缺氧缺血性脑病新生儿血浆肾上腺髓质素及一氧化氮水平变化

目的 探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生儿血浆肾上腺髓质素(ADM)和一氧化氮(NO)水平的变化及临床意义.方法 分别测定51例HIE患儿和15例正常对照组足月新生儿血浆ADM和NO的水平.结果 (1)HIE组患儿血浆ADM和NO水平较正常对照组明显升高,差异有非常显著性(P<0.01);轻度、中度和重度HIE组血浆ADM和NO水平升高,两两比较差异有非常显著性(P<0.01).(2)HIE组患儿血浆ADM和NO的含量呈正相关关系(r=0.82,P<0.01).(3)与头部CT正常组比较,头部CT异常组血浆ADM和NO水平明显升高,差异有非常显著性(P<0.01).结论 ADM和NO都参与了新生儿HIE的病理生理过程,可以作为判断HIE病情严重程度的早期标志物;ADM在新生儿HIE中可能具有一定的神经保护作用.而NO对脑组织的损伤则是双向的.     

缺氧缺血性脑病新生儿血浆肾上腺髓质素、血清肿瘤坏死因子-α水平的变化及其与窒息后脑损伤的关系

目的探讨HIE新生儿血浆肾上腺髓质素(ADM)和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的变化及其与窒息后脑损伤的关系。方法按病情程度将50例HIE分为轻度HIE组(20例)、中度HIE组(16例)和重度HIE组(14例);同期选择10例健康足月新生儿作对照(健康对照组)。采用放射免疫分析法测定不同程度HIE患儿和健康对照组新生儿血浆ADM和血清TNF-α、神经特异性烯醇化酶(NSE)水平。结果1.与健康对照组相比,HIE组患儿血浆ADM和血清TNF-α、NSE水平明显升高,差异有显著统计学意义(Pa<0.01);轻度HIE组、中度HIE组和重度HIE组患儿血浆ADM和血清TNF-α、NSE水平依次升高,两两比较差异有显著统计学意义(Pa<0.01)。2.HIE组患儿血浆ADM、血清TNF-α和NSE水平均呈显著正相关(r=0.85,0.89,0.83 Pa<0.01)。3.HIE预后差患儿血浆ADM、血清TNF-α和NSE水平高于预后好者(Pa<0.01)。结论ADM和TNF-α均参与新生儿HIE的病理生理过程,其可作为判断HIE病情严重程度和预后的早期标志物。     

慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用

目的构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系。方法根据查阅文献获得Pin1shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上清进行病毒滴度测定,再行慢病毒的包装,将获得的慢病毒毒液感染A549细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体质粒,包装并得到高滴度的病毒颗粒。通过qRT-PCR和Western blot法检测显示,与对照组相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降。结论慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin 1的表达。     

内质网应激与高氧诱导早产大鼠肺损伤的作用

目的探讨内质网应激在早产鼠高氧肺损伤中的作用。方法 48只新生早产Wistar大鼠在生后12 h随机分为对照组和高氧组,高氧组吸入95%的高浓度氧建立高氧肺损伤模型,对照组置于同一条件常压空气中。在处理后1、3、7 d分批断颈放血处死大鼠后取肺组织。每个时间点取动物8只,左肺制作石蜡切片,采用HE染色观察肺组织病理变化;免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法检测内质网应激相关指标,内质网蛋白57(ERp57)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在肺组织中的表达;采用原位末端标记法(TUNEL)检测肺细胞凋亡情况。结果高氧组肺组织呈典型的急性肺损伤改变。除了暴露3 d,其余时间点,高氧组ERp57和CHOP表达均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。随高氧暴露时间延长,高氧组ERp57表达呈增高趋势,差异有统计学意义(P0.05);但CHOP表达在各时间点差异无统计学意义(P0.05)。肺组织细胞凋亡指数随时间延长呈渐升趋势,在暴露1 d、3 d、7 d之间的差异有统计学意义(P0.01);在各时间点,高氧组凋亡指数均高于对照组,差异有统计学意义(P均0.01)。ERp57、CHOP表达与高氧组肺组织细胞凋亡指数呈显著正相关(P均0.01)。结论内质网应激启动的凋亡途径参与高氧肺损伤,并发挥重要作用。     

