;在Longa线栓法的基础上作如下改进来制作大脑中动脉阻塞再灌注动物模型大鼠体重与线栓直径的匹配以及线栓插入深度的控制;线栓前段包裹硅胶;采用显微手术技术;术中多功能生理监测;麻醉后拔线。2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色观察各组的脑梗死体积;HE染色观察大鼠脑组织的病理改变。结果成功率可高达88.9%,模型符合脑梗死病理过程。结论改进后的线栓法简便、易重复,降低了动物死亡率,提高了成功率,复制的可逆性局灶性脑缺血模型是研究脑缺血再灌注损伤较为理想的模型。     

不同温度条件下体外培养小鼠皮质神经元形态及骨架蛋白的表达

目的:观察不同温度条件下体外培养的小鼠皮质神经元的形态及其骨架蛋白表达的变化,以及与热休克蛋白70的关系。方法:实验于2005-02/06在解放军第四军医大学西京医院神经内科实验室完成。①选取孕15～18d昆明种二级孕鼠1只,处死后取胎鼠的大脑皮质进行神经元原代培养,培养第7天经鉴定的神经元用于实验,随机分为高温处理组和正常对照组。②高温处理组建立热应激损伤模型,将培养好的神经元移入经乙醇消毒的全自动水浴加热器,分别于38,39,40,41,42℃处理30min。正常对照组不造模,于37℃对神经元进行常规培养。③两组均随机选取3个细胞爬片,应用倒置相差显微镜观察刺激后神经元的形态变化,应用激光共聚焦扫描观察不同温度刺激后神经元中骨架蛋白、热休克蛋白70的表达变化。结果:①两组培养的神经细胞光镜观察结果:培养7d时正常对照组细胞光晕明显,胞体饱满并聚集成团,细胞团间有粗大的突起并相互连接,神经网络稠密;高温处理组38℃时漂浮细胞增加,神经网络稀疏。39℃时部分细胞坏死。42℃大部分细胞出现坏死,胞体碎裂,突起漂浮或消失。②培养神经细胞的纯度鉴定结果:培养7d的神经细胞,荧光显微镜下可见神经元及突起为绿色荧光,突起一至两个不等,计算结果显示培养细胞中神经元占(82.0±1.9)%。③不同温度条件下两组骨架蛋白及热应激蛋白荧光强度的变化:高温处理组38,39,40,41,42℃热刺激后骨架蛋白荧光强度低于正常对照组,且温度愈高降低愈明显。热休克蛋白70荧光强度呈钟形分布,39℃最高,37,42℃最低。结论:高温可以导致神经元形态变化,其中骨架蛋白结构紊乱可能是神经元形态变化的原因之一,热休克蛋白70可能参与其中。     

β淀粉样蛋白对神经元上烟碱型乙酰胆碱受体β2亚单位表达的影响

目的观察β淀粉样蛋白25-35片断(A2β5-35)对海马神经元的损伤,及神经元上烟碱型乙酰胆碱受体β2亚单位(β2-nAChR)表达的变化。方法实验组用不同浓度(1、5、10、20μmol/L)的Aβ25-35诱导原代培养的海马神经元损伤,用倒置显微镜及四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法观察各组的神经元形态及存活的变化;用免疫荧光法观察神经元上标记的β2-nAChR的表达的变化,并用激光扫描共聚焦显微镜行半定量。结果各实验组的神经元形态上有不同程度地受损表现;各实验组的吸光度(A)值较不加A2β5-35的对照组减小,神经元上标记的β2-nAChR的平均相对荧光强度较对照组减小。结论A2β5-35可引起海马神经元损伤,并减少海马神经元上β2-nAChR表达量,Aβ25-35浓度越高,β2-nAChR表达量越低。