冷保存时间对大鼠原位肝移植后移植物诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的：探讨大鼠原位肝移植后移植物诱导型一氧化氮合酶基因随冷保存时间的延长而表达的变化。 方法：实验于2004-06／2005-06在南京大学医学院附属鼓楼医院医学检验中心科研部完成。雄性SD大鼠120只。受体大鼠根据供肝保存时间的不同随机分为3组。假手术组、保存3h组、保存6h组，每组40只。在术后存活率比较中，每组为10只，超过7d为存活受体。其余受体包括假手术组分别在门静脉复流后l，3，6，12和24h麻醉状态下各处死大鼠6只，自腹主动脉取血检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶。取肝脏肝中叶保存于液氮中作后续肝脏组织内的一氧化氮代谢产物、诱导型一氧化氮合酶活性、诱导型一氧化氮合酶mRNA测定。 结果：120只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠生存率：供肝保存时间3h组1周生存率大于6h组[90％（9／10），40％（4／10）]。②术后肝脏功能变化：肝功能自术后复灌开始即有谷丙转氨酶和谷草转氨酶的逐渐升高，在术后12h达到最高值，后逐渐降低，保存6h组转氨酶下降的程度较保存3h组缓慢。③肝脏组织内NO2^-和NO3^-浓度的变化：肝脏内NO2^-和NO3^-浓度在术后3h明显增高，在术后12h达到高峰，其中保存6h组明显高于假手术组和保存3h组。④肝组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达：其表达随着冷冻保存时间的延长，逐渐加强，在再灌注后12h表达最明显，其后表达逐渐减弱。保存6h组表达强度及表达持续时间明显强于保存3h组。 结论：冷冻保存时间的延长能够促进诱导型一氧化氮合酶的表达，加剧了过氧化亚硝酸盐的形成，导致肝脏保存再灌注损伤的进一步发展，说明诱导型一氧化氮合酶在肝脏保存再灌注损伤中扮演了重要角色。     

尼莫地平对大白鼠脑梗死区钙离子活动的影响

雄性大白鼠24只,随机分成3组各8只。A组为对照组,在大脑中动脉凝闭(MCAO)前30min静注蒸馏水;B组在MCAO前30min静注尼莫地平0.6mg/kg;C组在MCAO后40min静注尼莫地平1mg/kg;用钙离子选择性微电极观察脑梗死区细胞外Ca~(2+)变化。结果:B组脑梗死区细胞外Ca~(2+)下降值较小,A组下降值较大(P<0.01);C组给药前后自身对照脑梗死区细胞外Ca~(2+)明显回升(P<0.01)。实验表明,在MCAO前或后给药,尼莫地平对脑梗死区细胞外Ca~(2+)流动均有阻滞作用。     

肝癌组织中人宫颈癌癌基因mRNA的表达及意义

目的 观察人宫颈癌癌基因(HCCR)mRNA在肝癌和癌旁正常组织以及肝癌患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平.方法 TRIZOL法提取肝癌组织和癌旁正常肝组织以及肝癌患者和正常人的PBMC的RNA,用RT-PCR技术分析HCCR基因在不同样品中的mRNA表达水平.结果 在肝癌组织中,HCCR的mRNA相对表达强度为0.776±0.101,癌旁正常组织中的相对表达强度0.470±0.154,两者相比,P＜0.05.在PBMC中,肝癌患者HCCR mRNA的表达强度为0.256±0.069,而正常人未检测出,两者相比,P＜0.05. 结论 HCCR基因可能参与了肝癌的发生与发展,与肝癌的病理过程有一定的相关性.     

神经细胞老化与细胞内Ca^2＋相关性的实验研究

应用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化模型,运用Fura2/AM染色结合计算机图像处理的方法观察神经细胞老化过程中不同时间细胞内Ca~(2 )动态变化过程。实验结果表明:随着培养时间增长,细胞内Ca~(2 )浓度增加,培养一天时细胞内Ca~(2 )浓度为104.8±21.9(±s),培养至21天时细胞内Ca~(2 )浓度变为130.8±29.6(P<0.01)。     

单细胞反转录酶聚合链式反应技术对胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子的鉴别

目的：利用干细胞分化获得胰岛细胞后目前还没有较理想的鉴别方法，实验通过单细胞反转录酶聚合链式反应技术鉴别胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子，以建立一种检测胰岛干细胞的有效方法。方法：实验于2001-10／2005-08在加拿大多伦多大学和南京大学附属鼓楼医院完成。①将收集培养2～4周的单个胰岛干细胞用于实验。②胰岛活性测定实验中，选择1&;#215;10^6分化的胰腺干细胞，用低浓度和高浓度葡萄糖分别刺激1～4h，检测12，14，24d培养液中胰岛素的浓度。③单细胞反转录酶聚合链式反应检测胰岛素促进因子基因实验中，选择12个单个胰腺干细胞进行检测，另取12个单个未分化的干细胞作为对照。聚合链式反应体系为20μL。聚合链式反应扩增反应条件为94℃预变性4min，94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸2min条件下循环35次。聚合链式反应产物以质量浓度为20g/L的琼脂糖凝胶电泳。结果：①分化的胰腺干细胞培养液中胰岛素浓度的检测：培养12，14，24d时培养液中胰岛素的浓度分别为42．6，68．2，73．5IU／L，随着时间的延长，呈逐渐升高的趋势。②单个胰岛干细胞胰岛素促进因子反转录酶聚合链式反应检测结果：12个单个胰岛干细胞中有7个胰岛素促进因子表达呈阳性，而作为对照的12个未分化干细胞均未检出，两者差异显著（P〈0．001）。结论：采用单细胞反转录酶聚合链式反应检测方法为胰腺干细胞的鉴定和纯化提供了技术保障，证明单细胞反转录酶聚合链式反应是一种检测胰腺干细胞标记物的有效方法。     

HCCR1和HCCR2可溶性蛋白在细菌中表达、纯化及在早期肝癌诊断中的应用

目的评估HCCR1和HCRR2克隆、细茵表达及可溶性蛋白的纯化及应用于早期肝癌诊断的可行性。方法cDNA克隆、表达、蛋白质的纯化、Westem blot分析用于评估HCCR1和HCCR2蛋白的生产，Elisa方法用检测血清抗原。结果HCCR1和HCCR2能够高水平地在细茵中表达，纯化的可溶性蛋白能用于生产抗体并应用于肝癌的早期诊断。结论HCCR1和HCCR2蛋白质可以在细茵中生产，并能成功地用于肝癌的早期诊断。     

钙及谷氨酸受体拮抗剂治疗缺血性中风的研究进展

近些年来的研究表明,在缺血性中风的病理过程中Ca~(2+)起着关键作用。谷氨酸能诱导Ca~(2+)从细胞外流入细胞内导致细胞能Ca~(2+)超载。因此研究者寻求防止Ca~(2+)从细胞外进入细胞的药物来防治缺血性中风的病人。本文对现已应用于临床的Ca~(2+)拮抗剂尼莫地平和盐酸氟桂嗪以及正在研究过程中的谷氨酸受体拮抗剂的研究进展进行叙述。