持续感染甲型肝炎病毒细胞株的建立和应用

用甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）ＨＭ１７５株感染恒河猴胚肾细胞系（Ｆｒｈｋ－４），经过连续传代培养，建立了一株持续感染ＨＡＶ的细胞株。通过１８６代的传代培养和制备ＨＡＶ抗原的实际应用，表明本株带毒培养细胞具有生长速度快、繁殖率高的特点，能大量表达ＨＡＶ抗原。１：４－１：６扩增培养，３～４天可以长成单层，培养７～１０天可以收获ＨＡＶ抗原，用于组装抗ＨＡＶＩｇＭ诊断试剂盒，该试剂盒与美国雅培公司（Ａｂｂｏｔｔ）试剂盒对照检测１４８份血清，总符合率９８．６５（１４６／１４８），与临床对照检测２１３６份病人血清，符合率为９８．９２％（２１１３／２１３６）。     

乙型肝炎病毒e抗原前C区基因变异的血清型和基因型分布特点研究

目的分析比较不同血清型和基因型的乙型肝炎病毒(HBV)e抗原前C区基因序列,了解其特点及差异。方法在12条不同血清型和30条不同基因型的HBV全序列中,比较e抗原前C区编码基因。同时用Blast程序查找并分析与e抗原前C区变异基因相似的核苷酸序列,试图比较不同序列与慢性病毒性肝炎病情的关系。结果e抗原前C区编码基因相对保守,仅在Adw血清型出现1个6核苷酸的插入突变,在B基因型出现1个核苷酸的突变;核苷酸Nt1896位变异(T-A)可出现在血清型Adr和Adw型,和A、B、C、D、G基因型;而Nt1858位(T-C)变异见于Adw血清型,和A、F、H基因型。结论前-C区基因变异主要有插入突变和点突变两种类型,两者在不同血清型和基因型的HBV基因组中有出现频率不同,而不同变异的临床意义可能有所差别。     

HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测方法的建立及应用

目的建立HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测的酶免疫检测方法,用于HIV感染的实验室诊断,缩短HIV感染的检测窗口期。方法制备抗HIVP24单克隆抗体和多克隆抗体,联合使用基因工程HIV1/2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的HIV1/2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物,建立联合检测HIV1/2抗体和P24抗原的ELISA方法,并对其特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。结果检测P24抗原质控品的灵敏度可达0.2ng/ml;检测187份HIV阳性血清、210份其他疾病患者血清和520份正常人血清,其敏感性和特异度分别为100%和99.62%。同时重复12次检测4份HIV阳性血清,变异系数均小于10%。结论本方法可以在1.5h内一步同时检出特异性HIV-1/2抗体和HIVP24抗原,缩短了HIV感染的检测窗口期,具备快速、简便、特异、敏感等优点,适用于HIV感染的实验室诊断和流行病学调查。     

呼肠病毒的生物学特征及其致病性

呼肠病毒科包括7个病毒属，其中与人类疾病相关的有呼肠病毒属、轮状病毒属和环状病毒属。呼肠病毒属于呼肠病毒科呼肠病毒属，它对于动物具有广泛的致病性。通常认为绝大多数人在感染呼肠病毒后是无症状的，少数人感染后可引起胃肠道疾病、上呼吸道疾病和神经系统疾病，较少的患者出现严重的并发症。虽然呼肠病毒与人类某种疾病的确切关系尚未最后确定，但早在1967年Tillotson等就曾报道呼肠病毒可导致人类致死性间质性肺炎的发生，并在SARS流行期间，一些研究显示SARS的发病可能与呼肠病毒的感染相关。     

布鲁氏菌OMP31 T-B联合表位抗原的免疫应答分析

目的：研究OMP31表位的抗原性和免疫应答特点,为布鲁氏菌表位疫苗的研制奠定基础。方法：利用生物信息软件筛选OMP31 T-B联合优势抗原表位,进一步合成肽段。用OMP31肽段免疫BALB/c小鼠,采用ELISA检测小鼠血清中特异性IgG1和IgG2a抗体水平,ELISPOT检测脾淋巴细胞中IFN-γ阳性的T淋巴细胞活化情况。结果：用OMP31合成肽段免疫BALB/c小鼠4次后,小鼠血清中IgG1和IgG2a抗体水平升高,小鼠脾淋巴细胞集落形成单元（SFU）增高。结论：OMP31 T-B联合表位抗原能增强小鼠Th1免疫应答和体液免疫应答,可以作为布鲁氏菌病的候选疫苗。     

