NIDRAN诱导脑胶质瘤细胞凋亡

目的　探讨宁得朗 (NIDRAN)对人脑胶质瘤细胞凋亡的诱导作用 .方法　用含 10 μmol· L- 1 NIDRAN的 RPMI16 40培养液 ,作用于 SHG44细胞 3h,收集细胞用于形态学检测 ,DNA电泳及流式细胞分析 .结果　 1形态学观察 :大部分瘤细胞体积缩小 ,核固缩 ,染色质浓缩在核模边缘呈月牙状聚集 ,有凋亡小体形成 . 2 DNA电泳 :在 80 0 bp以下可见明显的 DNA梯状带 . 3流式细胞分析 :出现典型的细胞凋亡峰 ,凋亡细胞占细胞总数的 32 .1% .结论　 NIDRAN可诱导人胶质瘤细胞发生凋亡 .     

Expression and significance of urokinase-type plasminogen activator in human gliomas

ＲｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｔｈｅｕＰＡ ｍｅｄｉａｔｅｄｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｓｙｓｔｅｍｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｍａｌｉｇｎａｎｔｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｂｅｈａｖｉｏｒａｎｄｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｓ     

脑胶质瘤患者尿激酶型纤溶酶原激活因子基因的表达

目的　研究尿激酶型纤溶酶原激活因子 (u PA)与人脑胶质瘤恶性生物学行为的关系 .方法　采用 Northern印迹分子杂交和免疫组化方法检测 43例人脑胶质瘤和 5例正常脑组织 u PA m RNA及蛋白的表达 ,并与临床生物学参数进行综合分析 .结果　上述组织或细胞均表达 2 .5 kb的 u PA m R-NA转录物 ,高级别胶质瘤较低级别和正常脑组织 u PA m R-NA表达水平明显增高 (P<0 .0 1 ) ,但低级别胶质瘤和正常脑组织 u PA m RNA表达水平无明显差异 (P>0 .0 5 ) .术后 1 8mo内复发和生存期小于 3a者 u PA m RNA表达显著高于术后 1 8mo无复发及生存期大于 3a者 (P<0 .0 1 ) ;靠近坏死区域的瘤细胞亦有 u PA m RNA表达 ,u PA m RNA表达水平与胶质瘤微血管数量呈正相关 (r=0 .5 6 ,P<0 .0 1 ) ,而与患者性别、年龄及肿瘤大小则无显著相关 .u PA蛋白主要分布在胶质母细胞瘤、间变性星形细胞瘤组织的瘤细胞及内皮细胞 ,低级别胶质瘤较少 .结论　 u PA基因表达可能与胶质瘤的恶性发展有关 ,对预测高级别胶质瘤的侵袭性及术后复发方面具有重要作用     

RNasin对脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的　探讨核糖核酸酶抑制因子 (RNasin)对脑胶质瘤生长的抑制作用及可能机理 .方法　从人胎盘组织中提取制备RNasin,体内外观察其对人 SHG44和大鼠 C6胶质瘤细胞生长的抑制作用 .结果　 (1)体外不同浓度的 RNasin对培养的 C6及SHG44胶质瘤细胞存活率无明显影响 ,与对照组比较无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;(2 )加入 RNasin后裸鼠体内 C6胶质瘤平均重量为 (1.72± 0 .184) g,平均大小 (直径 )为 (12 .84± 1.15 ) mm ;SHG44胶质瘤平均重量为 (1.0 12± 0 .174) g,平均大小为 (11.2 0± 1.2 1) mm,均与对照组有显著性差异 (P<0 .0 5 ) …     