线粒体ATP敏感钾通道对早产鼠高体积分数氧肺损伤的保护作用

目的探讨线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)在早产鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤中的保护作用。方法早产Wistar大鼠72只,随机分为对照组、高氧组和二氮嗪组。二氮嗪组在高氧暴露前30 min,按10 mg·kg-1腹腔注射二氮嗪,其余2组在相同时点腹腔注射等量9 g·L-1盐水,高氧组和二氮嗪组置于950 mL·L-1氧气中,对照组置于同一条件常压空气中。分别于空气或高氧暴露1 d、3 d、7 d时收集肺组织,HE染色观察其肺组织病理形态变化,原位末端标记法检测其肺组织细胞凋亡率,免疫组织化学法检测其肺组织Caspase-9和Omi/HtrA2的表达,激光共聚集显微镜下观察间接免疫荧光双染色Omi/HtrA2的胞内转位。结果与对照组比较,高氧组肺组织受损明显,形态改变,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),Caspase-9、Omi/HtrA2表达增多(P<0.01),Omi/HtrA2胞内转位率明显增高(P<0.01)。与高氧组比较,二氮嗪组肺组织受损得到改善,细胞凋亡率减少(P<0.01),Caspase-9、Omi/HtrA2表达显著减少(Pa<0.01),Omi/HtrA2胞内转位率明显减少(P<0.01)。结论二氮嗪可能通过开放mi-toKATP减少Caspase-9和Omi/HtrA2的表达,减少Omi/HtrA2在细胞内的转位,从而减轻早产鼠高氧肺损伤。     

Omi/HtrA2在高体积分数氧早产大鼠肺损伤中的作用

目的研究Omi/HtrA2在早产大鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤中的作用。方法早产Wistar大鼠48只随机分为高氧组和对照组。高氧组大鼠暴露于950 mL.L-1氧气中,对照组置于空气中。在处理后1 d、3 d、7 d每组分批处死8只大鼠后收集肺组织。采用HE染色观察其肺组织病理变化;免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)法检测Omi/HtrA2、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9(Caspase-9)在各组早产大鼠肺组织的表达和分布;采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)评价其肺组织细胞凋亡情况;采用间接免疫荧光双染色法,在激光共聚焦显微镜下观察Omi/HtrA2在细胞内的转位。结果 1.高氧组早产大鼠可见典型的肺损伤病理学改变。2.Omi/HtrA2、XIAP和Caspase-9主要表达于肺组织细胞的胞质。对照组中Omi/HtrA2有少量表达。高氧损伤后Omi/HtrA2的表达呈时间依赖性,于1 d时表达开始增加,3 d时明显增加,7 d时表达最多;高氧1 d时XIAP表达有所减少,3 d时明显减少,7 d最少;高氧1 d时Caspase-9表达开始增加,3 d时明显增加,7 d时表达最多。3.高氧组3 d时出现明显的肺细胞凋亡,7 d凋亡细胞数达高峰。4.与对照组比较,高氧组肺泡上皮细胞内Omi/HtrA2转位率明显增加。结论 Omi/HtrA2可能通过抑制XIAP、激活Caspase-9促进早产大鼠高氧后肺组织细胞的凋亡。     

雾化吸入硝酸甘油对呼吸衰竭新生儿ET-1和血气分析的影响

目的:探讨硝酸甘油雾化吸入对新生儿呼吸衰竭的治疗作用。方法:将110例呼吸衰竭的新生儿分为硝酸甘油组和对照组各55例。硝酸甘油组给予雾化吸入硝酸甘油20μg/(kg.次),4次/d,连用3天;对照组给予雾化吸入等容量生理盐水4次/d,连用3天。在治疗前后测定血内皮素-1(ET-1)。观察记录TcSO2达93%的时间,CPAP时间和住院时间。结果:治疗前两组ET-1、TcSO2水平差异无统计学意义;治疗后硝酸甘油组PaO2、PaCO2等明显改善(P<0.05);ET-1显著降低(t=3.65,P<0.01)。硝酸甘油组TcSO2达93%的时间及使用CPAP和住院时间均比对照组明显缩短(P<0.01)。结论:硝酸甘油雾化吸入治疗新生儿呼吸衰竭具有较好的临床疗效。     