肠道病毒71型（EV71）AH3株感染性克隆的构建与鉴定

目的 构建肠道病毒71型（Enterovirus71,EV71） AH3株的全基因序列感染性克隆.方法 通过分段扩增和酶切连接将EV71全基因组cDNA片段逐步克隆入PWSK29载体,构建含全病毒基因组序列的重组质粒.转染Vero细胞后,获得拯救病毒.经RT-PCR、酶切、测序、间接免疫荧光（IFA）等方法进行鉴定.结果 酶切鉴定结果与预期一致,序列分析显示为EV71基因;其转染Vero细胞后,可观察到典型的细胞病变;所获得的拯救子代病毒滴度（TCID50）为107.5;IFA检测可见感染细胞出现绿色荧光.结论 成功构建EV71全基因序列感染性克隆,为病毒致病机理及减毒疫苗的研究奠定基础.     

中国2004－2013年病毒性肝炎发病与死亡趋势分析

目的 探讨2004-2013年我国病毒性肝炎流行趋势及发病死亡规律。方法 对国家卫生和计划生育委员会2004-2013年发布的全国法定传染病疫情中的病毒性肝炎数据进行发病和死亡分析。结果 全国以贵州、云南、西藏、甘肃、青海、宁夏、新疆7个省份为高发区。病毒性肝炎的发病构成以乙型肝炎(80.63/10万)和丙型肝炎(9.68/10万)为主,分别占病毒性肝炎报告总发病例数的80.90%和9.25%.甲型、未分型肝炎报告发病数呈下降趋势,乙、丙、戊型肝炎的报告发病数均有一定程度的上升趋势。10年间,共报告病毒性肝炎死亡患者10 008例(年均死亡1 001例).甲、戊、未分型肝炎报告死亡数呈减少趋势;乙型肝炎报告死亡数波动减少,但所占构成比变化不大;丙型肝炎死亡报告数呈递增趋势。结论 2004-2013年我国病毒性肝炎发病率无下降趋势,乙型肝炎发病率仍维持在较高水平,丙型肝炎的发病率呈显着上升趋势;病毒性肝炎总体病死率和死亡率均呈下降趋势,乙型肝炎仍为病毒性肝炎死亡的主要构成,丙型肝炎死亡构成比呈明显上升趋势。因此,乙、丙型肝炎是我国病毒性肝炎的防治重点,西部7个高发病省份为防控的重点地区。     

基于网络药理学和分子对接技术探讨徐福松教授水陆二仙丹治疗早泄的作用机制

目的:基于网络药理学分析水陆二仙丹治疗早泄的潜在作用机制.方法:通过TCMSP数据库查询水陆二仙丹的核心药物芡实、金樱子的主要化学成分;设定口服生物利用度、类药性为筛选参数,寻找活性成分;通过DisGeNET、GeneCards、OMIM和TTD等数据库查找早泄相关疾病靶点;利用网站Venny2.1.0构建韦恩图筛选药...     

携带肠道病毒71型VP1基因的重组减毒沙门菌的构建和鉴定

目的 构建和鉴定能够稳定携带肠道病毒71型(EV71)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌,用于口服EV71 DNA疫苗的研发.方法 利用DNA重组技术,构建表达EV71 VP1蛋白的真核表达质粒VR-EV71 VP1,体外转染Vero细胞后检测目的 蛋白体外表达和抗原性,并将该质粒电转化至减毒伤寒沙门菌SL7027.结果 酶切鉴定证实构建含EV71 VP1基因的重组质粒,体外表达目的 蛋白具有较好的抗原性,并获得稳定携带该质粒的重组减毒伤寒沙门菌.结论 成功构建稳定携带肠道病毒71型VP1基因的减毒伤寒沙门菌,为下一步的疫苗研究打下了基础.