DNA图像定量分析对星形胶质细胞瘤的预后判定

目的:探讨DNA图像定量分析对星形细胞瘤恶性程度判定的意义,以及对其预后判定的应用价值。方法;应用定量图像分析(QFIA)和流式细胞光度术(FCM),结合常规病理学检查方法,对80例星形胶质细胞瘤手术切除标本,进行DNA定量分析研究。结果:①不同病理分级的星形胶质细胞瘤,其DNA指数(DI)和细胞增殖指数(PI)分别为:Ⅰ级1.08,36.2%,Ⅱ级1.10,39.8%,Ⅲ级1.39,49.7%,Ⅳ级1.41,51.2％;②肿瘤异倍体发生率随分级的增高而增高;③患者存活时间随DI和PI值增高而缩短;④二倍体肿瘤的复发率明显低于异倍体、各级二倍体肿瘤预后优于异倍体,高分级的异倍体肿瘤复发率高,预后极差。结论:肿瘤细胞的倍性程度与增殖程度呈正相关,随DNA含量的增加,随异倍体发生率的增高,肿瘤复发率增高,术后生存时间缩短,这种相关性对于监测肿瘤复发,判断预后具有一定的临床意义。     

中枢神经系统肿瘤DNA图像定量分析特征

目的　研究 DNA图像定量分析对中枢神经系统良恶性肿瘤的辅助判定和应用价值 .方法　组织细胞化学方法结合图像分析技术 ,测定肿瘤细胞 DNA含量及 DNA倍体细胞分布状况 .结果　 18组 7种中枢神经系统最常见肿瘤细胞 DNA相对含量和 DNA指数分别为 :良性肿瘤 :脑膜瘤(3.30± 1.17) ,(1.36± 0 .32 ) ;垂体腺瘤 (3.5 2± 1.14) ,(1.46± 0 .39) ;听神经瘤 (3.18± 0 .94) ,(1.35± 0 .2 7) ;颅咽管瘤(3.44± 1.0 4) ,(1.32± 0 .2 3) ;低度恶性肿瘤 :室管膜瘤 (4 .40± 1.43) ,(1.5 8± 0 .2 8) ;星形细胞瘤 ～ 级 (4 .41± 1.10 ) ,(1.6 0± 0 .2 5 ) ;高度恶性肿瘤 :髓母细胞瘤 (5 .6 2± 2 .11) ,(2 .34± 0 .83) ;星形细胞瘤 ～ 级 (6 .6 2± 1.42 ) ,(2 .82±0 .48) . Q值法各组间两两比较显示 :低度和高度恶性肿瘤与良性肿瘤间存在显著的组别差异 (P<0 .0 1) ;低度恶性肿瘤与高度恶性肿瘤间存在显著的组别差异 (P<0 .0 5 ) . 2 DNA倍体细胞分布百分率 :恶性肿瘤与良性肿瘤间 ,低度恶性和高度恶性肿瘤间存在显著的组别差异 (P<0 .0 1) .结论　由高分化肿瘤至低分化肿瘤 DNA含量呈递增表现 ,肿瘤恶性程度与五倍体和超五倍体细胞百分率呈正相关 .DNA图像定量分析技术是辅助判定中枢神经系统良恶性肿     

小鼠局灶性脑损伤下丘脑室旁核神经元c-fos基因表达的机制及其意义

目的：探讨脑损伤后应激状态下室旁核（paraventricular nucleus,PVN)神经元中c-fos基因的表达机制及其意义。方法：成年雄性昆明小白鼠28只,随机分为7组,1组为正常对照组,其余6组为致伤组,以小鼠局灶性脑损伤模型为研究对象,采用原位杂交法对脑损伤后不同时间PVN神经元中c-fos基因表达状况进行检测。结果：脑损伤后5min,小鼠双侧PVN中有散在分布的c-fos阳性细胞,损伤后15min,c-fos阳性细胞呈低密度,较同期皮层神经元中密度要高,30min时达到最高密度,而后回到基线水平;损伤后24h仍有低密度表达,结论：脑损伤后机体处于应激状态,可以通过不同于皮层神经元的其他途径诱发PVN中c-fos基因表达。     