二氮嗪对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤时线粒体凋亡途径的影响

目的 研究二氮嗪对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)损伤时线粒体凋亡途径的影响.方法 取培养好的HK-2细胞,接种于6孔板中,分为对照组、窒息组、二氮嗪组.以体积分数为20%的新生儿窒息后24 h血清作为攻击血清;以终浓度100 mol/L的二氮嗪进行干预.采用免疫组化法检测细胞内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达;激光共聚焦显微镜下观察间接免疫荧光双染色Omi/HtrA2在细胞内的转位和线粒体膜电位的变化.结果 与对照组相比,窒息组HK-2细胞内caspase-3表达的吸光度(A)值明显增加(25.19±3.33比13.63±1.89,P<0.01),Omi/HtrA2转位率明显升高[(56.01±5.30)%比(37.59±5.60)%,P<0.01],线粒体膜红/绿荧光强度比值明显降低(0.79±1.42比1.82±0.23,P<0.01);与窒息组相比,二氮嗪组HK-2细胞caspase-3表达的A值(20.17±2.19)明显降低,Omi/HtrA2转位率[(46.91±2.70)%]明显降低,线粒体膜红/绿荧光强度比值(1.47±0.14)明显增加,但均未恢复至对照组水平(均P<0.01).结论 二氮嗪通过减少Omi/HtrA2在胞内转位、减少caspase-3表达、稳定线粒体膜电位,从而明显减轻新生儿窒息后血清诱导的HK-2细胞损伤.     

新生鼠窒息后肾组织中钙离子的变化及意义

目的：探讨新生鼠窒息后肾组织中钙离子的变化及意义。方法：将45只7～10日龄Wistar大白鼠随机分为4组：对照组(13只)，窒息后复氧2 h组(10只)，窒息后复氧24 h组(11只)，窒息后复氧48 h组(11只)。制成常压窒息模型。在上述各时间点取左肾称重求出左肾系数(LRC)，并测定出肾组织中Ca2+含量，同时在光镜下对肾小管损伤程度进行评分。结果：窒息后复氧2 h开始肾组织中Ca2+含量［(1.75±0.39) mmol/g］及左肾系数［(7.64±0.33) g/kg］、肾小管损伤评分(28.80±7.16)均较对照组［(1.44±0.46) mmol/g、(4.88±0.90) g/kg、5.46±1.76］显著升高，P<0.05。且肾损伤指标在24 h达到高峰。同时，肾组织中Ca2+含量与左肾系数在窒息后复氧2 h，24 h和48 h均呈显著正相关关系(r分别为 0.61，0.69 和 0.63，均P<0.05)；肾组织中Ca2+含量与肾小管评分在窒息后复氧2 h，24 h和48 h也呈显著正相关关系(r分别为 0.57，0.58 和 0.75，均P<0.05)。结论：钙离子参与了窒息后肾损伤的发生。     

新生儿尿中TNF-α与Apgar评分之间的关系

目的：探讨新生儿尿中TNF-α与Apgar评分之间的关系。方法：28例新生儿,生后Apgar评分1 min<3分者18例,4～6分者10例;评分正常组9例。采用ELISA法检测新生儿尿中TNF-α水平,并同时测定尿中反应肾损伤的指标β2-微球蛋白(β2-MG)的水平。结果：尿TNF-α,β2-MG正常对照组为(25.35±5.76) pg/ml,(0.09±0.01) mg/L;在生后Apgar评分1 min 4～6分者为(32.50±6.55) pg/ml,(3.67±2.00) mg/L;Apgar评分1 min<3分者为(44.03±12.41) pg/ml,(4.66±1.85) mg/L。评分低者与正常组比较,尿TNF-α和β2-MG均显著升高(P<0.05)。直线相关分析显示：尿中TNF-α和β2-MG水平呈显著正相关关系(r=0.51,P<0.05)。结论：尿中TNF-α水平与生后Apgar评分高低有密切关系,可作为新生儿窒息后肾损伤的一个重要指标。