国内近10年儿科教学模式的研究热点—基于文献关键词的可视化分析

目的　将共词聚类分析法引入儿科教学模式的现状研究,通过对近十年来该领域文献的可视化分析,总结国内在该领域研究的热点及知识结构,为儿科教学的进一步发展提供参考。方法　于2017年7月在中国知网和万方数据库以“儿科”和“教学模式”为主题词搜索文献,限定期刊年限为2006年1月至2017年6月,通过人工筛选出符合研究标准的文献,利用Word、Bicomb 2.0对关键词进行整理,统计出高频关键词。采用SPSS 20.0描绘聚类分析图,用Ucinet 6.0和Newdraw描绘共现网络分析图,展现高频关键词之间的关系。结果　最终纳入文献367篇,提取高频关键词31个,与儿科数学相关的频率最高的关键词是“PBL教学法”。该领域的研究大致可分为四类：儿科实习及见习中的教学方法、儿科教学培养及评估的内容、儿科护理专业的教学方法及教学方法改革的对象。位于共现网络图中心区域的关键词有“PBL教学法”“多媒体教学”“案例教学法”及“护理”。结论　近十年来,多种教学方法的实践探究是国内儿科教育模式研究的主要内容。PBL是该领域的研究热点,多与多媒体、案例引导等相结合应用于儿科教学中。此外,循证医学在儿科教学中的应用也逐渐受到重视。     

缺氧后胚鼠神经元自噬及凋亡相关蛋白的表达

目的观察缺氧致胚鼠神经元损伤后,凋亡和自噬的发生及变化情况,并探讨其在脑细胞缺血缺氧中的意义。方法取大鼠的胚鼠皮质神经元进行体外原代培养,建立缺氧(oxygen deprivation,OD)损伤模型,通过Western blot方法检测不同缺氧时间点自噬微管相关蛋白轻链3抗体(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)以及半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)的表达情况。结果神经元于缺氧后可观察到自噬的发生,同时凋亡也随之出现,两者的标志蛋白于OD 0.5h开始表达,并且表达逐渐增加,于OD 4h时间点到达高峰,OD 6h时后凋亡标志蛋白caspase-3继续上调,自噬的标志蛋白LC3表达不再增强。结论 (1)除凋亡外,单纯缺氧能诱导胚鼠神经元发生自噬现象;(2)缺氧所致神经元的损伤过程中,凋亡与自噬同时发生,且表达趋势在OD 4h内一致,OD 4h后细胞凋亡增强。     

脑源性神经生长因子经自噬对胚鼠神经元缺氧损伤的保护作用

目的 探讨脑源性神经生长因子(BDNF)对胚鼠缺氧神经元是否有保护作用及其机制是否与激活自噬有关.方法 将SD大鼠胚鼠(孕17 ～ 19 d)的大脑皮质神经元在体外进行原代细胞培养,并进行神经元鉴定.培养7～10d,选取生长良好的神经元用于前后两部分实验.1.第一部分随机分为3组,对照组:不加入药物,只作缺氧处理;3-甲基腺嘌呤组(3-MA组):提前加入不同浓度的3-MA后作缺氧处理,依次为5 mmol·L-1 3-MA组、10 mmol·L-1 3-MA组、20 mmol·L-1 3-MA组;BDNF组:提前加入不同浓度的BDNF后作缺氧处理,依次为50μg· L-1 BDNF组、100 μg·L-1 BDNF组、200 μg·L-1 BDNF组.观察不同剂量3- MA、BDNF对缺氧神经元损伤的作用.之后以细胞计数盒-8(CCK-8)测定各组细胞活力,确定干预缺氧神经元的最佳药物浓度.2.第二部分分为3组,对照组:单纯缺氧,不加药物;100 μg·L-1 BDNF组:加入100 μg·L-1BDNF;10 mmol·L-1 3-MA组:加入10 mmol·L-1 3-MA.免疫蛋白印迹法检测3组缺氧神经元在不同缺氧时间点细胞自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况,以LC3Ⅱ/actin的相对表达量判断自噬发生的程度.结果 1.免疫荧光鉴定:与未缺氧神经元比较,缺氧神经元突触回缩,细胞网状结构被破坏.2.神经元细胞活力:50 μg·L-1BDNF组缺氧神经元细胞活力最强,100 μg·L-1BDNF组缺氧神经元细胞活力其次(Pa＜0.05);随3-MA剂量加大,各剂量组神经元活力明显降低.3.免疫印迹:于缺氧1h、3h、5h,100 μg·L-1 BDNF组缺氧神经元的LC3表达量,均较对照组相应时间点明显上调(Pa＜0.05).结论 BDNF通过自噬途径对缺氧损伤神经元起保护作用.     

Huwe1-shRNA 靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1表达

【摘要】 目的 探讨Huwe1 shRNA通过慢病毒载体转染L23神经干细胞，是否可以靶向沉默L23神经干细胞的Huwe1基因。方法 将体外培养的L23神经干细胞分成3组：huwe1 shRNA未转染组（control 组）、阴性序列转染组（control shRNA组）、huwe1 shRNA转染组（Huwe1 shRNA组）。Control组：仅常规体外培养L23神经干细胞。不将阴性序列和Huwe1 shRNA通过慢病毒载体转染L23神经干细胞。Control shRNA组：阴性序列通过慢病毒转染体外培养的L23神经干细胞。Huwe1 shRNA组：Huwe1 shRNA通过慢病毒载体成功感染体外培养L23神经干细胞。分别收集三组体外培养的L23神经干细胞，应用western blot 方法分别检测三组L23神经干细胞Huwe1蛋白的表达。 结果 与control组、control shRNA组比， Huwe1shRNA组体外培养的L23神经干细胞huwe1蛋白表达条带显著减弱、变细（P < 005）。与control组Huwe1蛋白的相对表达量比，Huwe1shRNA组Huwe1蛋白的相对表达量是control组的25%（P < 005）。与control 组比，control shRNA组和Huwe1shRNA组在慢病毒载体转染L23神经干细胞，L23神经干细胞存活率无明显下降（P>005) 结论 Huwe1 shRNA通过慢病毒载体转染L23神经干细胞，可以靶向沉默L23神经干细胞Huwe1基因，却不影响L23神经干细胞的存活率。