反应性胶质细胞增生、神经炎症与脑积水关系的实验研究北大核心CSCD

目的探究反应性胶质细胞增生、神经炎症与大鼠脑积水的关系。方法选取成年雄性SD大鼠35只,采用随机数字表法分为脑积水模型组（25只）、假手术组（5只）、正常假手术组（5只）。采用高岭土脑室内注射法建立脑积水模型,术后3周进行磁共振检查,抽取脑脊液进行白细胞介素-18（IL-18）的酶联免疫吸附测定（ELISA）检测,并对脑组织的神经胶原纤维酸性蛋白（glialfi—brillaryacidicprotein,GFAP）、同种异体移植炎症因子-1（allograftinflammatoryfactor-1,AIF-1）进行实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（wB）和免疫组织化学检测,结果行统计学分析。结果造模组均有脑积水形成,与正常组和假手术组相比,造模组大鼠侧脑室体积明显增大（P〈0．05）。GFAP、AIF1、IL-18表达量在脑积水大鼠中均升高,且差异有统计学意义（P〈0．05）。相关性分析显示GFAP、IL18与脑积水严重程度呈正相关。结论反应性胶质细胞增生和神经炎症与脑积水严重程度呈正相关,有潜力成为脑积水发生发展的评价指标。能否通过抗感染和抑制胶质增生治疗脑积水,成为今后研究的新方向。     

沉默HIF-1α基因对U87细胞增殖、侵袭及转移能力的影响

目的 观察沉默低氧诱导因子1α(HIF-1a)基因后对胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及转移能力的影响.方法 实验分3组,干扰组(转染表达HIF-1α-shRNA的质粒)、对照干扰组(转染阴性对照shRNA序列)及未处理组.干扰组利用前期构建的HIF-1α基因的短发夹RNA(shRNA)沉默HIF-1α基因,构建HIF-1α-shRNA慢病毒表达载体,在脂质体介导下转染人胶质母细胞瘤细胞U87.采用RT-PCR和Western blotting检测HIF-1α基因干扰效率,MTT法检测细胞生长增殖能力,迁移实验检测细胞的体外迁移能力,Transwell小室模型检测细胞的体外侵袭及转移能力.结果 RT-PCR和Western blotting实验证实,与对照干扰组及未处理组比较,干扰组细胞HIF-1αmRNA表达水平明显下降,蛋白条带明显减弱.MTT细胞增殖实验显示,干扰组细胞增殖水平较其他2组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell小室侵袭实验中,未处理组、对照干扰组、干扰组穿膜细胞数分别为(125.2±10.8)个、(118.3±8.3)个、(60.9±5.4)个,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIF-1α-shRNA能有效抑制U87细胞株HIF-1α mRNA及蛋白的表达,并能抑制U87细胞的增殖、侵袭及转移能力.

Abstract：

Objective To observe the influence of silencing hypoxia-inducible factor-1α(HIF-1α)gene on the proliferation, invasion and metastasis of glioblastoma U87 cells. Methods The samples were divided into 3 groups: blank group: samples without giving any treatments, control group: cells with empty shRNA vector, and experimental group: cells with HIF-1α-shRNA transfection complex. HIF-1α gene was silenced by shRNA constructed in early time; and HIF-1α-shRNA lentivirus vector was constructed in the experimental group, and then transfected into glioblastoma U87 cells with the mediation of liposome. The interference efficiency was detected by using RT-PCR and Western blotting, and cell proliferation was measured by MTT assay; cell migration in vitro was observed by migration test, and invasion and metastasis abilities were detected by Transwell booth model. Results As compared with those in cells of the control and blank groups, the mRNA and protein expressions of HIF-1α in cells of the experimental group were significantly decreased; MTT assay showed that the cell proliferation in the experimental group was significantly lower than that in the other 2 groups (P<0.05). The number of penetrating cells of the blank group, control group and experimental group in Transwell chamber invasion assay were (125.2±10.8), (118.3±8.3), (60.9±5.4), respectively, and significant differences were noted between each 2 groups (P<0.05). Conclusion The mRNA and protein levels of HIF-1α in U87 cells are efficiently depressed by HIF-1α-shRNA, and so are the proliferation, invasion and metastasis abilities of U87 cells.     

下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。